RONALDO DO NASCIMENTO 1,3 e PAULO R. MOSQUIM 2. Introdução

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1 Revist Brsil. Bot., V.27, n.1, p.63-7, jn.-mr. 24 Efeito do áido gierélio e diferentes minoáidos sore s tividdes d sintetse d glutmin e sintse do glutmto e sore o resimento de frutos de soj RONALDO DO NASCIMENTO 1,3 e PAULO R. MOSQUIM 2 (reeido: 3 de outuro de 22; eito: 23 de outuro de 23) ABSTRACT (Effet of the gierelli id nd different minoids on the tivities of glutmine synthetse nd glutmte synthse, nd on growth of soyen fruits). The work hd s ojetive to evlute the effet of different minoids nd of the giereli id (GA) on the tivity of glutmine synthetse (GS) nd glutmte synthse (GOGAT) nd the growth of soyen fruits. Immture fruits were ultivted with different ploutrzol (PBZ) onentrtions, inhiitor gierellin synthesis, whih it inhiited the growth of the fruits in up to 8%. In seond stge, the effet of the GA ws evluted on the growth of the soyen fruits ultivted with PBZ. The growth regultor reestlished the growth of the ultivted fruits with,34 mm PBZ. However, with,85 mm PBZ it ws not otined the sme positive effet, inditing possile level phytotoxi. Following fruits ws ultivted during eight dys, with glutmine, sprgine or llntoine, with or without GA, fter whih the enzymti tivities were determined. The enzymes of ssimiltion of the nitrogen went more tive under presene of the llntoine. The GA inhiited the GS tivity nd it stimulted the of Fd-GOGAT nd of NADH-GOGAT. The Fd-GOGAT tivity went superior of the NADH-GOGAT, perhps due to redued ferredoxin in the ultivted fruits under onstnt illumintion, dvent of the photosyntheti. The results indite tht, proly, gierellins re involved in the growth of immture fruits of soyen nd in regultion enzymti tivities of the GS nd GOGAT in tht fruits. Key words - minoids, gierellin, growth regultor, nitrogen, ploutrzol RESUMO (Efeito do áido gierélio e diferentes minoáidos sore s tividdes d sintetse d glutmin e sintse do glutmto e sore o resimento de frutos de soj). O trlho teve omo ojetivo vlir o efeito de diferentes minoáidos e do áido gierélio (GA) sore tividde d glutmin sintetse (GS) e d glutmto sintse (GOGAT) e o resimento de frutos de soj. Frutos imturos form ultivdos om diferentes onentrções de ploutrzol (PBZ), iniidor d iossíntese de gierelins, o qul iniiu o resimento dos frutos em té 8%. Em seguid foi vlido o efeito do GA sore o resimento dos frutos de soj ultivdos om PBZ. O reguldor de resimento resteleeu o resimento dos frutos ultivdos om,34 mm de PBZ. Entretnto, om,85 mm de PBZ não se oteve o mesmo efeito positivo, indindo um possível nível fitotóxio. Posteriormente os frutos form ultivdos durnte oito dis om glutmin, sprgin ou lntoín, n presenç ou não de GA, pós o que determinrm-se s tividdes enzimátis. As enzims de ssimilção do nitrogênio form mis tivs n presenç d lntoín. O GA iniiu tividde d GS e estimulou s d Fd-GOGAT e d NADH-GOGAT. A tividde d Fd- GOGAT foi superior à d NADH-GOGAT, tlvez devido à ferredoxin reduzid presente nos frutos ultivdos so iluminção onstnte, dvind d tividde fotossintéti. Os resultdos otidos permitem onluir que gierelins, provvelmente, estão envolvids no resimento de frutos imturos de soj e n regulção d tividde ds enzims GS e GOGAT nesses frutos. Plvrs-hve - minoáidos, gierelin, nitrogênio, ploutrzol, reguldor do resimento Introdução As dus prinipis forms de nitrogênio sorvids pels plnts superiores são o nitrto e o mônio. O nitrto sorvido pels rízes, pode ser rmzendo nos vúolos, reduzido mônio ou trnslodo pr prte 1. Universidde Federl de Pelots, Instituto de Biologi, Deprtmento de Botâni, Cmpus universitário, Pelots, RS, Brsil. 2. Universidde Federl de Viços, Centro de Ciênis Biológis e d Súde, Deprtmento de Biologi Vegetl, Cmpus universitário, Viços, MG, Brsil. 3. Autor pr orrespondêni: ronsim@ufpel.the.r ére, onde pode ser metolizdo mônio (Glss et l. 22). As tividdes oordends d glutmin sintetse (GS) e d glutmto sintse (GOGAT) possiilitm ssimilção do mônio lierdo pel redutse do nitrito. A GS oup um posição entrl no metolismo do nitrogênio ns plnts, pois é responsável pel ssimilção iniil do mônio. Ess enzim tlis inorporção do mônio em glutmto, formndo glutmin. A GOGAT, por su vez, tlis trnsferêni redutiv do nitrogênio mid d glutmin pr posição -eto do 2-oxoglutrto, o que result n formção de dus moléuls de glutmto (Gregerson et l. 1993).

