TÍTULO: SEXAGEM FETAL:DIAGNÓTICO DO SEXO DO FETO POR REAÇÃO EM CADEIA DE POLIMERASE (PCR)

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Zilda Prada Maranhão
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1 TÍTULO: SEXAGEM FETAL:DIAGNÓTICO DO SEXO DO FETO POR REAÇÃO EM CADEIA DE POLIMERASE (PCR) CATEGORIA: EM ANDAMENTO ÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDE SUBÁREA: BIOMEDICINA INSTITUIÇÃO: CENTRO UNIVERSITÁRIO DAS FACULDADES METROPOLITANAS UNIDAS AUTOR(ES): ALINE FRANCELINO DA SILVA ORIENTADOR(ES): CHARLOTTE BORDA DE SAENZ

2 SEXAGEM FETAL: Diagnóstico do sexo do feto por reação em cadeia de polimerase (PCR). RESUMO O interesse de muitas mulheres grávidas pelo conhecimento do sexo do bebê tem crescido cada vez mais desde as primeiras semanas de gestação. Por este motivo o intuito deste trabalho é conhecer o sexo do feto após 08 semanas de gestação, a partir de amostras de plasma materno devido a grande sensibilidade do PCR. Novas aplicações para o DNA fetal no plasma materno estão sendo pesquisadas, permitindo no futuro o diagnóstico não invasivo de uma série de doenças. (LEVI,WENDEL,TAKAOKA 2003). INTRODUÇÃO A determinação da sexagem fetal é um processo muito importante,durante a gestação de muitas mulheres que tem o interesse no conhecimento do sexo do bebê. Mas as técnicas mais comuns que são utilizadas são muito invasivas e podem danificar a saúde do bebê. (MALTA,TORRES,FERREIRA 2008). Este exame laboratorial permite conhecer o sexo do feto após oito semanas de gestação, á partir de amostras de plasma materno. Baseia-se que nesse período as células fetais passam para a circulação sanguínea materna (MALTA,TORRES,FERREIRA 2008 ). Mediante a grande sensibilidade do PCR é possível identificar as cópias do cromossomo Y nas células fetais e no plasma materno, assim a ausência dessas cópias indicam também a ausência do cromossomo Y, dessa forma o sexo do feto é feminino. A presença do cromossomo Y indica que o feto é masculino, mostrando que há presença de DNA fetal no soro e plasma, em concentrações muito maiores do que no sangue total. (DHALLAN, 2007). OBJETIVO Avaliar a eficiência da técnica de PCR na determinação da sexagem fetal.

3 METODOLOGIA Este trabalho foi realizado através de pesquisa bibliográfica em bancos de dados virtuais como Scielo, Lilacs e Medline, onde foram avaliados 08 artigos entre 2003 e RESULTADOS PRELIMINARES Nos presentes estudos foram analisadas as amostras de plasma separado do sangue periférico das gestantes. E todos os testes realizados nas amostras coletadas foram confirmados por ultrassom. Após a análise dos resultados foi estabelecida a especificidade de 100% e sensibilidade 100% para o método testado. Trata-se de uma técnica relativamente simples, rápida e barata e de grande sensibilidade. Vale-se principalmente desta ultima característica, que deriva da amplificação de um fragmento de DNA ao longo dos ciclos da reação. A definição do fragmento a ser amplificado tornou-se mais simples com os avanços das técnicas de sequenciamento e dos dados provindos dos diferentes projetos Genoma, permitindo acesso ás sequencias de DNA empregadas na produção do reagente específico da PCR que são os primers. Para avaliação das amostras de PCR foram realizadas 02 etapas: No primeiro foram coletados cinco mililitros de sangue de 41 mulheres grávidas em tubos EDTA K2 gel (PTT - Plasma Preparation Tube). Após a coleta, as amostras foram centrifugadas a 100xg por 10 minutos e conservadas á 4ºC até o momento da extração. O período gestacional variou entre 05 e 39 semanas. Todas as participantes assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido. (MALTA,TORRES,FERREIRA 2008). No segundo, as interessadas em participar do estudo foram encaminhadas ao banco de sangue do hospital Sírio Libanês em São Paulo, SP e logo após foram coletadas amostras de 100 ml de sangue periférico. (LEVI,WENDEL,TAKAOKA 2003).

4 No laboratório fez-se o isolamento do DNA em duplicatas de 140 ul de plasma, empregando-se o QIAapm Blood Mini Kit da Quiagen (Chattlesworth,CA,EUA). Neste método o plasma é submetido á uma lise enzimática com proteinase K. Os produtos de PCR foram observados por meio de eletroorese em gel de agarose 2% corado com brometo de etídio, e as imagens foram digitalizadas e armazenadas em computador. Os resultados foram reportados as pacientes que assim desejaram, por contato telefônico, fax ou . (LEVI, WENDEL, TAKAOKA 2003). REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS DONABELA, F. C. Sexagem fetal a partir do plasma materno. Dissertação (Mestrado) Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto MALTA, F.S.V. et al Determinação do sexo do feto através de uma nova técnica não invasiva baseada em PCR. RBAC,vol. 40(3): , LEVI,J.E, WENDEL,S. TAKAOKA, D.L. Determinação Pré- Natal do Sexo Fetal por meio da Análise de DNA no Plasma Materno. RBGO- v. 25, n 9, 2003 LO, D.Y.M. QuantitativeAnalysis of Fetal DNA in Maternal Plasma and Serum: Implications for Noninvasive Prenatal Diagnosis AM.J.HUM. GENET.62: ROCHA, G., B. Estabelecimento de Metodologias de Análise do DNA Livre Plasmático Para o Diagnóstico Pré- Natal Não Invasivo: Sexagem Fetal. Dissertação (Pós Graduação) Universidade Federal de São Carlos SAITO, H.; SEKIZAWA, A; MORIMOTO, T. Prenatal DNA diagnosis of a single gene disorder from maternal plasma. Lancet, 356:1170, 2000 VIEIRA, D. Técnicas de PCR: Aplicações e Padronização de Reações. Apostila do Laboratório de Biologia Molecular-IPEN: 1-10, 2005.

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