DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIOXIDANTE E DE CONSTITUINTES BIOATIVOS EM FRUTAS CÍTRICAS

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1 ISSN ISSN on line Alim. Nutr., Arrqur v. 21, n. 4, p , out./dez DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIOXIDANTE E DE CONSTITUINTES BIOATIVOS EM FRUTAS CÍTRICAS Alexndr Gelsleichter DUZZIONI* André Grci FRANCO** Mrcelo DUZZIONI*** Céli Mri de SYLOS**** RESUMO: Três vrieddes de fruts cítrics (lrnj vlênci, tngor murcote e limão thiti) form nlisds qunto o teor de flvonoides totis, crotenoides totis, ácido scórbico, fenólicos totis e tividde ntioxidnte. A tividde ntioxidnte nos extrtos quoso, metnólico e cetônico ds fruts cítrics, form vlidos pelo método do rdicl livre DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrzyl). O limão thiti presentou o mior teor de ácido scórbico e flvonoides totis, já lrnj vlênci obteve o mior conteúdo de fenólicos totis e tngor murcote o mior teor de crotenoides totis. A tividde ntioxidnte, express como EC 50, foi mior no extrto quoso do que nos demis extrtos. PALAVRAS CHAVE: Fruts cítrics; compostos biotivos; tividde ntioxidnte; DPPH. INTRODUÇÃO As fruts cítrics são bstnte cultivds no interior do Estdo de São Pulo, tendo como cultivres de destque lrnj vlênci, lim ácid thiti e o tngor murcote. 10 A lrnj vlênci é um cultivr de grnde importânci econômic devido à lt produtividde e qulidde dos frutos, sendo plntd ns principis regiões produtors de citros do mundo. Ess cultivr present mturção trdi dos frutos e pode ser destind tnto pr o mercdo interno como pr o externo, tendendo o consumo de frut fresc e o processmento industril. 11 A lim ácid thiti (Citrus ltifoli Tnk), populrmente conhecid no Brsil como um limão, tulmente vem despertndo interesse pr mplição dos plntios comerciis. 8 O suco do limão é considerdo fonte de vitmin C. 23 O limoeiro é um frutífer rentável e os frutos têm mpl ceitção no mercdo, pois podem ser usdos em limentos, fármcos, chás e refrigerntes. 15 As tngerins, que tem como finlidde principl o consumo in ntur, vêm crescendo em importânci no grupo dos citros, principlmente em termos de volumes. Els já representm 23% d produção mundil e tendênci é continur em expnsão, visto que su produção umentou 24% se comprds às sfrs 2007/ As fruts cítrics são conhecids como fontes de constituintes ntioxidntes que presentm váris ções benéfics o ser humno, como por exemplo tividde ntioxidnte. 22 Dentre esses compostos biotivos, destcm-se o ácido scórbico, os compostos fenólicos e os crotenoides. 9,18 Vários estudos têm indicdo o ppel-chve dos rdicis livres e outros oxidntes como grndes responsáveis pelo envelhecimento e pels doençs degenertivs ssocids o envelhecimento, como câncer, doençs crdiovsculres, ctrt, declínio do sistem imune e disfunções cerebris. 2 Os citros são ricos em substâncis ntioxidntes que judm diminuir incidênci desss doençs. 16 A tividde ntioxidnte de um composto ou extrto pode ser estimd pós su dição em solução metnólic de DPPH. A redução do DPPH é compnhd pelo monitormento do decréscimo d bsorbânci um determindo comprimento de ond. O DPPH bsorve 515nm, ms qundo reduzido por um ntioxidnte (AH) ou espécies rdiis (R ), bsortividde diminui. 4 DPPH + AH DPPH-H + A DPPH + R DPPH-R Os resultdos são expressos como quntidde de ntioxidnte necessári pr diminuir em 50% concentrção inicil de DPPH (EC 50 ou IC 50 ) em um tempo de reção fixo, 5 ou té formção de um ptmr. 4 Dd importânci ds fruts cítrics e necessidde de se conhecer mis sobre os constituintes presentes ns mesms e considerndo existênci de pouco estudo sobre tngor murcote, limão thiti e lrnj vlênci, o objetivo deste trblho foi determinr lguns dos constituintes biotivos presentes ns três vrieddes de fruts e cpcidde * Progrm de Pós-Grdução em Ciênci de Alimentos Curso de Doutordo Fculdde de Ciêncis Frmcêutics UNESP Arrqur SP Brsil. E-mil: gelsleichter_le@hotmil.com. ** Curso de Grdução em Frmáci Fculdde de Ciêncis Frmcêutics UNESP Arrqur SP Brsil. *** Deprtmento de Frmcologi CCB - Universidde Federl de Snt Ctrin - Cmpus Universitário Florinópolis SC Brsil. **** Deprtmento de Alimentos e Nutrição Fculdde de Ciêncis Frmcêutics UNESP Arrqur SP Brsil. 643

