IMUNIZAÇÃO DE CAMUNDONGOS COM «VACINA» VIVA AVI- RULENTA DO TRYPANOSOM A CRUZI III VARIAÇÃO DO MEIO DE CULTURA

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Vitória Furtado Alencastre
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1 IMUNIZAÇÃO DE CAMUNDONGOS COM «VACINA» VIVA AVI- RULENTA DO TRYPANOSOM A CRUZI III VARIAÇÃO DO MEIO DE CULTURA Hum berto M enezes * e Rosa D. R. Albuquerque ** Os autores d em o n stra m através de testes em cam undongos que variando o m eio de cultivo a avirulência da cepa Y, cultivada, do T rypanosom a cruzi se conserva inalterada. D iante da possibilidade de que se tra te de u m m u ta n te da m esm a lin h a gem Y virulenta, m a n tid a em anim ais, sugerem a designação de PF (Pedreira de F reitas) para essa n o va cepa. INTRODUÇÃO A dm itindo-se que os processos de tr a n sição, no ciclo v ital dos tripanosom as, e n volvam algum a fase ou fases críticas te r- m osensíveis que possam ser induzidas por m odificações do meio n u trie n te (12) e que vários fato res ligados ao m eio de cu ltu ra influenciem a infectividade de form as de cu ltu ra (3), p ropusem o-nos v erific ar o co m p o rtam en to d a avirulência da cepa Y, m a n tid a em cu ltu ra em d iferen tes meios. M ATERIAL E MÉTODOS U tilizam os a cepa Y, isolada por Silva & N ussenzw eig (11), sob a sua form a aviru le n ta d escrita por um de nós (4, 5). Essa cepa do T rypanosom a cruzi, além do cultivo em m eio sólido de P ack - c h a n ia n (10), foi tam b ém cu ltiv ad a nos m eios líquidos de W arren (13) e de Nõlle r (9). Nos dois prim eiros, os repiques fo ram feitos cada 15 dias e no últim o cad a 8 dias. As c u ltu ra s fo ram m a n tid a s à te m p e r a tu r a am b ien te que em R ibeirão P rêto v ario u de 10,5 C a 42,0 C. As experiências foram conduzidas n as épocas de m aio r e de m en or elevação té r m ica. As c u ltu ras com 20 a 25 dias, no meio de P ack c h an ian, com 15 dias no de W a r ren e com 8 dias no de N oller fo ra m ce n trifu g a d a s e la v ad a s v ária s vêzes em solução salina, até se obter um so b ren a d an - te lím pido. A co n cen tração fin al dos tripanosom as variou de 2,5 x 101» a 5 x 10s p a ra sita s por ml. O p e rc e n tu a l de form as m etacíclicas foi de ap ro x im ad am en te 5 por cento no meio de W arren, 2,5 por cento no de N oller e de cêrca de 10 por cento no de P ack c h an ian. As v acin a s foram u tilizadas logo após o seu p rep aro e tin h a m sem pre form as vivas, cu ja percen tagem variou de 50 a 90 por cento. As experiências fo ram conduzidas em cam undongos albinos de um a m esm a linhag em, m a n tid a h á 16 anos no B iotério da F aculdade de M edicina de R ibeirão P rêto. Os an im ais era m todos do sexo m a s culino e pesavam, no início d a exp e rim entação, 10 g, em m édia. (*) U.S.P. Departamento de Patologia. Faculdade de Medicina de Ribeirão Prêto, São Paulo, Brasil. (**; Departamento de Ciências Biológicas. Fae. Far. Odont. Ribeirão.Prêto. Recebido para publicação em

