Mieloma Múltiplo. por Citometria de Fluxo. Dra Maura R Valério Ikoma Laboratório de Citometria de Fluxo
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- Cármen das Neves Bonilha
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1 Mieloma Múltiplo Doença a Residual MínimaM por Citometria de Fluxo Dra Maura R Valério Ikoma Laboratório de Citometria de Fluxo
2 MONITORAMENTO DE DRM Avaliação rápida do potencial de resposta terapêutica Forte parâmetro prognóstico Detecção precoce de recidiva PODE SER A BASE PARA ESTABELECER TERAPÊUTICA ADAPTADA AO RISCO EM MIELOMA MÚLTIPLOM
3 MIELOMA MÚLTIPLOM PROGNÓSTICO CONFORME DRM PRÉ E PÓS S TCTH DRM - / DRM SLP DRM + / DRM DRM + / DRM + DRM - / DRM SG DRM + / DRM DRM + / DRM + Paiva et al. Blood, 2008; 112 (10):
4 DRM D+ 100 PÓS P S TCTH POR CF FATOR PROGNÓSTICO INDEPENDENTE MAIS IMPORTANTE DRM - DRM + PFS = 71 meses (60% / 5 anos) OS = NA ( 82% / 5 anos) PFS: Ifx+ = mediana 65 meses PFS = 37 meses (22% /5anos) (p <0,001) OS = 89 meses (60% / 5 anos) (p <0,002) PFS: Ifx neg = mediana 36 meses PFS : Ifx neg = mediana 71 meses DRM+ x DRM RR Progressão = 3,64 (p= 0,002) RR Óbito = 2.02 (p = 0,02) Paiva et al. Blood, 2008; 112 (10):
5 DRM D+ 100 PÓS P S TCTH POR CF FATOR PROGNÓSTICO INDEPENDENTE MAIS IMPORTANTE DRM - DRM + PFS = 71 meses (60% / 5 anos) OS = NA ( 82% / 5 anos) PFS: Ifx+ = mediana 65 meses PFS = 37 meses (22% /5anos) (p <0,001) OS = 89 meses (60% / 5 anos) (p <0,002) PFS: Ifx neg = mediana 36 meses PFS : Ifx neg = mediana 71 meses DRM+ x DRM RR Progressão = 3,64 (p= 0,002) RR Óbito = 2.02 (p = 0,02) Paiva et al. Blood, 2008; 112 (10):
6 DRM EM PACIENTES NÃO N O CANDIDATOS AO TCTH 102 pacientes > 65 anos recém diagnosticados RC redução componente M em > 70% com 6 ciclos de tratamento RC versus RC estrita (relação normal cadeias leves séricas livres - sflc) versus RI DRM neg com IF +: componente M desaparecia nas outras avaliaçõ ções DRM + com IF neg: reaparecimento componente M em 3 meses DRM + com sflc anormal: progressão o de doença a em 13 meses Paiva B et al,, J Clin Oncol,, ;29(12):
7 DISCREPÂNCIAS DE QUANTIFICAÇÃ ÇÃO DE PLASMÓCITOS PELA MORFOLOGIA E CITOMETRIA DE FLUXO Qualidade da amostra (diluição) Distribuição irregular dos plasmócitos na MO tratada Moléculas de adesão
8 MARCADORES PARA IDENTIFICAÇÃ ÇÃO O E QUANTIFICAÇÃ ÇÃO O DE POPULAÇÃ ÇÃO PLASMOCITÁRIA CD 38 CD 138 CD 45
9 MARCADORES ÚTEIS PARA DETECÇÃ ÇÃO O DE PLASMÓCITOS ABERRANTES EM MIELOMA MÚLTIPLOM ANTÍGENOS Expressão NORMAL Expressão ALTERADA %MM com expressão alterada Requisitos para DRM CD 19 + (>70%) - 95% Essencial CD 56 - (> 85%) ++ 75% Essencial CD 20 - (100%) + 10% Preferível CD (100%) + 30% Preferível CD 28 - /+fraco (100%) % Recomendável CD /+ fraco NA Recomendável CD 27 ++(100%) -/+ fraco 40-50% Recomendável Rawstron et al. EMN Consensus. Haematologica,, 2008; 93(3):431-8