2 64 R. Nsimento & P.R. Mosquim: Efeito de minoáidos e gierelin sore o metolismo de N em soj O produto d tução do ilo GS/GOGAT, o glutmto, pode servir omo sustrto pr iossíntese de vários metólitos nitrogendos, os quis são preursores de proteíns e áidos nuléios (Shuller et l.1986). Devido à importâni d GS e GOGAT n ssimilção do nitrogênio ns plnts, Rhodes et l. (1975) destm o fto de que esss enzims são ontrolds por vários menismos regultórios. Pet & Toin (1996) verifirm em evd que s tividdes desss enzims vrirm em função d fonte de nitrogênio utilizd. Chnd et l. (1998) otiverm resultdos om plântuls de mostrd, mostrndo que o áido gierélio (GA 3 ) estimulou tividde d GS n riz e no oleóptilo e iniiu nos otilédones. Isso indi que tividde ds enzims GS e GOGAT pode presentr lgum tipo de regulção hormonl. Tendo em vist que síntese d glutmin oorre vi reção d GS e sendo el o sustrto pr GOGAT, GS desempenhri um ppel entrl no metolismo do nitrogênio. Há evidênis de que GS poderi estr sujeit diversos tipos de ontroles, dentre os quis estão repressão e tivção em respost diferentes minoáidos e fitormônios (Chnd et l. 1998). As gierelins são responsáveis por váris funções fisiológis importntes no desenvolvimento ds plnts superiores (Hooley 1994, Lnge 1998). Ds funções mis onheids, destm-se moilizção de reserv em sementes de ereis em germinção e promoção do longmento do ule em lgums espéies. Dependendo d plnt, s gierelins tmém podem ser neessáris à expnsão folir, à indução florl, à iossíntese de ntoinins (Stephen et l. 1997) e o desenvolvimento de frutos imturos (Gree 1987, Gri-Mrtinez et l. 1987, Vn Huizen et l. 1997). Brendse et l. (1986) vlirm o resimento de frutos e sementes de Aridopsis defiientes em gierelins. Eles oservrm que ess defiiêni não influeniou o resimento ds sementes; no entnto, o resimento dos frutos foi fetdo. Sntes et l. (1995) oservrm que s gierelins estão envolvids no resimento de frutos de ervilh. Tendo em vist importâni ds enzims glutmin sintetse e glutmto sintse pr o metolismo do nitrogênio, proesso fundmentl pr o úmulo de proteíns em sementes de soj, e d esssez de informções sore os menismos de ontrole d tividde desss enzims durnte o resimento iniil de frutos de soj, neste trlho prourou-se vlir o efeito do áido gierélio e de diferentes minoáidos sore tividde d glutmin sintetse e glutmto sintse e sore o resimento de frutos imturos de soj. Mteril e métodos Sementes de soj [Glyine mx (L.) Merril v. UFV 16], forneids pelo Deprtmento de Fitoteni d Universidde Federl de Viços, form semeds em vsos de polietileno om pidde pr três litros, ontendo rei lvd. As plântuls otids form mntids em s de vegetção so ondições nturis de tempertur, umidde reltiv e luminosidde durnte o período de outuro de 1997 dezemro de Qundo s plântuls presentvm o primeiro trifólio ompletmente expndido, proedeu-se um desste, deixndo-se pens dus por vso. Esss form irrigds, sempre que neessário, om águ e, três vezes por semn, form plidos 25 ml de um solução nutritiv omplet de Hoglnd (Hoglnd & Arnon 1938). As plnts permneerm nesss ondições té que os frutos presentssem mss fres proximd de 5 mg, qundo form trnsferids o lortório visndo à instlção do sistem de ultivo dos frutos de soj em ondições semisséptis. O ultivo in vitro seguiu metodologi desrit por Mosquim & Sodek (1991). No lortório, s plnts form ompletmente desfolhds, retirdos os frutos em exesso, deixndo-se pens os frutos om o tmnho dequdo ligdos à se dos peíolos. Em seguid os ules form imersos em ndejs om águ destild sendo ortdos segmentos dos ules om 6 mm de omprimento e que ontinhm um fruto. Após rigoros seleção qunto homogeneidde dos explntes, os mesmos tiverm sus ses mergulhds em frsos de vidro om pidde pr 1 