GRUPO HOSPITALAR CONCEIÇÃO HOSPITAL NOSSA SENHORA DA CONCEIÇÃO C.R. LABORATÓRIO DE ANÁLISES CLÍNICAS SETOR DE BIOQUÍMICA
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- Brenda Carrilho Vasques
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1 POP n.º: B35 Página 1 de 6 1. Sinonímia: FOLATO Mnemônico: FOL 2. Aplicabilidade: Bioquímicos do setor de bioquímica do LAC-HNSC. 3. Aplicação clínica: Determinação quantitativa in vitro do Ácido Fólico em soro humano. 4. Princípio do teste: Eletroquimioluminescência (ECLIA): Princípio de competição. Nº de testes: 100. Duração do ensaio: 27 minutos. 1ª incubação: através da incubação de 25 µl de amostra com os reagentes 1 e 2 de prétratamento do folato; o folato fixado é libertado a partir das proteínas de fixação do folato. 2ª incubação: através de incubação da amostra pré-tratada com a proteína de fixação do folato marcada com rutênio; forma-se um complexo de folato, cuja quantidade depende da concentração do analito na amostra. 3ª incubação: após incorporação das micropartículas revestida de estreptavidina e de folato marcado com biotina, os locais não ocupados, formando-se um complexo de proteína de fixação do folato marcada com rutênio-folato biotinilado. O complexo formado liga-se à fase sólida pela interação da biotina e da estreptavidina. A mistura da reação é aspirada para a célula de leitura, onde as micropartículas são fixadas magneticamente à superfície do eletrodo. Os elementos não ligados são então removidos com Procell. A aplicação de uma corrente elétrica ao eletrodo induz uma emissão quimioluminescente que é medida por um fotomultiplicador. Os resultados são determinados com base numa curva de calibração, que é gerada especificamente pelo analisador por uma calibração de 2 pontos, e uma curva principal incluída no código de barras do reagente. 5. Amostra: 5.1 Preparo do paciente: Jejum de 4h. Vide POP-L4 Coleta. 5.2 Tipo de amostra: Somente soro. 5.3 Colheita: Quantidade mínima de sangue: 1 ml. Quantidade ideal: 5 ml.
2 POP n.º: B35 Página 2 de Preservação e transporte: Transportar o material colhido à temperatura ambiente e dentro das normas de segurança legais. Manter ao abrigo da luz. 5.5 Identificação da amostra: Etiqueta com código de barras gerado pelo sistema de gerenciamento de dados do LAC (Sistema Pleres). A etiqueta deve ser posicionada nos frascos de colheita a partir da tampa para o fundo em linha reta de forma que o código de barras fique visível e alinhado, sem enrugamentos. 5.6 Estabilidade e armazenamento: A estabilidade da amostra colhida é de 2h a temperatura ambiente (15 a 25 C), conservar ao abrigo da luz, de 48h se refrigerada (2 a 8 C) e 30 dias a -20 C. Congelar apenas uma vez. Amostras descongeladas devem ser invertidas várias vezes e estar a temperatura ambiente antes da análise. 5.7 Amostras Inadequadas: Amostras mal identificadas. Amostras inativadas pelo calor. Amostras com volume insuficiente. Amostras com fibrina. Amostras hemolisadas. 6. Reagentes e materiais: Reagentes para automação Roche / E 601: Dispositivo de reagentes Elecsys Folato III 100 testes. PT1 Reagente pré-tratamento 1 (tampa branca), 1 frasco, 4,0 ml: 2-mercaptoetanessulfonato de sódio 40 g/l, ph 5,5. PT2 Reagente pré-tratamento 2 (tampa cinza), 1 frasco, 5,0 ml: hidróxido de sódio: 25 g/l. PT2 (corrosivo). M Micropartículas revestidas de estreptavidina (tampa transparente), 1 frasco, 6,5 ml: micropartículas revestidas de estreptavidina, 0,72 mg/ml, conservante. R1 Proteína de fixação do Folato-Ru (bpy), tampa cinza, 1 frasco, 9 ml: proteína de fixação do folato marcada com rutênio 75 µg/l; estabilizante, albumina de soro humano, tampões de borato, fosfato e citrato 70 mmol/l, ph 5,5; conservante. R2 Folato-biotina, tampa preta, 1 frasco, 8,0 ml: folato biotinilado 17 µg/l; biotina 120 µg/l; estabilizante, albumina de soro humano, tampão borato 100 mmol/l, ph 9,0; conservante. Reagentes para calibração e controle de qualidade: Calibrador: Elecsys Folato III CalSet. Preparação: pronto para uso. Estabilidade: a 20 C: 12 semanas. ProCell M: tampão do sistema E 601. CleanCell M: solução de limpeza para célula de leitura do sistema E 601. Elecsys Precicontrol Varia 1 e 2: soros controles. Preparação, estabilidade e conservação: Ver POP Calibradores/Controles.
