Bioquímicos e auxiliares de laboratório do setor de hematologia do LAC-HNSC.

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1 POP: H-05 Página 1 de 7 1. Sinonímia: Dosagem de hemoglobina. Mnemônico HB. 2. Aplicabilidade: Bioquímicos e auxiliares de laboratório do setor de hematologia do LAC-HNSC. 3. Aplicação clínica: Útil no diagnóstico diferencial das anemias e policitemias. 4. Princípio do teste: Automação total (Sysmex XE 2100 ou XE 5000). SLS-método de detecção da hemoglobina (absorção espectrofotométrica). 5. Amostra: 5.1 Preparo do paciente: Sempre observar as orientações do médico assistente. Apenas evitar colheitas de material após exercício físico e nas duas horas que sucedem refeições fartas e ricas em gordura. 5.2 Tipo de amostra: Sangue total anticoagulado com EDTA K3 ou K2 (pó ou solução) na concentração final de 1,5 a 2,2 mg/ml 5.3 Colheita: Observar as precauções universais para punção venosa. A colheita pode ser realizada a qualquer hora, observando as recomendações do médico assistente. Utilizar uma das veias da fossa antecubital (basílica, cubital média, cefálica ou cefálica acessória). Usar seringa ou tubo a vácuo. Tubos a vácuo de tampa roxa contendo EDTA K3 (mais solúvel e menos tóxico) na proporção de 1,8 mg EDTA para 1 ml de sangue com volume de aspiração preconizado (pediatria: 1,0 a 2,0ml; adultos: 3,0 a 4,5ml). 5.4 Preservação e transporte: Transportar o material colhido à temperatura ambiente e dentro das normas de segurança legais. A amostra deve ser encaminhada ao laboratório o mais rápido possível, sendo ideal a realização do exame dentro de 8h após a colheita. 5.5 Identificação da amostra: Etiqueta com código de barras gerada pelo SIL do LAC. A etiqueta deve ser posicionada nos fracos de colheita a partir da tampa para o fundo em linha reta de forma que o código de barras fique visível e alinhado, sem enrugamentos e permitindo a visualização da amostra.

2 POP: H-05 Página 2 de Armazenamento: A estabilidade da amostra colhida com EDTA K3 ou K2 é de 24h à temperatura ambiente e de até 48h se refrigerada (2 a 8 C). As amostras são armazenadas sob refrigeração por até 48h, após a realização do hemograma, podendo ser usadas para confirmação de resultados se assim solicitado. As amostras devem retornar à temperatura ambiente (15 min) antes de nova análise. 5.7 Amostras Inadequadas: Colhidas em frascos errados, mal identificadas, congeladas, coaguladas e em volume inadequado ao tubo usado. 6. Reagentes e materiais: Corantes: Solução de corante May-Grünwald-Giemsa. Corante panótico rápido. Reagentes para automação: Cellpack Solução de diluição: impedância e processo óptico (caixa de 20 L), Cellsheath Solução de fluxo duplo: focagem hidrodinâmica (caixa de 20 L), Stromatolyser FB Lise neutrófilos/basófilos: impedância e processo óptico (caixa de 5 L), Stromatolyser 4DL Lise eritrócitos: impedância e processo óptico (caixa de 5 L), Stromatolyser 4DS Coloração leucócitos: citometria de fluxo (sache de 42mL), Stromatolyser NR Lise e coloração eritroblastos: citometria de fluxo (caixa 3,6 L e sache 43mL), Sulfolyser Lise eritrócitos e complexo cromático hemoglobina: fotometria (caixa de 5 L). 6.1 Preparo: Os reagentes são produtos comerciais pronto para uso. Vide Anexo-02 do POP-H01 Hemograma Coloração manual de lâminas e preparação dos corantes. 6.2 Estabilidade: A estabilidade dos reagentes de automação é de 60 dias após a abertura / instalação no equipamento, salvo Sulfolyser que é de 90 dias. 6.3 Armazenamento: Temperatura ambiente e ao abrigo da luz solar, exceto sangue controle (sob refrigeração: 2 a 8 C). 7. Equipamentos: Um equipamento de automação Sysmex XE 5000 (com contagem de reticulócitos), dois equipamentos de automação Sysmex XE 2100 D (sem contagem de reticulócitos) e dois coradores automáticos Sysmex SP 1000i. Cada equipamento é composto pelos seguintes

