Universidade Estadual de Maringá - UEM

Transcrição

1 Universidade Estadual de Maringá - UEM Disciplina: Biologia Molecular 6855 T1 e T2 Ciências Biológicas DNA forense Profa. Dra. Maria Aparecida Fernandez

2 TIPAGEM MOLECULAR Somos parecidos no entanto com enormes diferenças Variações em proteínas Maioria das diferenças no DNA, em regiões não codificadoras

3 O GENOMA HUMANO Genoma Humano: 46 cromossomos = 3,5 x 10 9 pb; cromossomo 21 = pb; 127 genes conhecidos, 98 genes previstos e 59 pseudogenes; 5% genes, 95% seqüências sem função conhecida; > microssatélites identificados.

4 Possíveis fontes de DNA: sangue periférico células da mucosa oral células do bulbo capilar células descamadas da pele ossos resíduos de esperma etc

5 ANALISANDO AS DIFERENÇAS NO DNA Causas: Mudança em um par de bases: mutações de ponto, transições ou transversões, entre outros eventos; Regiões de repetição in tandem no DNA: VNTR (número de repetições variáveis in tandem) STR (pequenas repetições in tandem)

6 Técnicas Básicas para Tipagem Molecular: RFPL utiliza enzimas de restrição e southern blotting, mudanças nos sítios de restrição alterariam o perfil de bandas no gel analisado PCR reação em cadeia da polimerase, permite a tipagem eficiente de minissatélites a partir de uma célula

7 Alteração na sequência de DNA e enzimas de restrição: TTTAAA AAATTT TTCAAA AAGTTT Observado pela alteração no tamanho do fragmento de DNA Detectado pela hibridação com uma sonda específica após o método de Southern blotting

8 RFPL

9 RFPL

10 PCR

11 Loci Múltiplos Alec Jeffreys et al, 1985 descobriram duas seqüências de DNA comuns a milhares de VNTRs Inúmeras seqüências de minissatélites encontram-se distribuídas nos 23 pares de cromossomos humanos Apresentam entre si semelhanças suficientes para serem detectadas simultaneamente em vários loci por uma única sonda

12 Tipagem Molecular M F P NAp

13 Investigação de Paternidade Através do DNA Aplicações Código de Barras

14 Investigação de Paternidade Através do DNA Mãe Pai Filho

15 Tipagem Molecular Locus Simples Sondas que detectam um único VNTR 1 ou 2 bandas por indivíduo, dependendo se homo ou heterozigoto Utiliza-se uma mistura de sondas para locus único (vários VNTRs presentes)

16 Tipagem Molecular Quantas pessoa podem apresentar o mesmo perfil??? Realiza-se um cálculo de freqüência com diferentes sondas Por exemplo: Sonda A 10% da população, Sonda B 5% da população, Então: (0,1) x (0,05) = 0,005 ou 0,5% de achar o mesmo perfil em 2 pessoas diferentes 1 pessoa em 200 CODIS Combined DNA Identification System - FBI Baseado em 13 regiões de STR, as chances de 2 indivíduos apresentarem o mesmo perfil são muito pequenas

17 Tipagem Molecular

18 APLICAÇÕES DA TIPAGEM DE DNA Medicina Forense: Em 30% dos casos de tipagem molecular realizadas demonstraram que o suspeito não poderia ter deixado as amostras que estavam sendo utilizadas para incriminá-lo Utilizada para excluir suspeitos

19 Aplicações Aplicações Biológicas: Biologia da conservação; Biologia evolutiva; Biologia comportamental; Taxonomia; Exemplos: 1) Entender de que maneira o parentesco afeta o comportamento de chimpanzés; 2) Tipagem de DNA de uma árvore levou a uma condenação de assassinato 3) Caso dos sapatos deixados na cena do crime

20 DIVISÃO DE DNA ANIMAL Avestruzes: sexagem, identificação de parentesco, patógenos; Bovinos: parentesco; Eqüinos: parentesco e marcadores moleculares.

21 DNA MITOCONDRIAL NA TIPAGEM MOLECULAR Mitocôndria humana apresenta um genoma circular de ~17.000pb Cada célula apresenta inúmeras mitocôndrias Herança materna Alta taxa de mutação

22 DNA MITOCONDRIAL Famílias argentinas para achar parentes desaparecidos após a ditadura militar - Dra. Amry-Claire King, 1990; Identificação da família real da Rússia, assassinada pelos soldados bolcheviques em 1918 e enterradas em sepulturas anônimas; Forças armadas dos Estados Unidos têm um programa de identificação prévia para identificação de soldados mortos em conflitos militares.