2 ntioxidnte, vi rdicl DPPH, do suco d frut extrído em três diferentes solventes (águ, metnol e ceton). MATERIAL E MÉTODOS Amostrs Form seleciondos três lotes de cd vriedde de citros (lrnj doce vlênci, tngor murcote e limão thiti). As fruts form dquirids em indústris e supermercdos d região de São Crlos e Arrqur (São Pulo, Brsil). As fruts form escolhids letorimente, independentemente do seu gru de mturção. Cd lote continh proximdmente 12 frutos. O suco ds fruts foi obtido prtir de um extrtor mnul de suco e depois homogeneizdo pr relizção ds nálises. Determinção de Sólidos Solúveis Totis (SST), de Acidez Titulável Totl (ATT) e do Rtio O teor de sólidos solúveis totis (ºBrix) e de cidez titulável totl (express em % de ácido cítrico) ds mostrs foi relizdo de cordo com os métodos d Assocition of Offi cil Anlyticl Chemists 1 e o rtio pel relção de sólidos solúveis/cidez totl titulável. Determinção de Acido Ascórbico (AA) O conteúdo de ácido scórbico foi determindo por titulometri, método que se bsei n redução do 2,6-diclorofenol-indofenol pelo ácido scórbico, e os resultdos expressos em mg de ácido scórbico/100ml de suco. 1 Determinção de Compostos Fenólicos O teor de fenólicos totis foi determindo pelo método de Folin Cioclteu, 24 usndo ácido gálico como pdrão. A leitur d bsorbânci foi relizd 760nm em um espectrofotômetro Beckmn DU 640. A curv nlític foi construíd ns concentrções entre 5 25μg de ácido gálico por ml. Os resultdos form expressos em mg de ácido gálico por 100mL de suco. Determinção do Teor de Flvonoides Totis A extrção dos flvonoides foi efetud com ceton de cordo com Yu & Dhegren. 28 O conteúdo de flvonoides totis foi determindo pelo método colorimétrico segundo Zhishen et l. 29 com leitur de bsorbânci 510nm. A rutin foi utilizd como pdrão pr obtenção d curv de clibrção. Os resultdos form expressos em mg equivlente de rutin/ml. Determinção do Teor de Crotenoides Totis Os crotenoides form extrídos com ceton fri, os pigmentos trnsferidos pr éter de petróleo, sponificdos com KOH metnólico por 16 hors. O extrto foi diluído com éter de petróleo e leitur d bsorbânci d solução foi relizd 450nm. O teor de crotenoides totis foi expresso em termos de β-croteno (A 1% de 2592, em 1cm éter de petróleo), com plicção d Lei de Beer. 21 Determinção d Atividde Antioxidnte pelo Método de DPPH A determinção d tividde ntioxidnte foi determind vi rdicl livre DPPH segundo Brnd-Willins et l. 4 com lgums modificções. A mostr de suco cítrico (40g) foi centrifugd 6,500g pr seprção do sobrendnte. Um líquot (0,1mL) de diferentes concentrções do sobrendnte (concentrções do suco em águ) e do precipitdo (concentrções de 5,0g do precipitdo em metnol e 5,0g do precipitdo em ceton) de cd suco foi misturd com 2,46mL d solução metnólic de DPPH (0,025g/L) e incubdos por 30 minutos no escuro. A leitur d bsorbânci foi relizd 515nm. A prtir d curv de clibrção do DPPH e dos vlores d bsorbânci de cd concentrção, form determindos os percentuis de DPPH remnescente. A percentgem de DPPH remnescente versus concentrção d mostr foi plotd pr obter quntidde de ntioxidnte necessári pr decrescer concentrção inicil de DPPH em 50% (EC 50 ). A tividde ntioxidnte foi determind no sobrendnte