10 PESQUISA DE DRM METODOLOGIA Painel 4 cores: 1) CD 19FITC/ CD 56PE / CD 45PerCP /CD38 APC 2) clambda FITC / ckappa PE / C45PerCP/ CD 38 APC Técnica: Lise Wash Fixação e permeabilização para as Ig citoplasmáticas Gate : CD 38 x SSC Aquisição de de eventos totais: n o mínimo de eventos para definição de população de plasmócitos = 100 1º passo: determinar no total de plasmócitos na amostra de MO 2º passo: % de plasmócitos anormais do total de plasmócitos da MO
11 DETECÇÃ ÇÃO O DE DRM EM MIELOMA MÚLTIPLOM PLASMÓCITOS TOTAIS DA MO = 0,68% S S C C D 5 6 Plasmócitos nls (CD 56 -) = 14% DRM = 86% (CD 56+) = 0,6% CD CD 45 CD 19
12 GATE PARA DRM EM CD 38+ GATE : eventos Mínimo = 100 plasmócitos
13 MM CD 56 negativo, clonalidade Kappa PLASMÓCITOS TOTAIS = 0,88%
14 Limitaçõ ções da CF para Pesquisa de DRM em Mieloma Múltiplo Qualidade da amostra Citômetro de fluxo com menos 4 de cores Perdas de expressões ou superexpressões de marcadores após tratamento (até 78%) Sensibilidade : 10-4 = 0,01%
15 DRM em portadores de Mieloma Múltiplo Avaliaçã ção o pré e pós p s TCTH Serviço o de TMO HAC Jau (janeiro/2008 a setembro/2011) Faixa etária: 33 a 92 anos N o pacientes: 138 (93 elegíveis para TCTH) N o exames: 225 (143 com DRM e 82 sem DRM) Das 143 DRM+: 31 expressão aberrante de marcadores CD 56 / CD 45/ CD definidas pela clonalidade 91 por ambos 62 pacientes tratados, sem fenotipagem ao diagnóstico DRM+ pré e/ou pós TCTH: 17 pacientes por fenótipo aberrante 7 pacientes DRM definida pela monoclonalidade 38 expressavam ambos Nível mínimo de detecção: 0,004%
16 CASO CLÍNICO JHG, 42 anos, gênero masculino Diagnóstico de Mieloma Múltiplo IIb (Durie Salmon) e ISS II em abril/ 2009 MO = 35% de plasmócitos EPS: pico monoclonal γ = 5,9g/dL Cadeias leves urinárias negativas β2 micro = 4 mg/ dl Alb =2,3g/dL DHL = 156U/L Cr = 2,0mg/dL Ca++ = 8,9 mg/dl Hb = 10,1g/dL, Leucócitos = 5700/ mm 3 Plaquetas = / mm 3 Lesões osteolíticas em coluna e bacia, lesões infiltrativas de T5 a L2, colapsos de L1 e L2 Utilizou Dexa Thal por 6 meses Em novembro/2009: MO = 10% plasmócitos EPS = pico monoclonal γ = 4,37g/dL Realizou 1 ciclo de VAD e mantido com pulsos de Dexa. Encaminhado para TCTH autólogo em abril/ MO < 1% de plasmócitos
17 CASO CLÍNICO Condicionamento: Melfalan 200 mg / m 2 Não fez DRM por CF pré TCTH TCTH: Infusão Aférese: 2,1 x 10 6 céls CD 34+ / Kg em 06/06/2011 1ª DRM por CF em 05/10/2010: 0,97% (D+120 pós TCTH) EPS: pico monoclonal γ = 2,2g/dL β2 micro = 1,6mg/L Morfologia: hipoplasia global, raros plasmócitos. Iniciado Talidomida Evoluiu com pancitopenia em 24/03/2011: 27,6% de plasmócitos pela CF Iniciou Bortezomib conforme informações Óbito no serviço de origem.
18 MM D+ 120 pós p s TCTH Plasmócitos totais (CD 38+) = 1% Plasmócitos neoplásicos (CD 56+/ CD 19 neg) ) = 97% = 0,97%
19 APÓS S 5 MESES DA 1ª 1 DRM+ Plasmócitos neoplásicos (CD 56+/ ckappa+/cd 19 neg) ) = 27,6%
20
21 OBRIGADA
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