3 POP n.º: B35 Página 3 de Preparo: pronto para uso. 6.2 Estabilidade: estável até o fim do prazo de validade, quando fechado e acondicionado entre 2 e 8 C. Após abertura: 8 semanas. No analisador: 2 semanas. 6.3 Armazenamento: Entre 2 e 8 C. 7. Equipamentos: E 601(Roche). Para maiores detalhes vide POPE-B20 E Calibração: O dispositivo de reagente contém um código de barras com informações específicas para a calibração do lote de reagentes em questão. A curva principal previamente definida é adaptada ao analisador através do código de barras do Folato III CalSet. O software do analisador verifica automaticamente a validade da curva e alerta para eventuais desvios. 8.1 Frequência das calibrações: Antes de cada rotina (semanal). A cada troca de lote. Uma calibração por lote de reagente dentro de um máximo de 24h após ter sido registrado no analisador. Passado 1 mês (28 dias) quando se utiliza o mesmo lote de reagentes. Passados 7 dias quando se utiliza o mesmo dispositivo de reagentes no analisador. Sempre que necessário, quando os resultados de ensaios de controle de qualidade estiverem fora dos limites específicos. 9. Procedimento: 9.1 Fluxo: As amostras devem ser centrifugadas. O auxiliar de laboratório as leva para a estante da mesa do E601, onde será realizada a análise pelo bioquímico. E601: Após a manutenção diária do equipamento, colocar o reagente, com a tampa destravada, no disco dos reagentes do analisador evitando a formação de espuma. O sistema regula automaticamente a temperatura do reagente e a abertura dos frascos. Selecionar a tecla REAGENTE SCAN para a leitura do código de barras do Kit (onde serão lidos os parâmetros específicos do teste) e a ressuspensão das micropartículas automaticamente antes de ser usada. Após a corrida dos soros controles, colocar o tubo primário com identificação da amostra por código de barras na rack e autorizar a corrida na tecla START. Caso não seja possível utilizar tubo primário, transferir a amostra para copinhos específicos informando a rack e a posição respectivamente na tela
4 POP n.º: B35 Página 4 de 6 WORKPLACE Test Selection. O analisador calcula automaticamente a concentração do analito de cada amostra e envia para o LINK do interfaceamento para ser avaliado e liberado pelo operador. Rotina diária. 9.2 Definição do teste: Intervalo do teste: 0,640-20,00 ng/ml Sensibilidade analítica: 0,640 ng/ml Os valores inferiores ao intervalo de medição são indicados como < 0,640 ng/ml. Os valores acima do intervalo de medição são indicados como > 20,00 ng/dl. Nº do teste no E601: 205. Unidade: ng/ml 9.2 Diluição: NÃO DILUIR, liberar > 20,00 ng/dl. Se for necessário, diluir manualmente (1:2) com diluente universal. 10. Controle de qualidade: 10.1 Interno: Controles: Precicontrol Varia 1 e 2. Frequência: após calibração. Preparo: dissolução em 3 ml de água destilada e armazenamento em 20 C em alíquotas de 330 µl Externo: Ver tabela de CQE / POP B Resultados: 11.1 Unidades: Os resultados são expressos em nanograma por mililitro: ng/ml Cálculos: O aparelho calcula automaticamente a concentração do analito de cada amostra Critérios de aceitação: Resultados cujas amostras foram coletadas, preparadas e processadas dentro das condições estabelecidas, dentro dos limites de normalidade e sem nenhum alarme dos equipamentos podem ser liberadas diretamente na rede, via interfaceamento. Resultados fora dos limites de normalidade ou com alarmes do equipamento devem ser liberados após avaliação com exames anteriores e se necessário repetição do processo anotando nas observações: exame confirmado após repetição.