do suco d frut centrifugdo e nos sobrendntes dos precipitdos metnólico, obtido d dição de metnol e cetônico, obtido d dição de ceton com o intuito de extrir o máximo dos contituintes biotivos, em nálise, presentes no suco. Análise Esttístic A nálise esttístic dos resultdos foi relizd trvés de nálise de vriânci (ANOVA) de um vi, seguid pelo teste de Tukey. As diferençs que presentrm níveis de probbilidde menores e iguis 5% (p 0,05) form considerds esttisticmente significtivs. RESULTADOS E DISCUSSÃO Sólidos Solúveis Totis (SST), Acidez Titulável Totl (ATT) e Rtio Os vlores pr os SST encontrdos ns fruts cítrics mostrrm que lrnj vriedde vlênci conteve significtivmente (p 0,05) o mior vlor, enqunto que o limão o menor vlor (Tbel 1). O teor de sólidos solúveis totis (SST), expresso como percentgem do peso d mtéri fresc, pode ser utilizdo como indicdor d qulidde de vários frutos. 3 Em lguns frutos, o SST é de grnde importânci tnto pr o consumo in ntur como pr o processmento industril, visto que teores elevdos n mtéri-prim implicm em menor dição de çúcres, menor tempo de evporção d 644

3 águ, menor gsto de energi e mior rendimento do produto, resultndo em mior economi no processmento. 17 O limão thiti presentou significtivmente (p 0,05) o mior teor de cidez (Tbel 1), enqunto que s outrs fruts não diferirm (p>0,05) em seus vlores. Pr o rtio, um prâmetro muito utilizdo pels indústris de sucos - um vez que indic o estádio de mturção - o limão presentou o menor vlor devido o seu lto teor de cidez, já s demis fruts presentrm vlores muito próximos. Couto & Cnnitti-Brzc 6 encontrrm em seus estudos teores de SST de 10,73±0,14 e 14,33±0,12 Brix pr s vrieddes vlênci e murcote respectivmente. Com relção o teor de cidez os utores encontrrm os vlores de 0,80±0,00mg/100mL pr mbs s vrieddes, conseqüentemente o rtio encontrdo pr lrnj vlênci (13,33) ficou bixo do encontrdo em nossos estudos e pr vriedde murcote (17,81) ficou cim. Est diferenç nos vlores é em função d região produtor e ds crcterístics d cultivr. Ácido Ascórbico, Fenólicos Totis, Flvonoides Totis e Crotenoides Totis O teor de ácido scórbico encontrdo no limão thiti foi esttisticmente superior (p 0,05) o encontrdo ns vrieddes de lrnj vlênci e tngor murcote, conforme Tbel 1, sendo que s demis vrieddes não diferirm em seus vlores. Por outro ldo, o conteúdo de fenólicos totis foi significtivmente menor (p 0,05) pr o limão thiti, e esttisticmente superior (p 0,05) pr vriedde de lrnj vlênci. Em estudo relizdo por Couto & Cnnitti-Brzc 6 tngerin murcote obteve um teor de 21,47±1,11mg/100mL, reltivmente bixo com o encontrdo nesse estudo; pr lrnj vlênci o teor encontrdo foi de 78,47±1,20mg/mL, tmbém bixo. Em relção o teor de flvonoides totis, o limão presentou significtivmente (p 0,05) o mior teor deste constituinte enqunto que s demis vrieddes não diferirm em seus vlores. Por fim, vriedde murcote presentou mior teor de crotenoides totis (p 0,05), comprdo à lrnj vlênci. Pr vriedde thiti, não foi detectdo teor de crotenoides totis, um vez que bsorbânci 470nm não ficv entre 0,2 0,8, independente d mss e do volume ds mostrs utilizdos no experimento. Atividde Antioxidnte (EC 50 ) As fruts, de um modo gerl, presentm em su constituição vários compostos com ção ntioxidnte, como o ácido scórbico, os crotenoides e os polifenóis. A quntidde e o perfil destes fitoquímicos mudm em função do tipo, vriedde e gru de mturção d frut, bem como ds condições climátics e edáfics do cultivo. 12 Pr vlir tividde ntioxidnte de um vegetl é necessário extrir o máximo de compostos biotivos, pois estes presentm polridde diferencid. Dess form, solubilidde em um determindo solvente é crcterístic peculir de cd fitoquímico, o que explic inexistênci de um procedimento de extrção universl. 