3 POP: H-05 Página 3 de 7 módulos: analisador, unidade pneumática, estação de dados e impressora. Os equipamentos possuem autonomia de 30 minutos (nobreak) em caso de falta de energia elétrica. Para maiores detalhes vide POPE-H01 Sysmex. 8. Calibração: A calibração dos equipamentos é realizada anualmente ou sempre que necessária pelos técnicos da Sysmex/Laborsys. 9. Procedimento (passo a passo): Dosagem de Hemoglobina tem tratamento idêntico ao processamento de hemograma. Vide POP-01 Hemograma. 10. Controle de qualidade: 10.1 Interno: Background, e-check em três níveis (baixo, normal e alto), uma amostra do dia anterior e reprodutibilidade (frequência diária). Na falta do Controle e-check usar duas amostras normais do dia. Vide POPE-H01 Sysmex. Os dados de controle de qualidade resultam na liberação para uso dos equipamentos de automação e são revistos pelo responsável do setor e/ou laboratório. Vide POPE-H 43-CQ Interno -Hematologia 10.2 Externo: Controle PELM/Controllab (frequência trimestral), Accutest (frequência quadrimestral) e Insight Sysmex. Vide POPE-H01 Sysmex e POPE-H 43-CQ Interno Hematologia. 11. Resultados: As informações contidas nos laudos de resultado resultam das medidas efetuadas nos equipamentos. Estão expressos em formato aceito e consagrado internacionalmente, sendo liberados diretamente em rede informatizada e interfaceada após conferência individualizada por profissional de nível superior habilitado. Alterações de resultados devem ser rubricadas Unidades: Os resultados são expressos em Unidades Internacionais padronizadas pelo Comitê Internacional de Estandardização em Hematologia: g/dl Cálculos: Diluição de amostras: Amostras cujos parâmetros ultrapassarem os limites de linearidade devem ser repassadas após diluição 1:5 ou 1:10 em diluente Cellpack. Multiplicar o valor da hemoglobina pela diluição realizada com a amostra, p.ex: diluição 1:10 (uma parte de sangue + 9 partes de diluente Cellpack), multiplicar o parâmetro hemoglobina por Critérios de aceitação:

4 POP: H-05 Página 4 de 7 Resultados cujas amostras foram preparadas rigorosamente dentro das condições estabelecidas. Resultados dentro de valores críticos (com risco de morte ao paciente) devem ser liberados após confirmação, revisão e contato com o médico solicitante se possível. Vide item 13 deste POP. 12. Valores de referência: Homem Mulher Hemoglobina em g/dl 12,8-17,8 11,6-15,6 Referência: Failace, Renato. Hemograma: manual de interpretação. 5. ed. Porto Alegre: Artmed, Valores críticos: São resultados que podem comprometer a vida do paciente. Devendo o médico assistente ser informado imediatamente. Pacientes com resultados já conhecidos não necessitam informação ao médico assistente: Hemoglobina: inferior a 5,0 g/dl. Vide POP - Valores críticos. 14. Especificações de desempenho: Limite de detecção (Display range): Leucócitos (WBC) x 10 3 / µl. Eritrócitos (RBC) x 10 6 / µl. Hemoglobina (HGB) g/dl. Hematócrito (HCT) % Plaquetas (PLT) x 10 3 / µl. NRBC% % NRBC# x 10 3 / µl. Precisão (Reprodutibilidade): CV após análise de 10 amostras com sangue recente e normal Leucócitos (WBC) < 3,0%. Eritrócitos (RBC), Hematócrito (HCT), HCM e CHCM < 1,5%. Hemoglobina (HGB) e VCM < 1,0%. Plaquetas (PLT) < 4,0%. RDW (SD e CV) < 2,0%. Neutrófilos e linfócitos < 8,0%. Monócitos < 20%. Eosinófilos e NRBC < 25%. Basófilos < 40%.

