EVALUATION OF THE LOSS OF DESICCATION TOLERANCE AND NUCLEAR DNA AFTER GERMINATION

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1 7 AVALIAÇÃO DA PERDA DA TOLERÂNCIA À DESSECAÇÃO E DA QUANTIDADE DE DNA NUCLEAR EM SEMENTES DE Peltophorum dubium (SPRENG.) TAUBERT DURANTE E APÓS A GERMINAÇÃO 1 Cristine Crvlho Guimrães 2, José Mrcio Roch Fri 3, Julio Mi Oliveir 4, Edvldo Aprecido Amrl d Silv 5 RESUMO - O presente trblho teve por objetivo vlição d perd d tolerânci à dessecção (TD) em sementes de Peltophorum dubium durnte e pós germinção. As sementes form colocds pr germinr e, o tingirem 1, 3 e 5 mm de riz primári (68% de umidde), form desidrtds em sílic gel, té tingirem o gru de umidde inicil (8%), sendo em seguid reidrtds e vlids qunto à sobrevivênci (retomd do crescimento e formção de plântuls normis). Procedimento semelhnte foi dotdo pr os ensios relizdos durnte embebição, onde form mostrds 100 sementes dividids em qutro repetições de 25 pr cd um dos seguintes tempos de embebição: 12, 24, 48, 60 e 72 hors. Em seguid, form seleciondos diferentes pontos de interesse (12, 48 e 60 hors de embebição e rízes primáris com 1 mm de comprimento) pr determinção d quntidde de DNA nucler, fim de nlisr possível correlção entre início do ciclo celulr e perd d TD. Com relção o comportmento de sementes germinds submetids à secgem e reidrtção, pr os três comprimentos de rízes primáris mostrds, não houve sobrevivênci. Foi observd qued progressiv n sobrevivênci de sementes de Peltophorum dubium relciond o tempo de embebição, e posterior secgem e reidrtção, sugerindo que perd d TD dest espécie contece nos estágios iniciis d germinção, ntes d protrusão d rdícul. Sementes embebids por 12 h, 24 h, 48 h, 60 h, 72 h e quels germinds, com 1 mm de comprimento rdiculr, presentrm índices iguis 98%, 93%, 83%, 35%, 17% e 0% de sobrevivênci respectivmente. Os estudos relciondos o conteúdo de DNA nucler não demonstrm correlção entre retomd do ciclo celulr e perd d TD. Termos pr indexção: DNA nucler, ciclo celulr, Peltophorum dubium. EVALUATION OF THE LOSS OF DESICCATION TOLERANCE AND NUCLEAR DNA CONTENT IN SEEDS OF Peltophorum dubium (SPRENG.) TAUBERT DURING AND AFTER GERMINATION ABSTRACT - The objective of this study ws to investigte the loss of desicction tolernce (DT) in seeds of Peltophorum dubium (Sprengel) Tubert, during nd fter germintion. P. dubium seeds were sown, removed fter germintion when the primry root lengths reched 1, 3 nd 5 mm 1 Submetido em 10/02/10. Aceito pr publicção em 03/05/10. Prte d Dissertção de Mestrdo do primeiro utor presentd Universidde Federl de Lvrs. 2 Biólog, Mestre em Engenhri Florestl, UFLA. criscgbiologi@ hotmil.com. 3 Eng. Florestl, Dr. Professor, Deprtmento de Ciêncis Florestis, UFLA, Cix Postl 3037, Lvrs, jmfri@dcf.ufl.br 4 Biólogo, Mestre em Engenhri Florestl, UFLA. juliomi2@hotmil.com. 5 Eng. Agrônomo, Dr. Professor, UNESP Botuctu.Cix Postl 237, , Botuctu-SP, mrldsilv@fc.unesp.br Revist Brsileir de Sementes, vol. 33, nº 2 p , 11

2 8 C. C. GUIMARÃES et l. (68% wter content), dehydrted in silic gel until they hd reched their initil moisture content (8%), rehydrted nd evluted for survivl (resumption of growth nd development of norml seedlings). This procedure ws lso followed in the ssys during imbibition, where 4 replictions of 25 seeds were subjected to 12, 24, 48, 60 nd 72 hours of imbibition. Subsequently, different points were selected (12, 48 nd 60 hours of imbibition nd rdicles 1 mm long) to evlute the nucler DNA content in order to relte the beginning of the cell cycle with the loss of DT. For the three rdicle lengths smpled, there ws no survivl of seeds which hd been dried nd