13 Os vlores d tividde ntioxidnte (EC 50 ) relizds em três tipos de solventes (águ, metnol e ceton) pr s vrieddes de fruts cítrics em estudo, estão representdos ns Figurs 1, 2 e 3 respectivmente. Sobrendnte A Figur 1 represent cpcidde ntioxidnte (EC 50 ) pr o sobrendnte do suco, depois de centrifugdo, diluído em águ. O EC 50 é inversmente proporcionl à cpcidde ntioxidnte do suco ou frut em questão. Os resultdos obtidos demonstrrm que vriedde murcote presentou significtivmente (p 0,05) menor cpcidde ntioxidnte (mior EC 50 ) que s demis vrieddes, sendo que lrnj vlênci e o limão thiti não diferirm (p>0,05) em seus vlores. Esperv-se que cpcidde ntioxidnte fosse mior pr o limão que pr s demis vrieddes, pois em meio quoso o ácido scórbico é totlmente solúvel e o limão conteve significtiv- Tbel 1 Vlores de sólidos solúveis totis, cidez totl titulável, rtio, ácido scórbico, fenólicos totis, flvonoides totis e crotenoides totis presentes ns três vrieddes de fruts cítrics*. Análises vlênci (Citrus sinensis O.) murcote (Citrus reticult Blnco x Citrus sinensis L. Osbeck) limão thiti (Citrus urntifoli Swing vr. Titi) Sólidos solúveis totis (%) 12,5±0,01 9,6±0,02 b 7,8±0,03 c Acidez totl titulável (%) 0,83±0,01 0,77±0,01 1,09±0,06 b Rtio (SST/ATT) 14,97 12,43 b 7,19 c Ácido scórbico (mg/100ml) 79,38±0,54 74,92±0,21 237,0±14,7 b Flvonoides totis (mg Rutin/mL) 68,0±0,10 65,5±0,01 96,27±0,13 b Crotenoides totis (mg β-croteno/ml) 2,23±0,09 5,86±0,56 b ** Fenólicos totis (GAE,mg/100mL) 648,6±2,43 551,9±1,89 b 455,2±23,67 c *Os vlores representm médis de três lotes±sd. Linhs com diferentes letrs são significtivmente diferentes no teste de Tukey (p 0,05). ** não detectdo. 645

4 mente (p 0,05) o mior teor de ácido scórbico (Tbel 1); no entnto, lrnj vlênci presentou esttisticmente o mesmo vlor (p>0,05) de EC 50, pesr de conter um teor de ácido scórbico (p 0,05) inferior à do limão. No entnto, lgums estruturs de compostos fenólicos tmbém são hidrossolúveis 13 e lrnj vlênci conteve um vlor superior (p 0,05) deste constituinte. Alguns utores 13 confirmrm em seus estudos, que contribuição do ácido scórbico no sequestro do rdicl DPPH vriou extensivmente entre s fruts por eles nlisds, enqunto outros 26 reltrm que o percentul de contribuição do ácido scórbico n ção ntioxidnte ds fruts foi inferior 15%. Em suco de 5 vrieddes de lrnjs foi evidencido um bix e um lt correlção entre o teor de fenólicos e cpcidde ntioxidnte e entre o teor de ácido scórbico e cpcidde ntioxidnte, respectivmente. 20 Logo, há muits controvérsis em resultdos existentes n litertur, o que indic necessidde de mis estudos nest áre. Precipitdo em metnol A Figur 2 represent cpcidde ntioxidnte (EC 50 ) pr o precipitdo do suco, depois de centrifugdo, extrído com metnol. Nesse meio, metnólico, estão presentes compostos como os fenólicos e os flvonoides e, em menor proporção, o ácido scórbico. Os resultdos obtidos demonstrrm que s vrieddes murcote e vlênci presentrm diferenç significtiv (p 0,05) em seus vlores, sendo que vlênci demonstrou ter mior cpcidde ntioxidnte que murcote. 400 b 300 EC Vlênci Murcote Limão FIGURA 1 Vlores de EC 50 pr o sobrendnte do suco ds fruts em meio quoso. Os vlores representm médis de três lotes±sd. Coluns com diferentes letrs são significtivmente diferentes no teste de Tukey (p 0,05). EC Vlênci Murcote Limão FIGURA 2- Vlores de EC 50 pr o precipitdo do suco ds fruts extrído com metnol. Os vlores representm médis de três lotes±sd. Coluns com diferentes letrs são significtivmente diferentes no teste de Tukey (p 0,05). b b 646