5 POP n.º: B35 Página 5 de Valores de referência: 3 a 17 ng/ml 13. Valores críticos: N/A 14. Especificações de Desempenho: 14.1Linearidade: Até 20 ng/ml. 14.2Precisão: - Fabricante: Interensaio: Varia 1: 4,70% Varia 2: 2,90% - Validação pelo Laboratório: - Varia 1: 4,94% Varia 2: 4,72% (Módulo 1-Célula 1) - Varia 1: 5,50% Varia 2: 4,71% (Módulo 1-Célula 2) - Varia 1: 7,64% Varia 2: 6,20% (Módulo 2-Célula 1) - Varia 1: 6,09% Varia 2: 5,36% (Módulo 2-Célula 2) 14. Limitações do método: 14.1 Interferentes: Ligados à amostra: Hemólise: A hemólise pode aumentar de forma significativa os valores de folato devido a concentração elevada de folato nos glóbulos vermelhos. Icterícia: o ensaio não é afetado pela icterícia (bilirrubina até 33 mg/dl). Lipemia: o ensaio não é afetado pela lipemia (triglicerídeos até 1500 mg/dl). Amostras com concentração de proteínas totais extremamente elevada (macroglobulinemia de Waldenstroem) não são adequadas para efetuar este teste, pois pode dar origem à formação de um gel proteína na cubeta de reação. Nos pacientes em tratamento com doses elevadas de biotina (> 5 mg/dia), as amostras só deverão ser colhidas após intervalo mínimo de 8h da última administração. Pacientes em tratamento com Metrotexato ou Leocovorina estão contra-indicados devido às reações cruzadas da proteína de fixação do folato com estes compostos. Títulos extremamente elevados de anticorpos para estreptavidina e para rutênio podem causar interferência. Ligados ao equipamento de automação: Aspiração de volumes inadequados de amostra ou reagentes. Antes da determinação, certifique-se que as amostras dos pacientes, os calibradores e os controles estejam à temperatura ambiente (20-25 C). Devido a possíveis efeitos de evaporação, as amostras, os
6 POP n.º: B35 Página 6 de 6 calibradores e os controles colocados no equipamento deverão ser analisados no prazo de duas horas. 15. Interpretação dos resultados: As anemias nutricionais e macrocíticas podem ser causadas por uma deficiência de folato. Esta deficiência pode resultar de dietas pobres em frutos frescos, vegetais ou outros alimentos ricos em ácido fólico, que poderá ser o caso dos alcoólicos crônicos, dos toxicodependentes, dos idosos ou de pessoas com poucos recursos sócio-econômicos, etc. O nível baixo de folato sérico durante a gravidez também foi associado a defeitos no tubo neural do feto. As principais causas da deficiência de folato nos seres humanos são dieta deficiente e má absorção. O folato é necessário para o metabolismo normal, a síntese do ADN e a regeneração dos glóbulos vermelhos. As deficiências não tratadas causam anemia megaloblástica. Como tanto a deficiência de vitamina B12 como de folato podem causar anemia megaloblástica, é aconselhável determinar tanto a concentração de vitamina B12 como do folato para diagnosticar devidamente a etiologia da anemia. 16. Biossegurança: Usar equipamento de proteção individual (luvas, óculos etc.). Fazer a descontaminação de bancadas e equipamentos conforme as normas de segurança do laboratório. Vide Manual de biossegurança. 17. Anexos: N/A 18. Bibliografia: Bula do kit Folato III / E601 / Roche.
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