rehydrted. There ws progressive decrese in the survivl of P.dubium seeds relted to the imbibition period nd subsequent drying nd rehydrtion, suggesting tht the loss of DT occurs erly in germintion before rdicle protrusion. Seeds imbibed for 12, 24, 48, 60, 72 hours nd germinted seeds with 1 mm long rdicles showed 98%, 93%, 83%, 35%, 17% nd 0% survivl, respectively. The ssys with the nucler DNA content do not show ny reltionship between the resumption of the cell cycle nd the loss of DT. Index terms: Cell cycle, nucler DNA, Peltophorum dubium. INTRODUÇÃO As sementes seguem três pdrões qunto o comportmento no rmzenmento: ortodoxo, intermediário e reclcitrnte (Roberts, 1973; Ellis et l., 1990). As sementes ortodoxs são tolerntes à dessecção (TD) teores de águ em torno de 5% e temperturs bixs. Sementes de comportmento intermediário não tolerm desidrtção bixo de 10 12,5% de teor de águ, e sementes reclcitrntes são sensíveis à redução do teor de águ bixo de %. Deltour e Brsy (1985) sugerirm que s céluls são mis sensíveis o estresse qundo se encontrm com seu ciclo celulr tivo, ou sej, qundo em processo de síntese de DNA ou de divisão celulr. A síntese e replicção de DNA ocorrem durnte interfse e nest fse existe um período de quiescênci (G0) seguido de um fse de crescimento e pré-síntese (G1), durnte qul os núcleos de céluls diplóides contêm um vlor rbitrário de DNA (2C; referente à quntidde de DNA por núcleo). Posteriormente, síntese de DNA ocorre durnte Fse S (síntese) e por último Fse G2, n qul os núcleos ssumem conteúdo de DNA equivlentes 4C, indicndo ocorrênci de replicção de DNA em preprção pr mitose (Cstro e Hilhorst, 00). Em sum, o longmento d rdícul dentro d semente ocorre como resultdo d embebição e retivção do metbolismo e do ciclo celulr, podendo envolver tnto expnsão como divisão celulr (Górnik, 1997; Cstro e Hilhorst, 04; Mrcos Filho, 05), o que por su vez pode estr vinculdo à mior sensibilidde à dessecção ou perd de tolerânci à dessecção durnte o progresso do processo germintivo. Dinte d dificuldde de mnipulção de sementes reclcitrntes, devido su rápid perd de vibilidde durnte o rmzenmento, sementes ortodoxs germinds vem sendo usds em estudos relciondos à tolerânci/sensibilidde à dessecção. A rzão é que sementes ortodoxs em processo de germinção perdem tolerânci à desidrtção, pssndo se comportr como reclcitrntes. Ests semelhnçs podem fcilitr relizção de estudos comprtivos e conferir mior flexibilidde n concepção de experimentos que vism elucidr tributos estruturis e bioquímicos ssocidos à sensibilidde à dessecção e comportmento durnte o rmzenmento (Fri et l., 05). A espécie em estudo, Peltophorum dubium (Spreng.) Tubert pertence à fmíli Leguminose subfmíli Ceslpinioidee. É um espécie rbóre ntiv do Brsil conhecid populrmente como cnfístul, tmboril brvo, guruci, ngico mrelo, dentre outros. Ocorre nturlmente em regiões d Bhi, Rio de Jneiro, Mins Geris e Mto Grosso do Sul té o Prná (Lorenzi, 1992). Sus sementes são ortodoxs, podendo ssim, serem utilizds como ferrment pr o estudo d sensibilidde à dessecção. Revist Brsileir de Sementes, vol. 33, nº 2 p , 11

3 TOLERÂNCIA À DESSECAÇÃO EM Peltophorum dubium (SPRENG.) TAUBERT 9 Sbendo-se d necessidde de novos estudos pr um mior entendimento dos processos fisiológicos envolvidos n sensibilidde à dessecção de sementes, objetivou-se com esse trblho vlir perd d tolerânci à dessecção em sementes de Peltophorum dubium, durnte e pós germinção, e su possível relção com o conteúdo de DNA ns céluls d rdícul durnte embebição, como prâmetro indictivo do nível de tividde do ciclo celulr. MATERIAL E MÉTODOS Mteril vegetl: A colet dos frutos mduros foi relizd em cinco mtrizes