ATA DA 9ª REUNIÃO GBCFLUX ( 24/03/2012 ) CURITIBA (PR)
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- Mauro Cipriano Viveiros
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1 ATA DA 9ª REUNIÃO GBCFLUX ( 24/03/2012 ) CURITIBA (PR) PERÍODO DA MANHÃ: aulas 1) Utilização das Células Tronco Mesenquimais no Transplante Cardíaco e na doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH). Dra Alexandra Cristina Senagaglia (HC-UFPR Curitiba) 2) Relação entre as células CD34+ e progenitores hematopoéticos GM-CFUs no transplante autólogo de Medula Ossea. Dr Helio dos Santos Dutra (UFRJ) 3) Controle de Qualidade em CF. André Cardoso (BD) 4) Apresentação empresas DPM (Paulo Loria) e DRBBiotech (Nilton Cabrera ) PERÍODO DA TARDE: 1) Subcomitê de Controle de Qualidade Apresentação :Dra Ana Paula Azambuja: Resumo dos assuntos já discutidos pelo subcomitê de Controle de Qualidade nas reuniões prévias Apresentou fluxograma de controle de qualidade em CF Dras Nydia e Ana Paula: Proposta de fazer um inquérito com todo o GBCFLUX para sabe quais os parâmetros de controle de qualidade que cada laboratório está usando Depois passar a todos um check list do mínimo necessário que cada laboratório deve seguir que garanta a qualidade dos testes. Sugestão (Dra Maura): publicação dos dados pré e pós instituição das estratégias do check list por cada laboratório e o quanto contribuiu para melhoria dos mesmos. Proposta do grupo: discutir internamente no subcomitê sobre as próximas ações a serem desenvolvidas por ele. Dr. Leandro Thiago sugere que todos os grupos que fazem citometria no Brasil participem do GBFLUX, por exemplo cadastrados por região. Dra Maura confirma que o mailing do GBFLUX está ativo, mas que pediremos um recadastramento para atualização. Dra Mihoko esclareceu que a preocupação sobre a inclusão dos grupos ocorreu desde o inicio da formação do GBCFLUX. O grupo deve rever o recadastramento associando os grupos novos. 2) Subcomitê de Leucemias Agudas Apresentação: Dra Maura R Valério Ikoma Resumo das propostas do subcomitê discutidas em reuniões anteriores e como se chegou ao consenso Apresentação dos painéis sugeridos pelo subcomitê e das propostas enviados pelos membros do GBCFLUX.
2 Objetivo: definir painéis mínimos para o diagnóstico e subclassificação das leucemias agudas, com adesão da maioria dos serviços do GBCFLUX. Proposta: Padronizar as informações clínicas enviadas ao laboratório (apresentação Dra Beth Xisto Souto do HEMO 2011) Discussões sobre o painel de triagem: Dra Irene: um tubo com marcadores mielóide e B e outro com marcadores T, sempre com CD 45 para fazer o gate: cmpo/ ccd 79 a/ CD 45/ ccd3 e CD 19/ CD 7/ CD 45 / CD 34 Houve discussão ampla sobre a necessidade de 2 tubos na triagem. Dr Alex: os tubos de triagem são complementares ao painel mielóide por incluir CD 7 e CD 19. Manter a primeira proposta de 2 tubos. Dra Nydia e Dra Miriam: tubo de triagem é apenas para definir linhagem, sem necessidade de 2 tubos, se usarmos os 3 marcadores citoplasmáticos (MPO, CD 3, CD79 a). Dra Silvia: faz (CD3/ CD 19/ CD 45/ CD 34) e (cmpo/ccd79a/ CD 45/ ccd3), para agilizar, antes da lâmina. Dra Mihoko: fazia um tubo só com citoplasmático, hoje faz mais um tubo incluindo cigm Dra Mariester: só tubo de linhagem com 3 marcadores citoplasmáticos (cmpo / ccd79a / CD 45/ ccd 3). Dra Alex e Dra Maura: ccd3 e CD 7 devem estar no mesmo tubo pela ontogenia de linhagem T Dra Mihoko: colocar ccd 79a e CD19 no mesmo tubo por causa das co-expressões em LLATe LMA. Se não fizer esses marcadores na triagem terão que ser feitos depois. Tanto