5 POP: H-05 Página 5 de 7 Acurácia: Leucócitos (WBC) +/- 3%. Hemácias (RBC) +/- 2%. Plaquetas (PLT) +/- 5%. Correlação: (com método de controle quando 100 ou mais amostras são analisadas) Neutrófilos e linfócitos: r = 0.90 ou mais. Monócitos: r = 0,75 ou mais. Eosinófilos e NRBC: r = 0,80 ou mais. Basófilos: r = 0,50 ou mais. Linearidade: Leucócitos (WBC) 0,0-250 x 10 3 / µl. Eritrócitos (RBC) 0, x 10 6 / µl. Hemoglobina (HGB) 0-25,0 g/dl. Hematócrito (HCT) %. Volume corpuscular médio (MCV) 37,0-197,0 fl. Plaquetas (PLT) 0, x 10 3 / µl. Amostras cujos parâmetros ultrapassarem os limites de linearidade devem ser repassadas após diluição 1:5 ou 1:10 em diluente Cellpack. Carryover: Leucócitos (WBC), hemácias (RBC), hemoglobina (HGB), Hematócrito (HCT) e plaquetas (PLT) < 1%. 15. Fontes potenciais de variabilidade: Temperatura ambiente acima de 30 C e abaixo de 15 C. Temperatura ideal: 25 C. Umidade relativa acima de 85% e abaixo de 45%. Exposição direta a luz solar. Pouca ventilação. Exposição a ondas de rádio ou ondas de alta freqüência. 16. Limitações do método: Ligados a amostra: - Hemoglobina sofrem interferência por lipemia, proteínas anormais do plasma e leucocitose severa. - Amostra lipêmica: aumento na determinação da hemoglobina. Anotar no mapa de trabalho correspondente. - Amostra de pouco volume: Pode causar hemo-diluição se o anticoagulante usado for líquido. Pode provocar erro de diluição por aspiração incorreta do equipamento de automação. Anotar no mapa de trabalho correspondente.

6 POP: H-05 Página 6 de 7 - Amostra com microcoágulos: Pode apresentar resultados errôneos (diluição da amostra). Na impossibilidade de nova colheita de material avisar o bioquímico responsável e anotar no mapa de trabalho correspondente. - Amostra coagulada: Rejeição incondicional dos resultados. Providenciar nova colheita de material. Ligados ao equipamento de automação: - Erro na homogeneização da amostra por falha no sistema: Apresenta resultados menores ou maiores dependendo da sedimentação do material. Nem sempre o resultado apresenta alarme o que prejudica a avaliação. - Falha na aspiração da amostra: Resultados sempre com alarme. Repetir o exame. - Amostras hemolisadas: Os equipamentos de automação possuem mecanismos de compensação a fim de minimizar erros. Anotar no mapa de trabalho correspondente. 17. Interpretação dos resultados: Auxílio diagnóstico causal das anemias. Ocorre diminuição quando há aumento isolado do volume plasmático (falsa anemia). Ocorre aumento na desidratação, uso de diuréticos, queimaduras, perdas líquidas ou sudorese. 18. Biossegurança: Usar equipamento de proteção individual (luvas, óculos e máscara) para as colorações. Muita atenção ao manusear o metanol que é tóxico e inflamável. Fazer a descontaminação de bancadas e equipamentos conforme as normas de segurança do laboratório. Descartar resíduos de acordo com as Boas Práticas de Laboratório e com as normas federais, estaduais e locais. 19. Anexos: (Vide POP-H01 Hemograma) Anexo-01 - Confecção de Distensões sangüíneas (Método Manual) Anexo-02 Coloração Manual de Lâminas Anexo-03 Critérios para Triagem Anexo-04 Históricos 20. Bibliografia: Bain, Barbara J. Células sangüíneas: um guia prático. 2.ed. Porto Alegre: Artes Médicas, 1997.

7 POP: H-05 Página 7 de 7 Failace, Renato. Hemograma: manual de interpretação. 3.ed. Porto Alegre: Artes Médicas, Failace, Renato. Hemograma: manual de interpretação. 5. ed. Porto Alegre: Artmed, Operator s manual XE-2100L/XE-2100D Main, Operator s manual XE-2100L/XE2100D IPU e manual online.