2 70 Rev. Soc. Bras. Med. Trop. Vol. IV N'-' 2 F o ra m utilizados 156 cam undongos, d i vididos em 4 grupos. No prim eiro grupo h av ia 36 an im ais que fo ra m vacinados por v ia su b c u tân e a com 0,2 m l d a v a c in a p re p a ra d a em meio de P ack c h an ian. Com a v acin a de W a rre n fo ram im u nizados 22 cam undongos e com a do meio de N oller 19. Q uatro sem an as após, todos os a n i m ais v acinados e m ais 79 outros, to m a dos como controles, fo ram inoculados com trip an o so m as da cepa Y, v iru len ta, do T rypanosom a cruzi. m a n tid a em c a m u n d o n gos. O inóculo foi o m esm o p a ra todos os anim ais, i.e., p a ra sita s por g ram a de pêso corporal. A ntes da infecção v iru le n ta foi feito xenodiagnóstico em 10 dos cam undongos im unizados com a v acin a do meio de N oller e em 8 dos do m eio de W arren. Cinco n in fa s de R h o d n iu s prolixus fora m ap licad as a cada an im al do prim eiro grupo e cinco n in fa s de R h o d n iu s neglectu s a cada um dos 8 an im ais do segundo grupo. Todos os tria to m ín e o s se m o stra ra m isentos de trip an o so m as quando fora m exam inados 30 dias depois. P a ra site m ia s dos cam undongos in fe c ta dos fo ram realizad as segundo a técn ica de P izzi-b rener (1), nos 8., 15. e 30. dias após a inoculação. Os p erc en tu a is de m o rta lid ad e fo ram referidos a essas d a ta s e as experiências fo ra m co n sid erad as en c errad as no 30. dia, em bora, em alguns casos, os an im ais t i vessem sido observados até 90 dias, sem m odificações nos resu ltad os. RESULTADOS A T ab ela 1 e os G ráficos I e II re su m em os dados obtidos. E videncia-se pelos m esm os u m a n íitd a e fo rte proteção, co nferid as pelas 3 v acinas que não diferem sig n ificativ am en te en tre si. O n erc en tu a l de m o rtalid ad e foi in sig n ific an te e n tre os an im ais im unizados Q l por cento, 4 por cento e 0 por cento) m as em contraposição m o stro u -se e x tre m a m en te elevado (81 por cento) en tre os an im ais controles. DISCUSSÃO E CONCLUSÕES Um de nós (6. 7) já dem onstrou que em hospedeiros vertebrados, a fo rm a aviru le n ta do T rypanosom a cruzi conserva sua avirulência, a despeito dos vários meios em pregados, se ja p a ra dim in u ir a resistê n c ia do hospedeiros, seja p a ra ex acerbar a v iru lên cia do flagelado. M onteiro (8 > conseguiu d em o n strar que ta m b ém no hospedeiro in v erteb rad o o trip a n o so m a da cepa av iru len ta não é c a paz de re to rn a r à sua p rim itiv a v iru lê n cia p a ra cam undongos. Com o p rese n te tra b a lh o verificam os que, pelo m enos com os m eios de cu ltu ra em pregados, a avirulência do trip anoso m a se m a n té m in a lte ra d a, quando se faz v a ria r o m eio n u trie n te. E m bora nos faltem estudos cito -g en éticos, estam os cada vez m ais inclinados a a d m itir que a cepa cultivada, com a qual tem os trab a lh ad o, re p re se n ta u m m u ta n te d a cepa Y que até hoje se te m m antid o a lta m e n te v iru len ta, por sucessivas p a ssa gens, em cam undongos. Dêsse m odo e caso essa suposição se veja co n firm a d a p o r estudos lab o rato riais adequados, julgam os ju sto considerar a cepa a v iru le n ta como u m a nova lin h ag em p a ra a q ual sugerim os desde logo a designação P F em h o m enagem a P ed reira de F re ita s (2), que chefio u a equipe que e s tu dou a p ac ie n te de quem a cepa Y foi isolada. S U M M A R Y T he a uthors th ro u g h exp p erim en ts in m ice have d em o n stra ted th a t th e avirulence o f th e Y stra in o f T. cruzi, described by one of th e m (H.M.) rem a m unaltered if th e culture m éd iu m is changed. A ccepting th a t th e re are stro n g evidences th a t su c h stra in represents a m u ta n t o f th e viru le n t Y stra in, k e p t in m ice, th e a u th o rs suggest th e designation PF fo r th e new stra in, as a n hom age to th e late Pedreira de F reitas w h o ãiscovered a n d exa m in ed th e japanese p a tie n t fro m w h o m th e Y strain o f th e T ry p an o so m a cruzi w as isolated.