ml ontendo 6,5 ml dos meios de ultivo em d frso. A d 48 hors, er de 2 mm do segmento de ule foi ortdo em su se pr desostruir lgum vso que poderi estr loquedo. No qurto di de ultivo, os meios form trodos pr evitr exustão de mineris ou sustânis orgânis. O meio de ultivo líquido foi preprdo segundo Chndler et l. (1983), pr os mronutrientes, exeto o nitrogênio, e Thompson et l. (1977), pr os mironutrientes. Os íons ompnhntes do nitrogênio retirdos d fórmul originl form diiondos juntmente om outros sis utilizdos. Como fontes exlusivs de nitrogênio, utilizou-se glutmin ou sprgin ou lntoín, sempre n onentrção finl de 85,7 mm de nitrogênio e omo fonte de rono, srose, n onentrção de 5%. O ph dos meios de ultivo foi justdo pr 5,. Os explntes form mntidos so irrdiâni ontínu de proximdmente 8 µmol.m -2.s -1 e tempertur de 25 ± 2 ºC. Num etp iniil vlirm-se o efeito do áido gierélio e ploutrzol [(2RS, 3RS)-1-(4-lorofenil)-4,4-

3 Revist Brsil. Bot., V.27, n.1, p.63-7, jn.-mr dimetil-2-(1,2,4-trizol-1-il)-pentno-3-ol], um iniidor d iossíntese de gierelins, sore o resimento dos frutos. O ploutrzol foi utilizdo isoldmente ns onentrções de mm;,34 mm;,17 mm;,34 mm; e,85 mm. Num segund etp, foi vlido o efeito d plição de áido gierélio (GA 3 ) sore o resimento dos frutos ultivdos om ploutrzol. Utilizrm-se, então, o ploutrzol isoldmente ns onentrções de,34 mm e,85 mm e áido gierélio em 1-4 M, lém ds ominções entre,34 mm e,85 mm do iniidor e 1-4 M de GA 3. Nesses experimentos utilizou-se glutmin omo fonte de nitrogênio. Em seguid form utilizds s fontes exlusivs de nitrogênio glutmin ou sprgin ou lntoín. Após oito dis de ultivo, determinrm-se o omprimento e lrgur dos frutos om um pquímetro. A mss fres totl dos frutos foi determind em um lnç nlíti. Em seguid, os frutos form trnsferidos pr um estuf ontrold pr 75 ºC, onde permneerm té tingir peso onstnte, pr determinção d mss se. Plnts intts form mntids n s de vegetção pr otenção de ontroles, tendo em vist omprções entre o omportmento dos frutos ultivdos in vitro om frutos ultivdos in situ nos dis d montgem (ontrole D) e desmontgem (ontrole D8) dos experimentos. Num etp posterior, verifiou-se o efeito ds três fontes de nitrogênio e do áido gierélio sore tividde ds enzims GS e GOGAT dependente de NADH ou de ferredoxin. Pr isso, explntes dos frutos form ultivdos om glutmin ou sprgin ou lntoín, omo fontes exlusivs de nitrogênio, om ou sem 1-4 M de áido gierélio. O período de ultivo foi de oito dis, pós o qul vlirm-se s tividdes enzimátis nos frutos sempre no mesmo horário no iníio d mnhã. Pr determinção de todos os ensios enzimátios, foi preprdo um extrto ruto dos frutos, merndo-os em lmofriz om pistilo (previmente resfridos). O meio de extrção seguiu metodologi de Hüssler et l. (1994) om lgums modifições, sendo onstituído de tmpão Tris-HCl (1 mm, ph 7,8), MgSO 4 (2,5 mm), KCl (25 mm), DTT (1 mm), β-merptoetnol (1%, v/v), EDTA (,25 mm), Triton X-1 (,5%) e glierol (2%, v/v). Form utilizdos ino ml de tmpão de extrção por grm de teido dos frutos. A tempertur de extrção foi mntid entre e 4 ºC, utilizndo-se nho de gelo. O homogeneizdo ssim otido foi entrifugdo 15 g, durnte quinze minutos, 4 ºC. Alíquots do sorendnte (5 µl pr GS, 1 µl pr Fd-GOGAT e 3 µl pr NADH-GOGAT) form imeditmente usds pr s vlições ds tividdes enzimátis. A tividde d GS foi determind pel formção de glutmil-hidroxmto e quntifid om loreto férrio idifido. O ensio foi relizdo onforme Rhodes et l. (1975), modifido por Tonin (1988) e Junghns & Mosquim (1995). A tividde d NADH-GOGAT foi quntifid por meio d mensurção do NADH oxiddo formdo. O ensio foi relizdo seguindo-se o método proposto por Rhodes et l. (1975), modifido por Tonin (1988) e Junghns & Mosquim (1995). Pr determinção d tividde d Fd-GOGAT, metil viologênio reduzido foi usdo omo sustrto (Hüssler et l. 1994). Neste trlho foi utilizdo um delinemento experimentl inteirmente sulizdo, em que d explnte se onstituiu num repetição. Pr s determinções ds msss fres e se, omprimento e lrgur, d trtmento foi omposto por seis repetições e pr s tividdes enzimátis, qutro repetições. As médis form omprds pelo teste de Tukey, em nível de 5% de proilidde. Resultdos e Disussão O umento n onentrção de ploutrzol no meio de ultivo rretou um redução expressiv no omprimento (figur 1A), n lrgur (figur 1B) e n produção de mss se (figur 1C) dos frutos, em relção o ontrole sem fitorreguldor. A redução mis entud oorreu om mss se, que hegou 8%; o omprimento e lrgur diminuírm em 64% e 67%, respetivmente, onforme onentrção de PBZ umentv. Um possível explição pr esse efeito iniitório seri que o ploutrzol tenh iniido enzim oxidse do ent-ureno (Gri-Mrtinez et l. 1987), e, onsequentemente, s etps oxidtivs do ent-ureno áido ent-urenóio terim sido loqueds, o que pode ter iniido iossíntese de gierelins nos frutos de soj, levndo um possível diminuição dos seus níveis endógenos e à onseqüente redução do resimento dos frutos. Resultdos semelhntes form tmém oservdos em frutos jovens de ervilh, por Rodrigo et l. (1997) e Gri-Mrtinez et l. (1987). Foi verifido por esses utores que o GA 3, um ds gierelins mis tivs no resimento dos frutos, teve seus níveis endógenos entudmente reduzidos pelo ploutrzol, e, em onseqüêni, o resimento dos frutos foi drstimente iniido. O ploutrzol n onentrção de,85 mm, usou iniição no resimento dos frutos nos primeiros dis pós su plição (ddos não mostrdos). Isso, provvelmente, oorreu devido su fáil trnsloção té os frutos, um vez que ess sustâni é filmente trnsportd vi xilem (Wng et l. 1986, Sterrett 1985). A figur 2 mostr que plição de GA 3 em frutos de soj so efeito do ploutrzol rretou um resimento igul ou superior o ontrole D8. Qundo os explntes form ultivdos om ploutrzol em mior onentrção, ou sej, de

4 66 R. Nsimento & P.R. Mosquim: Efeito de minoáidos e gierelin sore o metolismo de N em soj 5 A 5 A Mss se (mg) Lrgur (mm) Comprimento (mm) D D8 SI C1 C2 C3 C4 d d D D8 SI C1 C2 C3 C4 B C Mss se (mg) Lrgur (mm) Comprimento (mm) d d D D8 SF T1 T2 T3 T4 T5 D D8 SF T1 T2 T3 T4 T5 B C D D8 SI C1 C2 C3 C4 D D8 SF T1 T2 T3 T4 T5 Figur 1. Efeito de diferentes onentrções de ploutrzol (PBZ) sore o omprimento (A), lrgur (B) e produção de mss se (C) de frutos de soj. D (ontrole di ), D8 (ontrole di 8), SI (sem PBZ), C1 (PBZ,34 mm), C2 (PBZ,17 mm), C3 (PBZ,34 mm) e C4 (PBZ,85 mm). Médis seguids de um mesm letr não diferem entre si pelo teste de Tukey (P,5). Figure 1. Effet of different ploutrzol (PBZ) onentrtions on the length (A), width (B) nd dry mtter (C) in soyen fruit. D (ontrol dy ), D8 (ontrol dy 8), SI (without PBZ), C1 (PBZ.34 mm), C2 (PBZ.17 mm), C3 (PBZ.34 mm) e C4 (PBZ.85 mm). Mens followed y sme letters re not signifintly different y Tukey test (P.5). Figur 2. Efeito do ploutrzol (PBZ) e áido gierélio (GA 3 ) sore o omprimento (A), lrgur (B) e mss se (C) de frutos de soj. D (ontrole di ), D8 (ontrole di 8), SF (sem PBZ e GA 3 ), T1 (GA M), T2 (PBZ,34 mm), T3 (PBZ,85 mm), T4 (PBZ,34 mm + GA M) e T5 (PBZ,85 mm + GA M). Médis seguids de um mesm letr não diferem entre si pelo teste de Tukey (P,5). Figure 3. Effet of the ploutrzol (PBZ) nd gierelli id (GA 3 ) onentrtions on the length (A), width (B) nd dry mtter (C) in soyen fruit. D (ontrol dy ), D8 (ontrol dy 8), SF (without PBZ nd GA 3 ), T1 (GA M), T2 (PBZ.34 mm), T3 (PBZ.85 mm), T4 (PBZ.34 mm + GA M) nd T5 (PBZ.85 mm + GA M). Mens followed y sme letters re not signifintly different y Tukey test (P.5).

