Ana Baptista Fanuel Lecai João Faria Mariana Andrade Marta Rocha Tiago Carriço. Corresponding Species Identification

Transcrição

1 Ana Baptista Fanuel Lecai João Faria Mariana Andrade Marta Rocha Tiago Carriço Corresponding Species Identification IV Congresso A Ponte entre a Escola e a Ciência Azul 31 de Maio de 2017

2 Como identificar várias espécies de peixes através do seu DNA? Chelon labrosus Liza aurata Tainhas Liza ramada Espécie? Liza saliens Mugil cephalus Oedalechilus labiosus

3 Como estudar os indivíduos de um ecossistema causando uma perturbação mínima? Saída de campo à Área Marinha Protegida (AMP) das Avencas.

4 Como recolher os dados necessários à identificação da espécie? Campo: recolha de dados biométricos e amostras de tecido da barbatana caudal. Laboratório: recolha da amostra de tecido da barbatana caudal.

5 Como identificar amostras, à espécie, usando o seu DNA? Fingerprinting = impressão digital DNA fingerprinting = Impressão digital molecular

6 Como identificar amostras, à espécie, DNA fingerprinting usando o seu DNA? Código de barras de um produto

7 Como identificar amostras, à espécie, Mas como é que chegamos daqui usando o seu DNA? até aqui? DNA fingerprinting

8 Como obter o DNA a partir das amostras?

9 Como obter o DNA a partir das amostras? Extração de DNA das amostras; Amplificação do DNA por PCR (Polimerase Chain Reaction); Verificar amplificações do DNA por eletroforese; PCR Resultado do PCR

10 O que fazer com o DNA? Possibilidade A Mandar Sequenciar Possibilidade B Usar Enzimas de Restrição Caro Barato Lento e complexo Feito fora do laboratório Rápido e simples Feito por nós RIGOR

11 O que fazer com o DNA? Possibilidade A Mandar Sequenciar Possibilidade B Usar Enzimas de Restrição

12 Como identificar usando enzimas de restrição? 1º Pesquisa das sequências de bases; 2º Pesquisa dos mapas de restrição; Sequência de bases de Liza ramada 3º Uso de enzimas de restrição. Mapa de restrição de Liza ramada

13 Como identificar usando enzimas de restrição? Molécula de DNA Enzimas de restrição

14 Como escolher as enzimas de restrição a utilizar? Mapas de restrição de Liza ramada e Chelon labrosus

15 Como comparar os fragmentos de DNA cortados?

16 Como comparar os fragmentos de DNA cortados?

17 Como comparar os fragmentos de DNA cortados? Chelon labrosus Mugil cephalus Liza aurata Liza ramada Liza saliens Klossa-Kilia et al 2002 Food Control

18 Quais as vantagens desta técnica? Foi rigorosa, simples, barata e rápida. Permitiu identificar, à espécie, as amostras de tainha. Pode ser aplicada com o DNA de qualquer espécie, incluindo de seres humanos, com aplicação direta nas ciências forenses.

19 O que gostaríamos de fazer com esta técnica? Aplicar em amostras recolhidas no campo. Realizar as etapas da digestão do DNA pelas enzimas de restrição e as respetivas eletroforeses. Contribuir para o aumento do conhecimento científico, aplicando esta técnica a todas as amostras que foram recolhidas nos últimos 8 anos.

20 A quem agradecemos? Fernanda Silva (EMEPC) Frederico Almada (MARE-ISPA) Helena Moita de Deus (ESSCP) Hilda de Pablo (EMEPC)

21 O que consultámos? Almada, V. et al A rapid and inexpensive molecular technique to discriminate the north-eastern Atlantic and Mediterranean Atherina species and its potencial applications in ecology and larval identification. Biologia 67 /5: , section Zoology. DOI: /s Klossa-Kilia, E., Papasotiropoulos, V., Kilias, G., & Alahiotis, S. (2002). Authentication of Messolongi (Greece) fish roe using PCR RFLP analysis of 16s rrna mtdna segment. Food control, 13(3), NCBI nucleotide Nebcutter Querem saber mais?

22 Ana Baptista Fanuel Lecai João Mariana Andrade Marta Rocha Tiago Corresponding Species Identification IV Congresso A Ponte entre a Escola e a Ciência Azul 31 de Maio de 2017

23 Como comparar os fragmentos de DNA cortados? Chelon labrosus Mugil cephalus Liza aurata Liza ramada Liza saliens Klossa-Kilia et al 2002 Food Control

24 Eletroforese