5 b Vlênci Murcote Limão FIGURA 3 Vlores de EC 50 pr o precipitdo do suco ds fruts extrído com ceton. Os vlores representm médis de três lotes±sd. Coluns com diferentes letrs são significtivmente diferentes no teste de Tukey (p 0,05). EC 50 Precipitdo em ceton A Figur 3 represent cpcidde ntioxidnte (EC 50 ) pr o precipitdo do suco, depois de centrifugdo, extrído com ceton. Neste estudo, relizou-se extrção dos compostos fenólicos, flvonoides totis e crotenoides com ceton, considerndo que bo prte destes pigmentos sej solúvel neste meio. A vriedde vlênci presentou o mior vlor de compostos fenólicos, já vriedde limão thiti conteve o mior teor de flvonoides totis e vriedde tngor murcote o mior teor de crotenoides totis (Tbel 1). Pelos resultdos obtidos, pode-se observr que nenhum diferenç significtiv foi encontrd entre s vrieddes murcote e limão thiti; entretnto, vriedde vlênci presentou significtivmente (p 0,05) mior cpcidde ntioxidnte neste meio. Sendo ssim, estes resultdos concordm com os obtidos por outros utores 7,19,20, 25,27 os quis firmm que os compostos fenólicos são os miores contribuidores pr tividde ntioxidnte ds fruts. Além d presenç dos compostos nlisdos neste estudo, podem existir outros componentes fitoquímicos em cd extrto vlido. A estrutur químic do componente tivo tem influênci sobre eficáci do ntioxidnte nturl, um vez que posição e o número de hidroxils presentes n molécul dos polifenóis é um ftor relevnte pr est tividde, 13 o mesmo ocorre pr os crotenoides totis. Assim, não bst pens determinr o teor de compostos totis, o idel seri identificá-los individulmente, pois cd constituinte isoldo present um estrutur diferencid, logo um cpcidde ntioxidnte diferente. Ao comprrmos os resultdos obtidos com os diferentes meios de extrção (Figur 1, 2 e 3), pode-se observr que tividde ntioxidnte foi mior em meio quoso do que nos precipitdos em metnol e ceton. Dess form, os constituintes biotivos presentes neste meio presentm mior cpcidde de sequestrr rdicis livres. Entretnto, não se pode esquecer que cpcidde ntioxidnte nests fruts foi vlid somente vi rdicl DPPH e, ssim, não é possível firmr que um frut present mior ou menor tividde ntioxidnte sem relizr mis estudos, inclusive com outros métodos disponíveis. CONCLUSÕES Anlisndo os ddos obtidos dos principis constituintes biotivos presentes ns três vrieddes de fruts cítrics, pode-se concluir que não existe um únic frut que contenh um lto teor de todos os compostos de interesse. Por exemplo, o limão thiti presentou um lto teor de ácido scórbico e flvonoides totis e um bixo teor de fenólicos totis, enqunto que vlênci conteve um teor expressivo de fenólicos totis e um bixo teor de crotenoides totis. A lrnj vlênci, que se destin principlmente à indústri de suco, presentou bo tividde ntioxidnte nos diferentes meios de extrção. Portnto, pr conhecer melhor cpcidde ntioxidnte de um frut, fz-se necessário isolr e quntificr o mior número de compostos biotivos presentes em diferentes solventes, ssim como tmbém utilizr o mior número de métodos possíveis pr vlir su tividde ntioxidnte. DUZZIONI, A. G.; FRANCO, A. G.; DUZZIONI, M.; SYLOS, C. M. Determintion of ntioxidnt ctivity nd ntioxidnt constituents of citrus fruits. Alim.Nutr., Arrqur, v. 21, n. 4, p , out./dez