5 Revist Brsil. Bot., V.27, n.1, p.63-7, jn.-mr ,85 mm, oorrerm diminuições no omprimento (52%), n lrgur (6%) e no resimento dos frutos (7%), om se no vlor d mss se, em relção o ontrole sem GA 3 e ploutrzol (figur 2). Comprndo esses resultdos àqueles otidos qundo os frutos form trtdos pens om áido gierélio, verifiou-se que s reduções form de 63%, 64%, e 8%, no omprimento, n lrgur e n mss se dos frutos, respetivmente. Peree-se, portnto que produção de mss se dos frutos foi mis fetd pelo ploutrzol do que lrgur e o omprimento. Um vez que ess sustâni inie produção de gierelins, possivelmente esse efeito pode ter sido usdo pelo menor fluxo de srose os frutos, pois, segundo Wever et l. (1969), s gierelins promovem um fluxo de nutrientes, dentre os quis, roidrtos, fundmentis pr os frutos em resimento. Isto indi que, possivelmente, s gierelins endógens produzids nos frutos podem não ser sufiientes pr mnter o resimento, sendo neessário, portnto, o forneimento de gierelins de outrs prtes d plnt. Oserv-se ind n figur 2B que dição de ploutrzol no meio de ultivo resultou n iniição d lrgur dos frutos, omprndo-se os trtmentos ontendo,34 mm e,85 mm de ploutrzol o trtmento sem ploutrzol. A iniição foi mis entud n presenç d mior onentrção de ploutrzol. Qundo se pliou 1-4 M de GA 3 onjuntmente om,34 mm do iniidor d iossíntese de gierelins, lrgur dos frutos foi prontmente resturd, equiprndo-se o trtmento ontrole sem o iniidor e o trtmento om 1-4 M de GA 3 isoldmente. Isto sugere que s gierelins estão envolvids no resimento de frutos imturos de soj. A reversão não foi verifid n presenç de,85 mm de ploutrzol, indindo que esse pode ter sido um nível fitotóxio pr os frutos. Trlhos semelhntes desenvolvidos por Sntes et l. (1995) e Gri- Mrtinez et l. (1997), om frutos de ervilh em fse iniil de desenvolvimento, tmém demonstrrm que o ploutrzol iniiu o resimento dos frutos, sendo esse efeito revertido pelo GA 3. Esses utores reltrm que o ploutrzol reduziu entudmente o nível de gierelins nos frutos, fetndo seu resimento. Em relção o omprimento (figur 2A) e produção de mss se (figur 2C), oservou-se o mesmo pdrão de omportmento. N presenç de 1-4 M de GA 3 no meio de ultivo, o ploutrzol n onentrção de,85 mm não usou reversão. Isso oorreu pens em,34 mm de ploutrzol e em omprção o trtmento om 1-4 M de GA 3 isoldmente. A dição de glutmin, sprgin ou lntoín o meio de ultivo promoveu umento no omprimento dos frutos (figur 3A), em relção o ontrole in vitro (sem nitrogênio). Entretnto, fonte de nitrogênio não influeniou o tmnho ds vgens, indindo que, pr o omprimento dos frutos, no estádio de desenvolvimento utilizdo, s fontes nitrogends empregds form igulmente efiientes. O mesmo pdrão de omportmento foi otido pr lrgur dos frutos (figur 3B), ou sej, todos os minoáidos utilizdos promoverm o resimento em lrgur ds vgens. Tods s fontes de nitrogênio form efetivs pr inrementr o úmulo de mss se ds vgens. A glutmin e sprgin proporionrm s miores quntiddes, seguid d lntoín (figur 3C). Apesr de não hver diferenç signifitiv, glutmin induziu um inremento n mss se dos frutos superior o d sprgin, o qul lnçou 92%, omprndo-se om o resimento dos legumes ultivdos sem nitrogênio. Esses resultdos, possivelmente, refletem o omportmento d plnt intt, pois, emor plnt de soj não trnsporte grndes quntiddes de glutmin, est é prinipl fonte de nitrogênio utilizd durnte o resimento dos frutos (Hsu et l. 1984). Rinird et l. (1984) verifirm que o resimento de emrião de soj ultivdo in vitro é muito lento em meio de ultur suplementdo om ureídeos, no entnto, é rápido qundo fonte de nitrogênio utilizd é glutmin ou sprgin. A glutmin é fonte de nitrogênio mis efiiente