loclizds no Cmpus d Universidde Federl de Lvrs (UFLA), MG, sendo s sementes beneficids no Viveiro Florestl. O beneficimento foi relizdo mnulmente, com quebr dos frutos e uso de peneirs pr seprção ds sementes. Após este procedimento, pr retird de impurezs presentes n mostr, form utilizdos soprdores d mrc South Dkot e Generl. Os experimentos form relizdos no Lbortório de Sementes Florestis, do Deprtmento de Ciêncis Florestis, d UFLA. Determinção do gru de umidde: O gru de umidde ds sementes foi determindo pelo método de estuf 103 ± 2 ºC, por 17 hors (Brsil, 09), com 4 repetições de 10 sementes (22 g) cd. O cálculo foi feito n bse úmid, sendo o gru de umidde expresso em porcentgem. Curv de embebição: Pr determinr o pdrão de embebição em águ pels sementes, umidde inicil foi determind como descrito nteriormente, e s curvs elbords utilizndo-se dus repetições com 10 sementes cd, sendo cd semente pesd individulmente pr determinção d evolução d hidrtção. A curv foi elbord considerndo-se sementes com e sem quebr de dormênci, pr comprção do pdrão de embebição em mbos os csos. A quebr de dormênci foi relizd em águ fervente, sendo s sementes em seguid lvds em solução de hipoclorito de sódio em 1% por 5 minutos. Posteriormente s sementes form colocds pr embeber em bndejs plástics tendo como substrto dus folhs de ppel mt borrão sturdo com águ destild e condiciondo em germindores reguldos em 25 ºC e fotoperíodo 12 hors. A cd três hors s sementes form removids dos recipientes e pesds em blnç com precisão de 0,01 g, durnte três dis, período este em que se verificou protrusão rdiculr d mior prte ds sementes. Pr s mostrs onde não foi relizd quebr de dormênci tegumentr s pesgens form relizds cd 24 hors, durnte três dis. Crcterizção d perd d tolerânci à dessecção durnte e pós germinção: Pr ess crcterizção, s sementes tmbém form submetids trtmento pr quebr de dormênci tegumentr e lvds em solução de hipoclorito de sódio, como descrito nteriormente. Em seguid, form colocds sobre ppel umedecido com águ destild em bndejs plástics, em germindores (Mrconi tipo MA 400) reguldos 25 ºC, com fotoperíodo de 12 hors (Perez et l., 1999). Form mostrds 100 sementes dividids em qutro repetições de 25 nos trtmentos referentes o tempo de embebição: 12 h, 24 h, 48 h, 60 h e 72 h de embebição. Nos trtmentos compostos por sementes germinds, com rízes primáris de 1, 3 e 5 mm de comprimento, form mostrds 80 sementes, dividids em qutro repetições de. Em seguid s sementes form desidrtds té tingirem o gru de umidde inicil. A desidrtção foi feit em cixs tipo gerbox, vedds com filme plástico, colocndo-se s sementes sobre um teldo, tendo um cmd de sílic gel o fundo, sob tempertur de C, como definid por resultdos preliminres. Durnte desidrtção form relizds pesgens sucessivs té que o peso encontrdo coincidisse com o peso desejdo, correspondente o gru de umidde, por meio d expressão propost por Cromrty et l. (1985). Após desidrtção, s sementes form pré-umedecids em r úmido (100 % UR) por 24 hors em 25 C pr prevenir dnos cusdos pel embebição (Crowe et l., 1989). Posteriormente s sementes pré-umedecids form reidrtds em gerbox, contendo ppel de filtro sturdo com águ como substrto e trnsferids pr germindores (Mrconi tipo MA 400) reguldos 25 ºC, com fotoperíodo de 12 hors. As sementes germinds que continurm seu desenvolvimento e originrm plântuls normis form considerds tolerntes à dessecção (TD). As que não tolerrm dessecção, ou sej, não retomrm seu desenvolvimento e, portnto, não originrm plântuls normis, form considerds como morts. Quntificção do conteúdo de DNA nucler: A prtir dos ddos de sobrevivênci, obtidos com vlição d tolerânci à dessecção durnte e pós germinção, form seleciondos diferentes pontos de interesse pr quntificção do conteúdo de DNA nucler por citometri de fluxo, sendo eles: 12, 48, 60 hors de Revist Brsileir de Sementes, vol. 33, nº 2 p , 11