3 M arço/abril, 1970 Rev. Soc. Bras. Med. Trop. 71 GRAFICO t -A-À'A- VAC. MEIO ^ACKCHANIAN M m VAC- ME i 0 WARREN... VAC. ME i 0 NÔLLER CONTROLES EM 5mmJ OE SANGUE Í AS A P 0*S INFECÇÃO

4 TABE LA Meio de cu ltu ra d a vacina N úm ero de c a m u n - dongos 8. d ia pós infec. P a ra site m ia (m ed ian a) N. m ortes P ack c h a n ia n W arren N oller T o tal de vacinados 77 C ontroles

5 1 15. d ia pós infec. 30. dia pós infec. P arasitem ia N. P a ra site m ia N. (m ediana) m ortes (m ed ian a) m ortes

6 M arço/abril, 1970 Rev. Soc. Bras. Med. Trop. 73 SSAF1.C0 n VAC.MEIO PACKCHANíAN VAC.MEIO 'M ARREN VAC.MEIO NCLLER CO NTROLES LJ o ec a «50 [AS A P OS í N F E C Ç A 0 33 BIBLIOG 1. BRENER, Z. C ontribuição ao estudo da te ra p ê u tic a ex p erim en tal da D oença de C hagas. Tese. Fac. F arm. O dont. Univ. M inas G erais, Belo H o rizonte, FREITAS, J.L.P.; LION, M.F, & PAR- TARI, J.T.A. R esultados de u m a in vestig ação sôbre M oléstia de C h a gas realizada no M unicípio de M arília e outros, com estudo clínico de dois casos agudos d a doença. Rev. Hosp. C línicas (S. P au lo ). 8:81-92, GEIGY, R. & KAUFMANN O n th e infectivity of cu ltu re try p an o so m a of th e T. brucei group. 8 '11 In t. Congre. T ro p. M ed. M alária, T eh eran, 1968 (A b stracts Reviews, p ág. 324). 4. MENEZES, H. P ro tectiv e effect oí a n a v iru le n t (cu ltiv ated ) s tra ín of T. cruzi a g a in st ex p erim en tal in fectio n in m ice. Rev. In st. M ed. Trop. S. P aulo. 10:1-4, R A F I A 5. MENEZES, H. Active im m u n izatio n of dogs w ith a n o n a v iru le n t stra in of T rypanosom a cruzi. Rev. In st. Med. Trop. S. P aulo. 11: , MENEZES, H. I T he avirulence of th e cu ltiv ated Y s tra in of T ryp a nosom a cruzi. Rev. In st. Med. Trop. S. P aulo No prelo. 7. MENEZES, H. II T he avirulence of th e cu ltiv ated Y s tra in of T ryp a nosom a cruzi. Rev. In st. Med. Trop. S. P au lo No prelo. 8. MONTEIRO, J.C. A av iru lên cia da cepa Y cultivada, do T. cruzi, no hospedeiro in v erteb rad o. Em elabo ração. 9. NÕLLER, W. B lu t u n d In sek te n - flag ellaten Z ü ch tu n g au f P la tte n. Arc. S chiffs. u. T ropen. Hyg. 21:53-94, PACKCHANIAN, A. O n th e cu ltívatio n of seven species of T rypanosom es in vitro. Science. 80: , 1934.

7 74 Rev. Soc. Bras. Med. Trop. Vol. IV SILVA, L.H.P. de C. & NUSSEN- ZWEIG, V. Sôbre u m a cepa de T. cruzi a lta m e n te v iru le n ta p a ra o cam undongo branco. Folia. Clin. Biol. (S. P a u lo ). 20: , SILVA, L.H. PEREIRA; & CAMAR GO, E.P. D iffe re n tia tio n in th e life cycle of trypanosom es. Rev. In st. M ed. Trop. S. P aulo. 6: , WARREN, L.G. M etabolism of S ch izo try p an u m cruzi. C hagas. I E ffect of cu ltu re age a n d eoncentra tio n on resp ira to ry rate. J. P a - rasit. 46: , 1960.

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