MPO e outros marcadores linfóides podem ser negativos. Manter dois tubos. Dr Leandro: inclui TdT para LMA M0 e Linfóides na triagem e MPO pode iniciar fraca e depois ficar mais forte. Dr Alex e Dra Maura: se na triagem a MPO for negativa e os marcadores linfóides que definem linhagem forem negativos, é indicativo de LMA. Dra Irene: na triagem se MPO negativa, fazer o TdT. O tubo de triagem com finalidade de definir linhagem e direcionar o painel depois. Ela usa só CD13 e CD33 para ir para LMA, sem MPO. Discussão sobre a inclusão do TdT: pode ser auxiliar nas leucemias linfóides agudas, mas não necessárias nas LMAs. Não constitui score para definição de linhagem. Serve como auxilio para DRM em LLA, e prognóstico em LMA. Resolução final: TdT deve ser opcional na triagem. RECOMENDAÇÕES APÓS VOTAÇÃO: 1) Sempre fazer o painel de triagem. 2) Três níveis de recomendação de painéis: essencial ou mandatório, recomendável, opcional ou sugerido PAINEL TRIAGEM DE 4 CORES Mandatório ou essencial FITC / PE / PerCP (Cy5 ou 5.5) / APC cmpo / ccd79a/ CD45/ ccd3 CD19/CD7/CD45/CD34 Recomendável cmpo / ccd79a/ CD45/ ccd3 Opcional 3º tubo: TdT/CD33/CD 45/
3 3) Recomenda-se que quem trabalha com 3 cores migre para 4 cores 4) PAINEL DE TRIAGEM DE 3 CORES Mandatório ou essencial : FITC / PE / PerCP (Cy5 ou 5.5) cmpo/ ccd 79 a / CD 45 CD 3 / CD 7 / CD 45 Opcionais: CD 19/ CD 34 / CD 45 TdT/ CD 33 /CD 45 PAINEL LLA LINHAGEM B DE 4 CORES 1) Discussões sobre os marcadores de DRM: Dr Leandro: o CD66c deveria constar como obrigatório e não como opcional porque acrescenta informação para DRM porque sua expressão é estável mesmo após a terapêutica e além disso é a aberração mielóide mais evidente. Se CD66c+ o CD13, CD33 e CD 65 são negativos são excludentes. Seriam entidades nosológicas distintas. Plenária: não há muitas pessoas com experiência com esse o marcador no Brasil Dra Maura usa o CD 66c para DRM ( protocolo BFM para DRM de LLA linhagem B) Dra Mariester: expressões de CD13 e de CD33 em LLA B nunca é forte, geralmente -/+ parcial. Para estudo de DRM são marcadores difíceis por causa da fraca intensidade de expressão desses marcadores. Clinicamente não modifica prognóstico. Pode ser que signifique mau prognostico em adulto, indique Ph1+,mas não auxilia para DRM. Fazemos porque estamos acostumados. Dr Alex: há casos com expressão mais forte e ai sim é importante. Dá para prever Ph1+ (?) o mais característico é CD 38 fraco ou negativo. Dr Leandro: Não há estudos sobre a freqüência da célula CD 13-/+ com CD19+ que ocorre em medula óssea normal, embora elas existam. Dra Mioko: se 43% das LLA de linhagem B expressam CD 66c, se houver estudo em DRM e recaída e for bom, aí sim podemos sugerir. Dra Maura: embora o CD 66c seja um marcador importante para DRM de LLA de linhagem B, mas há pouca a experiência do grupo com o marcador, sugerimos que ele seja conste apenas como sugerido num primeiro momento. Como o processo de atualização de painéis deve ser dinâmico, ele deverá ser incluído como obrigatório no painel, em reavaliação posterior. Conclusão: CD13 e CD33 são tradicionais e serão mantido. Somente deixando-os na 2ª cor, com PE. Recomendar CD66c como alternativo ou opcional no momento. 2) Dr Alex testou sigm APC e funciona bem. Sugere trocar tubos 4 e 5 por Kappa/Lamda/ CD 19/ cigm. Aprovado 3) Crítica sobre o tubo de maturação CD10/CD20/CD19/CD34 pelo Dr Leandro Thiago: sugere seguir recomendações do Biomed 1 que usava CD34 e CD38 Mas Dr Alex mostra que TdT + é igual a CD34 positivo, então pode ver maturação com CD38. 4) Dra Maura: proposta para transição para 8 cores trocar CD13 APC para PE e CD22 para APC no tubo (cigm/ CD 13/CD 19/CD 22). Todos concordaram. 5) Tubo para estudo de hematogônias não fazer no diagnóstico: CD 38/CD 10/CD 19/ CD 58