pr o úmulo de mss se em otilédones imturos de soj, seguid d sprgin e lntoín (Hg & Sodek 1987). Junghns & Mosquim (1995) tmém verifirm inrementos n mss se de sementes de soj, empregndo sprgin, glutmin e lntoín omo fontes de nitrogênio. Em outrs espéies, omo trigo, n usêni de um fonte nitrogend, o úmulo de mss se é drstimente reduzido, podendo inlusive ser nulo (Brlow et l. 1983). A tividde d GS foi sempre superior às tividdes d NADH-GOGAT e Fd-GOGAT, independentemente d fonte de nitrogênio e d presenç do áido gierélio (tel 1). Isso permite sugerir que, no estádio de desenvolvimento utilizdo, os frutos estvm inorporndo mônio em ompostos orgânios, visto que GS é onsiderd vi prinipl de ssimilção desse íon. Segundo Junghns & Mosquim (1995), os quis tmém verifirm elevd tividde d GS em frutos

6 68 R. Nsimento & P.R. Mosquim: Efeito de minoáidos e gierelin sore o metolismo de N em soj Mss se (mg) Lrgur (mm) Comprimento (mm) D D8 SN GLN ASN ALN D D8 SN GLN ASN ALN D D8 SN GLN ASN ALN Figur 3. Efeito d glutmin (GLN), sprgin (ASN) e lntoín (ALN) sore o omprimento (A), lrgur (B) e mss se (C) de frutos de soj. D (ontrole di ), D8 (ontrole di 8) e SN (sem nitrogênio). Médis seguids de um mesm letr não diferem entre si pelo teste de Tukey (P,5). Figure 3. Effet of the glutmine (GLN), sprgine (ASN) nd llntoin (ALN) on the length (A), width (B) nd dry mtter (C) in soyen fruit. D (ontrol dy ), D8 (ontrol dy 8) nd SN (without nitrogen). Mens followed y sme letters re not signifintly different y Tukey test (P.5). A B C de soj, isso seri deorrente d inorporção iniil do mônio proveniente d degrdção d sprgin e lntoín, por meio d ção ds enzims sprginse e lntoínse, respetivmente. As tividdes desss enzims form detetds em frutos de soj por Gomes & Sodek (1984). A lntoín induziu s miores tividdes pr s três enzims vlids (tel 1). Isso, provvelmente, oorreu em função d mior lierção de mônio, pois lntoín possui qutro átomos de nitrogênio, o psso que glutmin e sprgin, pens dois. Amônio é lierdo durnte o tolismo d lntoín, entrndo n vi de ssimilção do nitrogênio, por meio do sistem GS/GOGAT. Verifi-se, portnto, que o ureídeo lntoín foi mis efiiente do que glutmin e sprgin pr tução d GS. O produto d tividde dess enzim, glutmin, é utilizdo omo sustrto d GOGAT. Assim, s tividdes d GS e d GOGAT form miores n presenç d lntoín nos frutos de soj em fse iniil de desenvolvimento. O áido gierélio iniiu tividde d GS n presenç de quisquer ds fontes de nitrogênio orgânio utilizds. Isso permite sugerir que, em vgens no iníio do resimento, GS pode ter su tividde moduld negtivmente por quele reguldor de resimento, n onentrção utilizd (1-4 M) ou est onentrção pode ter usdo iniição. Alguns experimentos demonstrm que os fitormônios influenim o metolismo do nitrogênio trvés de lterções n tividde ds enzims relionds, omo nitrto redutse, nitrito redutse, GS e GOGAT. Goupil et l. (1997) verifirm que tividde d nitrto redutse foi mior em meio ontendo 1-7 M de áido sísio. Conentrções superiores iniirm tividde d enzim. A tividde d Fd-GOGAT e NADH-GOGAT foi estimuld por GA 3. Provvelmente, ess gierelin regul tividde desss enzims, estimulndo-s. A tividde d Fd-GOGAT foi entudmente mior do que d NADH-GOGAT. Nos frutos resendo so iluminção oorre tividde fotossintéti, fonte de ferredoxin reduzid, qul serve omo dodor de elétrons pr tividde d Fd-GOGAT. Isso, provvelmente, permitiu mior tividde enzimáti d Fd-GOGAT qundo em omprção om tividde d NADH-GOGAT. Conlui-se, portnto, que gierelins são, provvelmente, fundmentis pr o resimento de frutos imturos de soj e estão envolvids n regulção ds tividdes ds enzims glutmin sintetse e glutmto sintse nesses frutos.