4 210 C. C. GUIMARÃES et l. embebição e rízes com 1,0 mm de comprimento. As nálises citométrics form relizds no Lbortório de Citogenétic e Citometri Vegetl, do Deprtmento de Biologi Gerl (DBG) d Universidde Federl de Viços (MG). Pr ests nálises form usds suspensões de núcleos intctos obtidos de rdículs e rízes primáris de Peltophorum dubium. As mostrs form preprds de cordo com o proposto por Crvlho et l. (08) e nlisds em um citômetro de fluxo Prtec PAS (Prtec _ Gmbh, Munster, Germny) equipdo com um fonte de lser e um série de filtros (TK 4, TK 560). Pr cd trtmento form nlisdos, no mínimo, 5000 núcleos. RESULTADOS E DISCUSSÃO O umento do gru de umidde ds sementes (Figur 1) submetids o trtmento de quebr de dormênci indic evolução n bsorção de águ pels mesms seguindo o pdrão trifásico proposto por Bewley e Blck (1994). A umidde inicil ds sementes foi de 6% e umidde finl dests chegou níveis próximos os 70%, trnscorrids 72 hors. Sbe-se que velocidde d germinção é determind principlmente pel bsorção de águ (Mrcos Filho, 05), fto este que pode ser certificdo correlcionndo-se curv de embebição dest espécie com germinção d mesm. FIGURA 1. Curv de embebição de sementes de Pelthoporum dubium, com (, linh inteir) e sem trtmento pré-germintivo ( ), sob tempertur de 25º C e fotoperíodo de 12 hors. A set indic o momento d protrusão rdiculr. A curv obtid presentou velocidde de bsorção lent ns primeirs hors d Fse I de embebição, com durção médi de 36 hors, fto este que pode ser explicdo pel dormênci impost pelo tegumento, comum em sementes d fmíli Leguminose (Binchetti e Rmos, 1982). Embor tenh sido relizd quebr de dormênci tegumentr s sementes não form deixds imerss em águ por 24 hors e sim por 30 minutos, o que pode ter contribuído pr o trso n bsorção hídric, devido o lento molecimento do tegumento. Ao finl dest fse s sementes tingirm proximdmente 60% de teor de águ. Em seguid iniciou-se Fse II, com durção de proximdmente 35 hors, crcterizd pel redução d velocidde de hidrtção indicdo pelo pltô observdo n curv. De cordo com Bewley (1997), normlmente Fse II dur té dez vezes mis que Fse I. Pr sementes de Pelthoporum dubium mbs s fses tiverm durção semelhnte e, como citdo nteriormente, esse fto pode estr relciondo à dormênci impost pelo tegumento que impede, ou dificult, bsorção de águ pels sementes n fse I d curv de embebição. A protrusão rdiculr pôde ser observd, pr miori ds sementes, no início d Fse III, que começou prtir de proximdmente 70 hors. Segundo Bewley (1997), o início dest fse é mrcdo pel retomd do crescimento d rdícul e crcterizd pelos processos de elongção e divisão celulr. Pr sementes ns quis não foi relizdo o trtmento de quebr de dormênci tegumentr não foi observdo umento d mss fresc, indicndo que não houve bsorção de águ pels mesms. Assim, conclui-se que o molecimento do tegumento, promovido pelo trtmento pré-germintivo, propici um mior bsorção de águ pels sementes, resultndo em celerção e uniformizção do processo germintivo. Os resultdos referentes à sobrevivênci de sementes de Peltophorum dubium, com diferentes comprimentos de rízes primáris, qundo submetids à secgem em sílic gel estão dispostos n Figur 2. Foi observd lt mortlidde de sementes pr os três comprimentos d riz primári mostrdos, sendo eles 1 mm, 3 mm e 5 mm, indicndo que mecnismos ligdos à tolerânci à dessecção, presentes em sementes ortodoxs mdurs, são destivdos ou perdidos à medid que os processos pósgermintivos vnçm, contribuindo pr o umento d sensibilidde à dessecção. Qundo secs o teor de águ inicil, sementes com 1, 3 e 5 mm de comprimento de riz primári mntiverm lts txs de mortlidde (91%, 96% e 100%), demonstrndo Revist Brsileir de Sementes, vol. 33, nº 2 p , 11