6 ABSTRACT: Tree citrus fruit vrieties (vlênci, murcote nd thiti lemon) were nlyzed for contents of totl phenolics, totl flvonoids, totl crotenoids, scorbic cid, nd ntioxidnt ctivities. The ntioxidnt ctivities of queous, methnolic nd cetone extrcts of the citrus fruit juices were ssessed on the bsis of their bility to scvenge 1,1-diphenyl-2-picrylhydrzyl (DPPH ). The thiti lemon presented the highest content of scorbic cid nd totl flvonoids while the vlênci ornge presented the highest totl phenolic content nd the murcote the highest totl crotenoids content. The ntioxidnt ctivities, expressed s EC 50, were higher in the queous thn in the other frctions. KEYWORDS: Citrus fruit; ntioxidnt components; rdicl-scvenging cpcity; DPPH. REFERÊNCIAS 1. ASSOCIATON OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Officil methods of nlysis. Githersburg, v ATOUI, A. K. et l. Te nd herbl infusions: their ntioxidnt ctivity nd phenolic profile. Food Chem., v. 89, n. 1, p , AULENBACH, B. B.; WORHINGTON, J. T. Sensory evlution of muskmelon:is soluble solids content good qulity index? Hort Sci., Alexndri, v. 9, p , BRAND-WILLIANS, W.; CUVELIER, M. E.; BERSET, C. Use of free rdicl method to evlute ntioxidnt ctivity. Lebensm. Wiss. Technol., v. 22, p , CHOI, C. et l. Antioxidnt ctivity nd free rdicl scvenging cpcity between Koren medicinl plnts nd flvonoids by ssy-guided comprison. Plnt Sci., v. 163, p , COUTO, M. A. L.; CANNIATTI-BRAZACA, S. G. Quntificção de vitmin C e cpcidde ntioxidnte de vrieddes cítrics. Ciênc. Tecnol. Alim., v. 30, supl.1, p , DUZZIONI, A. G.; FRANCO, A. G.; SYLOS, C. M. Rdicl scvenging ctivity of ornge nd tngerine vrieties cultivted in Brzil. Int. J. Food Sci. Nutr., v. 60, n. 6, p , FIGUEREDO, J. O. et l. Port-enxertos pr lim ácid-thiti n região de Bebedouro, SP. Rev. Brs. Frutic., v. 24, n. 1, p , JOHNSTON, C. S.; BOWLING, D. L. J. Stbility of scorbic cid in commercilly vilble ornge juices. J. Am. Diet. Assoc., v. 102, p , KLUGE, R. A. et l. Efeitos de trtmento térmicos plicdos sobre fruts cítrics rmzends sob refrigerção. Ciênc. Rurl, v.36, n.5, p , LEITE JR, R. P. L. Cultivres de cop e port-enxertos. In: IAPAR. A citricultur no Prná. Londrin, p (Circulr, 72). 12. LEONG, L. P.; SHUI, G. An investigtion of ntioxidnt cpcity of fruits in Singpore mrkets. Food Chem., v. 76, p , MELO, E. A. et l. Cpcidde ntioxidnte de fruts. Brz. J. Phrm. Sci., v. 44, p , NATIONAL AGRICULTURAL SERVICE. United Sttes Deprtment of Agriculture. Crop production. Disponível em: psdhome.spx. Acesso em: 10 jun PEDRÃO, M. R. et l. Estbilidde físico-químic e sensoril do suco de limão Thiti nturl e doçdo, congeldo. Ciênc. Tecnol. Alim., v. 19, n. 2, p , PIMENTEL, C. V. M. B.; FRANCKI, V. M.; GOLLÜCKE, A. P. B. Alimentos funcionis: introdução s principis substâncis biotivs em limentos. São Pulo: Vrel, p. 17. PINHEIRO, R. V. R. et l. Produtividde e qulidde dos frutos de dez vrieddes de goib, em Visconde do Rio Brnco, Mins Geris, visndo o consumo o nturl e à industri-lizção. Rev. Ceres, Viços, v. 31, p , PUPIN, A. M.; DENNIS, M. J.; TOLEDO, M. C. F. Anlysis of crotenoids in ornge juice. Food Chem., v. 64, p , RAPISARDA, P. et l. Antioxidnt effectiveness s influenced by phenolic content of fresh ornge juices. J. Agric. Food Chem., v. 47, p , RAPISARDA, P. et l. Juice components of new pigmented citrus hybrid citrus sinensis (L.) osbeck citrus clementin hort. ex tn. J. Agric. Food Chem., v. 51, p , RODRIGUEZ-AMAYA, D. B. A guide for crotenoid nlysis in foods. Wshington, DC: Interntionl Life Sciences Institute, p SÁNCHEZ-MORENO, C. et l. Quntittive bioctive compounds ssessment nd their reltive contribution to the ntioxidnt cpcity of commercil ornge juices. J. Sci. Food Agric., v. 83, p , SINCLAIR, W. B. The biochemistry nd physiology of the lemon nd other citrus fruits. Oklnd: University of Cliforni, p. 24. SINGLETON, V. L.; ROSSI, J. A. Colorimetry of totl phenolics with phosphomolibidic-phosphotungistic cid regents. Amer. J. Enol. Viticult., v. 16, p , SUN, J. et l. Antioxidnt nd ntiprolifertive ctivities of common fruits. J. Agric. Food Chem., v. 50, p , WANG, H.; CAO, G.; PRIOR, R. L. Totl ntioxidnt cpcity of fruits. J. Agric. Food Chem., v. 44, p ,

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