AMOSTRAGEM GENÉTICA NÃO INVASIVA E ANÁLISE FORENSE. Encontro Científico: Estudo e Conservação do Lobo Ibérico Sabugal, 12 de Junho
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- Giuliana Pinheiro Fagundes
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1 AMOSTRAGEM GENÉTICA NÃO INVASIVA E ANÁLISE FORENSE Encontro Científico: Estudo e Conservação do Lobo Ibérico Sabugal, 12 de Junho
2 2
3 Glóbulos brancos Glóbulos vermelhos Artéria Plaquetas 3
4 4
5 MÃE PAI AVÔ AVÓ AVÔ AVÓ CROMOSSOMAS DUPLICAM-SE CROMOSSOMAS TROCAM FRAGMENTOS MATERIAL GENÉTICO ALTERADO SEPARAÇÃO DOS NOVOS CROMOSSOMAS EM GÂMETAS GÂMETAS ÓVULO ESPERMA TOZÓIDE ZIGOTOS FERTILIZAÇÃO COMBINAÇÃO DO MATERIAL GENÉTICO DE CADA GÂMETA 5
6 VNTRs Marcadores Moleculares do ADN (número variável de repetições consecutivas) Sequências de nucleótidos que se repetem ao longo do ADN Microssatélites (ACTG)n (CT)n (AG)n 6
7 HERANÇA DOS MICROSSATÉLITES Mãe: Pai: CTCTCTCT 5X CTCTCTCTCT 6X CTCTCTCT CTCTCT 8X 5X 8X 6X 8X CTCTCTCT 5X 5X 5X 5X 6X 7
8 Canis lupus signatus (Lobo ibérico) Canis familiaris Estudos de monitorização da população lupina.
9 Material Biológico Amostragem Tecidos de Cães 192 Tecidos de Lobos 61 9
10 Utilização de 19 marcadores microssatélites Loci utilizados para amplificação do ADN 8 misturas CXX.109; FH2010 FH2054; FH2611 CXX.173; CXX.225; FH2159 ATH121; C22.279; FH2247 FH2001; PEZ08 FH4012 FH2361; C38; REN247M23 FH3210; PEZ06; VWF.X 10
11 Frequência do alelo Alelos para o marcador FH4012 cão lobo
12 Coord. 2 Coordenadas principais cão DOG lobo WOLF Coord. 1 Análise de Coordenadas Principais (PCA) determinada pelo software GenAlEx 6.2 com base em genótipos de 19 loci de microssatélites utilizando a base de dados de genótipos para lobo (denominados WOLF) e dados de genótipos para cães (denominados DOG). 12
13 Análise bayesiana que apresenta a probabilidade de afiliação dos indivíduos nas populações de Lobo (verde) e nas populações de Cão (vermelho) determinada no software Structure
14 Caraterização de alelos exclusivos para Canis lupus signatus. Caraterização de alelos exclusivos para Canis familiaris. Variação na frequência alélica entre espécies para determinados loci. Utilização da base de dados para identificação das espécies: cão/lobo 14
15 15 Monitorização da população lupina
16 16 Contribuição para uma melhor compreensão das actividades e estratégias de sobrevivência das populações de lobo ibérico, para a monitorização das suas áreas de presença e consequente minimização de conflitos da espécie selvagem com a espécie humana. Determinação do responsável pelo prejuízo através da afiliação de amostras ambientais não invasivas (zaragatoas ou dejetos), na espécie Canis familiaris ou Canis lupus signatus.
17 17
18 18
19 COLHEITA DE AMOSTRAS BIOLÓGICAS: SALIVA, DEJECTOS, PELOS, URINA Análise de ADN 19
20 20
21 21 Extração de ADN
22 22 Extração de ADN
23 23 Extração de ADN
24 Utilização de 19 marcadores autossómicos: microssatélite Base de dados de raças de cães portuguesas. Base de dados de tecidos de lobos. 24 Loci utilizados para amplificação do ADN 8 misturas CXX.109; FH2010 FH2054; FH2611 CXX.173; CXX.225; FH2159 ATH121; C22.279; FH2247 FH2001; PEZ08 FH4012 FH2361; C38; REN247M23 FH3210; PEZ06; VWF.X
25 AMPLIFICAÇÃO EM CADEIA DO ADN TÉCNICA DE PCR Separação das cadeias de ADN Síntese de cadeias novas Repetição de ciclos Separação das cadeias de ADN Milhares de cópias do microsatélite 25
26 26 Análise por electroforese capilar
27 27 Leitura das amostras
28 Tipo de amostra Nº de amostras Zaragatoas 50 Dejetos 18 Realização de 3 a 4 reações de amplificação por amostra. Falha de alelos 28
29 Coord. 2 Coordenadas principais DLife 6 DOG WOLF Coord. 1 Análise de Coordenadas Principais (PCA) determinada pelo software GenAlEx 6.2 com base em genótipos de 19 loci de microssatélites utilizando a base de dados de genótipos para lobo (denominados WOLF) e dados de genótipos para cães (denominados DOG). 29
30 30
31 Professor Doutor Francisco Petrucci Fonseca A todos os Colegas do Grupo Lobo: Dr. Duarte Drª Sara A todos os colegas e amigos do grupo de Biologia Molecular Doutor José Matos Doutora Fernanda Simões Engº Diogo Mendonça Doutora Paula Sá Pereira Doutora Joana Guimarães Doutora Elisabete Pires Doutora Isabel do Rosário Drª Fátima Sobral Drª Ana Nunes 31
32 32 Obrigada
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