5 TOLERÂNCIA À DESSECAÇÃO EM Peltophorum dubium (SPRENG.) TAUBERT 211 que perd d tolerânci à desidrtção contece nos estágios iniciis de germinção de sementes dest espécie. Foi observd retomd do crescimento pr um bix porcentgem de sementes com comprimento rdiculr de 1 e 3 mm (9% e 4% respectivmente), entretnto ests resultrm em plântuls normis, fto este que rtific os dnos cusdos pel rápid retird de águ ds sementes, propicid pel sílic gel. Pr nenhum dos comprimentos d riz primári houve retomd do crescimento e posterior formção de plântuls normis. % mis concentrdos umentndo s reções químics destrutivs; lguns solutos podem cristlizr, inici-se desnturção ds proteíns e ruptur ds membrns celulres (Brbedo e Bili, 1998); conseqüêncis ests que podem explicr usênci de plântuls normis nos três comprimentos de riz primári resultntes d germinção de sementes de Peltophorum dubium qundo submetids à secgem rápid (Figur 2). Sbe-se que tolerânci de sementes à dessecção decresce à medid que germinção vnç, sendo inibid ou perdid gerlmente prtir d protrusão rdiculr (Bewley e Blck, 1994), podendo vrir entre espécies. Como demonstrdo nteriormente, sementes de Peltophorum dubium perderm ptidão em reprr os dnos cusdos pel secgem concomitntemente protrusão rdiculr, indicndo que perd d tolerânci à dessecção iniciou durnte embebição. A tolerânci desidrtção nest espécie foi grdtivmente perdid com o vnço d hidrtção ds sementes (Figur 3). 0 1 mm 3 mm 5 mm Comprimento de riz primári (mm) FIGURA 2. Porcentgem de sobrevivênci de sementes germinds de Peltophorum dubium, com diferentes comprimentos d riz primári, submetids à desidrtção em sílic gel por 72 hors e subsequente reidrtção. Sementes germinds que originrm plântuls normis (colun pret), sementes germinds que não sobreviverm (colun cinz clro) e sementes germinds que originrm plântuls normis (colun cinz escuro). A tolerânci à dessecção é um fenômeno complexo, envolvendo interção de justes metbólicos e estruturis, permitindo que s céluls resistm perds consideráveis de águ sem ocorrênci de prejuízos centudos (Mrcos Filho, 05). Qundo céluls não tolerntes à dessecção são desidrtds, lgums conseqüêncis são observds: seus solutos podem ficr % c c c b b b b Tempo de embebição (hors) FIGURA 3. Porcentgem de sobrevivênci de sementes de Peltophorum dubium, submetids diferentes períodos de embebição em águ e posterior secgem em sílic gel por 72 hors. Sementes germinds ( ), Sementes morts ( ) e Formção de plântuls normis ( ). As médis seguids pel mesm letr ns linhs não diferem esttisticmente entre si os 5% de probbilidde, pelo Teste de Tukey. b b c Revist Brsileir de Sementes, vol. 33, nº 2 p , 11

6 212 C. C. GUIMARÃES et l. Nos estágios iniciis d germinção (12 e 24 hors de embebição), secgem nos níveis iniciis de teor de águ (proximdmente 10%) não ocsionou dnos às sementes, que mntiverm os índices de sobrevivênci cim de 90%. Com 48 hors, fse II de embebição, foi observd mortlidde de sementes e desenvolvimento de plântuls normis (9% e 8% respectivmente), porém ests ind permnecerm com vlores ltos de sobrevivênci (83%). Segundo Bewley e Blck (1994), tolerânci ds sementes reduções nos níveis de águ decresce com o decorrer ds Fses I e II de embebição, sendo perdid no início ou pós Fse III. Est firmção corrobor com os resultdos obtidos neste experimento, onde foi observdo umento significtivo d mortlidde de sementes (76%) qundo ests se encontrvm n fronteir ds Fses II e III (72 hors) de embebição. A fse intolernte se centuou, portnto, com proximção d protrusão rdiculr e qundo est ocorreu, s sementes perderm integrlmente tolerânci à desidrtção, exibindo 100% de mortlidde. Diversos utores obtiverm resultdos semelhntes no que se refere o umento d sensibilidde à dessecção durnte hidrtção. Em experimentos com Pisum stivum (Reisdorph e Koster, 1999) e Triticum estivum (Mizek et l., 01) consttou-se redução n sobrevivênci de sementes dests espécies qundo submetids à hidrtção e posterior secgem. As rzões d conversão do estdo de tolerânci pr o de sensibilidde à dessecção ind não são integrlmente esclrecids, ms gerlmente coincidem com o nível de tividde ds céluls embrionáris, especilmente s d extremidde rdiculr. Ns sementes em processo germintivo, em gerl, rdícul é primeir estrutur perder tolerânci à dessecção (Buitink et l., 03). Reisdorph e Koster (1999), estudndo perd progressiv d TD em sementes germinds de Pisum stivum, encontrrm mior sensibilidde n região d riz primári, demonstrndo ser est primeir sofrer dnos por secgem. Assim, diversos utores obtiverm sucesso em trblhos utilizndo rdículs como modelo experimentl, pr vlição de lterções ocorrids durnte perd d tolerânci à dessecção, dentre eles Buitink et l. (03), Fri et l. (05), Vieir (08) e Msetto (08). Em estudos com diferentes espécies, utores verificrm bixo índice inicil e posterior incremento significtivo no número de céluls com conteúdo 4C no decorrer d embebição (de Cstro et l., 00; Brrôco et l., 05; Silv et l., 08) e encontrrm relção entre este evento e sensibilidde o estresse, entretnto est correlção ind não está completmente esclrecid (Deltour e Brsy, 1985; Srcco et l., 1995). Deltour e Brsy (1985) supuserm que s céluls com conteúdo 2C de DNA nucler oferecem menor susceptibilidde pr ftores indutores de mutções em relção às com conteúdo 4C. Atrvés ds nálises citométrics, relizds em rdículs de Peltophorm dubium, obtids prtir de sementes embebids por diferentes períodos, pôde ser observdo lto conteúdo de núcleos 4C (proximdmente 40%) durnte o processo germintivo (Figur 4). Este resultdo sugere que, o finl do desenvolvimento dois bloqueios ocorrem: um n fronteir entre Fse G2 e Mitose e outro n Fse G1, mntendo s céluls com conteúdo 2C n fse pré- sintétic, como observdo em sementes de Medicgo trunctul (Fri et l., 05). Conteúdo de DNA (%) Sobrevivênci (%) Tempo de embebição (hors) FIGURA 4. Conteúdo de DNA nucler em rdículs de sementes de Peltophorum dubium. Frção de céluls com conteúdo de DNA nucler 2C ( ), 4C ( ) e sobrevivênci de sementes embebids e posteriormente secs e reidrtds (coluns). As médis seguids pel mesm letr ns linhs não diferem esttisticmente entre si os 5% de probbilidde, pelo teste de Tukey. Em relção às sementes ortodoxs, sbe-se que miori ds céluls meristemátics está pres n fse Revist Brsileir de Sementes, vol. 33, nº 2 p , 11

7 TOLERÂNCIA À DESSECAÇÃO EM Peltophorum dubium (SPRENG.) TAUBERT 213 G1, crcterizd pel usênci de sinis que fvorecem síntese de DNA (Vázquez-Rmos e Sánchez, 03). Entretnto, foi reportdo pr lgums espécies, dentre els Medicgo trunctul (Fri et l., 05) e Phseolus vulgris (Bino et l., 1993) elevdo conteúdo 4C de DNA nucler o finl d mturção e início d embebição. Embor tenh sido hipotetizdo que céluls com conteúdo 4C são mis susceptíveis possíveis mutções, e ssim tornm-se mis sensíveis estresses, dentre eles dessecção, pr lgums espécies intermediáris e reclcitrntes, como Cstne stiv (Bino et l., 1993), Ing ver (Fri et l., 04) e Coffe rbic (Silv et l., 08) foi mostrdo elevdo índice de núcleos com conteúdo 2C de DNA. A mplitude de resultdos demonstr que o conhecimento dos eventos do ciclo celulr, e