7 Revist Brsil. Bot., V.27, n.1, p.63-7, jn.-mr Tel 1. Efeitos d glutmin, sprgin e lntoín, qundo plids em onjunto om áido gierélio (+GA) ou n usêni dele (-GA), sore tividde d sintetse d glutmin (GS), sintse do glutmto dependente de ferredoxin (Fd- GOGAT) e sintse do glutmto dependente de NADH (NADH-GOGAT). Médis seguids de um mesm letr em d olun (minúsul) e em d linh (miúsul) não diferem entre si pelo teste de Tukey (P,5). Tle 1. Effets of the glutmine, sprgine nd llntoin, with (+GA) or without (-GA) gierelli id, on the tivities of glutmine synthetse (GS) nd glutmte synthse dependent of the ferredoxin (Fd-GOGAT) nd glutmte synthse dependent of the NADH (NADH-GOGAT). Mens followed y the sme letter for eh olumm (smll letters) nd for eh row (pitl letters) re not signifintly different y Tukey test (P.5). GS Fd-GOGAT NADH-GOGAT (µmol GHA.h -1.g MF -1 ) (µmol Glu.h -1.g MF -1 ) (µmol NAD +.h -1.g MF -1 ) - GA + GA - GA + GA - GA + GA Glutmin 156 A 76 B 26,5 B 38,8 A,5 B,8 A Asprgin 18 A 71 B 22,5 A 24,3 A,4 B,1 A Alntoín 161 A 127 B 36,5 B 63,5 A,11 B,22 A Referênis iliográfis BARENDSE, G.W., KEPCZYNSKI, J., KARSSEN, C.M. & KOORNNEFF, M The role of endogenous gierellins during fruit nd seed development: studies on gierellin-defiient genotypes of Aridopsis thlin. Physiologi Plntrum 67: BARLOW, E.W.R., DONOVAN, G.R. & LEE, J.W Wter reltions nd omposition of whet ers grown in liquid ulture: effet of ron nd nitrogen. Austrlin Journl of Plnt Physiology 1: CHANDA, S.V., SOOD, C.R., REDDY, V.S. & SINGH, Y.D Influene of plnt growth regultors on some enzymes of nitrogen ssimiltion in mustrd seedlings. Journl of Plnt Nutrition 21: CHANDLER, P.M., HIGGINS, T.J.V., RANDALL, P.J. & SPENCER, D Regultion of legumin levels in developing pe seeds under onditions of sulfur defiieny. Plnt Physiology 71: GARCIA-MARTINEZ, J.L., LOPEZ-DIAZ, I., SANCHEZ- BELTRAN, M.J., PHILLIPS, A.L., WARD, D.A., GASKIN, P. & HEDDEN, P Isoltion nd trnsript nlysis of gierellin 2-oxidse genes in pe nd en in reltion to fruit development. Plnt Moleulr Biology 33: GARCIA-MARTINEZ, J.L., SPONSEL, V.M. & GASKIN, P Gierellins in developing fruits of Pisum stivum v. Alsk: studies on their role in pod growth nd seed development. Plnt 17: GLASS, A.D.M., BRITTO, D.T., KAISER, B.N., KINGHORN, J.R., KRONZUCKER, H.J., KUMAR, A., OKAMOTO, M., RAWAT, S., SIDDIQI, M.Y., UNKLES, S.E. & VIDMAR, J.J. 22. The regultion of nitrte nd mmonium trnsport systems in plnts. Journl of Experimentl Botny 53: GOMES, M.A.F. & SODEK, L Allntoinse nd sprginse tivities in mturing fruits of nodulted nd non-nodulted soyens. Physiologi Plntrum 62: GRAEBE, J.E Gierellin iosynthesis nd ontrol. Annul Review of Plnt Physiology 38: GREGERSON, R.G., MILLER, S.S. & TWARY, S.N Moleulr hrteriztion of NADH-dependent glutmte synthse from lff nodules. Plnt Cell 5: HAGA, K.I. & SODEK, L Utiliztion of nitrogen soures y immture soyen. Annls of Botny 59: HAÜSSLER, R.E., BLACKWELL, R.D. & LEA, P.J Control of photosynthesis in rley leves with redued tivities of glutmine synthetse or glutmte synthse. I. Plnt