4 6) Dr Alex: concorda com a exposição de que CD123 seja interessante para DRM, sugere tubo HLA DR/CD 123/CD 19/CD 45. 7) Dra Irene: não fomentar a contagem dos blastos pela citometria. A OMS conta no mielograma e classifica pela lâmina. DRM na boa pratica médica e ética só se faz residual mínima dentro de estudos clínicos, fora não muda tratamento. 8) Dra Mioko e Dra Maura discordam: os protocolos clínicos de tratamento da LLA da infância incluem a DRM por CF como fator prognóstico e a utilizam para estratificação terapêutica. CONSENSO DE RECOMENDAÇÕES PARA LLA LINHAGEM B: 4 CORES Mandatório: FITC PE PercP APC 1. CD10 CD20 CD19 CD34 2. cigm CD13 CD19 CD22 3. ntdt CD33 CD19 CD38 4. Kappa Lambda CD 19 sigm Opcionais (para DRM e lesões moleculares): 5. CD 58/ CD 66c/ CD 45/CD CD 15 ou CD65 /7.1 / CD 19/ CD 45 Recomendável*: Toda LLA Pró B e Leucemia do Lactente fazer o 7.1 (alterações em 11q23). HIPERDIPLOIDIA E DNA: Dra Maura sugere ser discutido para LLA e MM em outra reunião. 3 CORES Sugestões de mudanças: trocar fluorocromos do tubo: 22/33/19 (33 PE e 22 FITC) Tubo 4: TDT/34/19 Tubo 5: 34/38/19 Os demais permanecem iguais.
5 CONSENSO 3 CORES Mandatório: FITC PE PercP- Cy CD10 CD20 CD19 2. cigm CD13 CD19 3. CD 22 CD 30 CD19 4. ntdt CD 34 CD CD34 CD38 CD 19 Se cigm for positivo: 6. sigm CD19 CD45 7 Kappa Lambda CD19 Opcional para lesão molecular (11q23) e DRM 8. CD CD 19 Por falta de tempo hábil, os painéis de LLA T e Leucemia Mielóide Aguda serão discutidas na próxima reunião. 3) Definições sobre assuntos de Curso Pré Congresso (HEMO 2012): 1ª parte: Aulas Teóricas: Prof Dra Elaine Costa (UFRJ) : Imunofenotipagem de tumores sólidos por CF Prof Dr Esper Kallas(FM USP): Detecção de Citocinas por CF 2ª parte: Casos clínicos -SLP difícil diagnóstico LLC /Manto ( Dra Mariester Malvezzi - UFPR) - Linfocitose policlonal persistente (Dr. Alex Sandes Lab Fleury - SP) - ZAP 70 em LLC (Prof Dra Mioko Yamamoto UNIFESP) - TCR em Doenças Linfoproliferativas T (Dra Silvia Inês Pereira Hemosc - SC)
6 4) Subcomitê de Doenças Linfoproliferativas Crônicas está se organizando 5) Propostas para HEMO 2012 ( Dra Mioko e Dra Irene) : Mesa redonda de diagnostico integrado de DLPC com Dr Brent Wood (Mariland USA) sobre aspirado de linfonodo em diagnóstivo em CF, com Dr José Carlos imunopatologista (UFRJ) falando de PAAF e um debatedor clínico cujo nome está a definir. 6) Dra Nydia fará um Simpósio de CF no Hospital Albert Eistein com o Dr Brent Wood, sobre diagnostico atual e futuro de leucemia aguda e com Dr Marciano Reis sobre SMD, na 4ª feira que antecede ao HEMO. 7) Próxima reunião: 1ª semana de julho/2012, no Lab Fleury em São Paulo Propostas: não fazer aulas teóricas, somente discussões técnicas. Compareceram a essa reunião: Edna Ap. Martins Juliana Y. Suzuki Suely Karin Weiss Eliana L. Lima Julie P. Justus Yara Schluga Maria Taden Rocha Paulo Antonio R. Loria Maura R. V. Ikoma Mariana Franceschi Helio S. Dutra Geraldo Barroso Jr. Lucina de Almeida Ana Paula de Azambuja Lidiane Maria Boldrini Leite Maria Claudia S. Silva Leandro de S. Thiago Alex Freira Sandes Gislaine Oliveira Duarte Fernanda G. Pereira Cunha Beatriz de Moraes Martinelli Vagner de Castro Elisa Eleonora Greco Novello Mariester Malvezzi Silvia J. C. Pires Ferreira Nydia S. Bacal Ruth Hissae Kanayama Irene Lorand Metze Mihoko Yamamoto Mirian P. Beltrame
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