su importânci pr germinção e tolerânci estresse, ind são escssos e frgmentários, e que diferentes espécies podem ter desenvolvido mecnismos únicos de controle, dptds às crcterístics específics de germinção e hbitt (Bino et l., 1993; Vázquez- Rmos e Sánchez, 03; Fri et l., 05). Conforme citdo nteriormente, em grnde prte ds espécies estudds, dentre els Cpsicum nnuum (Portis et l., 1999), Lycopersicon esculentum (de Cstro et l., 00) e Coffe rbic (Silv et l., 08) foi observdo umento significtivo no número de céluls com conteúdo 4C durnte o umedecimento ds sementes, indicndo que ests entrrm n fse de síntese de DNA concomitntemente com hidrtção. No entnto, embebição não provoc imedit retivção do ciclo celulr. Em vez disso, há um trso de té lgums hors ntes d fse S tornr-se evidente (Vázquez-Rmos e Sánchez, 03). A long trnsição se dá provvelmente entre fse G0/G1 devido à necessidde de recuperr dnos celulres cumuldos durnte mturção (Osborne, 1983). Contudo, pr sementes de Peltophorum dubium não houve evidênci d ocorrênci d replicção de DNA durnte embebição (Figur 5), já que os níveis de 2C e 4C mntiverm-se inlterdos. Estes resultdos demonstrm que, sementes dest espécie, permnecem press em determinds fses do ciclo celulr durnte tod embebição e que perd d tolerânci à dessecção e protrusão rdiculr não podem ser correlcionds o início do ciclo celulr. Fri et l. (05), em trblho utilizndo sementes de Medicgo trunctul, igulmente observrm protrusão rdiculr e perd d TD nteriormente retomd do ciclo celulr. Pr sementes dest espécie tmbém foi reltd constânci nos índices de conteúdo 2C e 4C de DNA nucler, durnte e pós germinção, sendo observdo incremento significtivo no conteúdo 4C pens qundo s rízes primáris tingirm 3 mm de comprimento (ddo não mostrdo). Embor sej usulmente firmdo que protrusão rdiculr contece concomitntemente à síntese de DNA, Górnik et l (1997) demonstrrm que sementes de repolho (Brssic olerce L. vr. Cpitt L.) exibem protrusão rdiculr mesmo pós incubção dests em hidroxiurei, um inibidor d Fse S do ciclo celulr. A quntificção de DNA nucler em céluls d pont de rdícul dests sementes exibiu um pdrão semelhnte o ds sementes secs, indicndo um bloqueio totl d tividde de divisão celulr. Esse resultdo levou à conclusão de que replicção do DNA não é necessrimente um condição prévi pr protrusão rdiculr, ssim como observdo no presente estudo com sementes de Peltophorum dubium. CONCLUSÕES Sementes de Peltophorum dubium (Spreng.) Tubert perdem tolerânci à dessecção (TD) nos estágios iniciis de germinção, ssim como descrito pr s demis espécies com comportmento ortodoxo. Em sementes de Peltophorum dubium foi evidencid redução grdul d TD com o vnço d embebição e complet perd d cpcidde de sobreviver à desidrtção qundo observd protrusão rdiculr. Não foi consttd, pels nálises citométrics, umento d síntese de DNA nucler em rdículs de sementes de Peltophorum dubium durnte germinção, não sendo possível, portnto, correlcionr retomd do ciclo celulr com perd d tolerânci à dessecção. Sementes dest espécie são disperss com lto conteúdo de DNA nucler 4C (proximdmente 40%) e este índice permnece constnte o longo d embebição e com protrusão rdiculr com 1 mm de comprimento. AGRADECIMENTOS À Fundção de Ampro à Pesquis do Estdo de São Pulo (FAPESP), processo 05/ , à Fundção de Ampro à Pesquis do Estdo de Mins Geris (FAPEMIG) e o Conselho Ncionl de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), pelo poio finnceiro. Ao Professor Crlos Roberto de Crvlho (Universidde Federl de Viços), pelo poio ns nálises de citometri de fluxo. Revist Brsileir de Sementes, vol. 33, nº 2 p , 11

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