hrteristis nd hnges in nitrte, mmonium nd mino ids. Plnt 194: HOAGLAND, D.R. & ARNON, D.I The wter ulture method for growing plnts without soil. Cirulr 347. University of Cliforni College of Agriulture, Berkeley. HOOLEY, R Gierellins: pereption, trnsdution nd responses. Plnt Moleulr Biology 26: HSU, F.C., BENNET, A.B. & SPANSWICK, R.M Conentrtions of surose nd nitrogenous ompounds in the poplst of developing soyen seed ots nd emryos. Plnt Physiology 75: JUNGHANS, T.G. & MOSQUIM, P.R Atividde d sintetse d glutmin e sintse do glutmto em explntes de frutos de soj so diferentes fontes de nitrogênio. Revist Brsileir de Fisiologi Vegetl 71: LANGE, T Moleulr iology of gierellin synthesis. Plnt 24: MOSQUIM, P.R. & SODEK, L Culture of soyen fruit explnts: growth onditions nd effiieny of nitrogen soures for reserve protein synthesis. Plnt Cell, Tissue nd Orgn Culture 27: PEAT, L.J. & TOBIN, A.K The effet of nitrogen nutrition on the ellulr loliztion of glutmine synthetse isoforms in rley roots. Plnt Physiology 111:

8 7 R. Nsimento & P.R. Mosquim: Efeito de minoáidos e gierelin sore o metolismo de N em soj RAINBIRD, R.M., THORNE, J.H., HARDY, R.W.F Role of mides, minoids, nd ureides in the nutrition of developing soyen seeds. Plnt Physiology 74: RHODES, D., RENDON, G.A., STEWART, G.R The ontrol of glutmine synthetse level in Lemn minor L. Plnt 125: RODRIGO, M.J., GARCIA-MARTINEZ, J.L., SANTES, C.M., GASKIN, P. & HEDDEN, P The role of gierellins A 1 nd A 3 in fruit growth of Pisum stivum L. nd the identifition of gierellins A 4 nd A 7 in young seeds. Plnt 21: SANTES, C.M., HEDDEN, P., GASKIN, P. & GARCIA- MARTINEZ, J.L Gierellins nd relted ompounds in young fruits of pe nd their reltionship to fruit-set. Phytohemistry 4: SCHRADER, L.E. & THOMAS, R.J Nitrte uptke, redution nd trnsport in the whole plnt. In Nitrogen nd ron metolism (J.D. Bewley, ed.). Plenum Press, New York, p SCHULLER, K.A., DAY, D.A. & GIBSON, A.H Enzymes of mmoni ssimiltion nd ureide iosynthesis in soyen nodules: effet of nitrte. Plnt Physiology 8: STEPHEN, M., SWAIN, J.B.R. & KAMIYA, Y Gierellins re required emryo growth nd seed development in pe. The Plnt Journl 12: STERRET, J.P Ploutrzol: promising growth inhiitor for injetion into woody plnts. Journl of the Amerin Soiety of Hortiulturl Siene 11:4-8. THOMPSON, J.F., MADISON, J.T. & MUENSTER, A.M.E In vitro ulture of immture otyledons of soyen ( Glyine mx (L.) Merr.). Annls of Botny 41: TONIN, G.S Influêni d fonte de nitrogênio n tividde de enzims envolvids no proesso de ssimilção de mids e ureídeos em otilédones imturos de soj mntidos em ultur. Tese de doutordo, Universidde Estdul de Cmpins, Cmpins. VAN HUIZEN, R., OZGA, J.A. & REINECKE, D.M Seed nd hormonl regultion of gierellins 2-oxidse expression in pe perirp. Plnt Physiology 115: WANG, S.Y., SUN, T. & FAUST, M Trnslotion of ploutrzol, gierellin iosynthesis inhiitor, in pple seedling. Plnt Physiology 82: WEAVER, R.J., SHINDY, W. & KLIEWER, M.W Growth regultor indued movement of photosyntheti produts into fruits of Blk grpes. Plnt Physiology 44: