Bioquímicos e auxiliares de laboratório do setor de hematologia do LAC-HNSC.
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- Ruy Gesser Affonso
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1 POP: P-09 Página 1 de 6 1. Sinonímia: Pesquisa de sangue oculto nas fezes. Mnemônico SOF. 2. Aplicabilidade: Bioquímicos e auxiliares de laboratório do setor de hematologia do LAC-HNSC. 3. Aplicação clínica: A principal aplicação do teste para sangue oculto é a triagem do câncer colo-retal (cancro colo-retal) ou pólipos adenomatosos sangrantes através da identificação de pacientes para posterior investigação (colonoscopia). A presença de sangue nas fezes pode ser uma manifestação precoce de câncer no trato gastrintestinal e pode ocorrer em pacientes portadores de anemia por deficiência de ferro. 4. Principio do teste: Teste imunocromatográfico qualitativo. Durante o ensaio, a amostra reage com as partículas revestidas com anticorpo anti-hemoglobina humana. A mistura migra pela membrana absorvente da placa-teste indo se ligar ao anticorpo anti-hemoglobina presente na área da reação positiva (T), determinando o surgimento de uma banda colorida rosa-clara. Na ausência de hemoglobina não haverá o aparecimento da banda colorida na área T. A mistura da reação continua a fluir atingindo a área controle. O conjugado não ligado ao antígeno irá unir-se aos reagentes desta área produzindo uma banda colorida rosa-clara, demonstrando que os reagentes estão funcionando corretamente. 5. Amostra: 5.1 Preparo do paciente: Restrições de dietas não são necessárias. A colheita da amostra não deve ser realizada durante ou dentro de três dias de um período menstrual ou se o paciente sofre de hemorróidas sanguinolentas, sangue na urina ou irritações estomacais. Suspender o uso de álcool, aspirina ou outros salicilatos e outros medicamentos (tais como, anti-inflamatórios não esteroides, anticoagulantes (heparina), colchicina, reserpina, excesso de vitamina C, iodo, sulfato ferroso e contraste radiológico) 48 horas antes da colheita. 5.2 Tipo de amostra: Fezes recentes sem aditivos. 5.3 Colheita: Colher fezes de uma evacuação ou de três evacuações (amostra ideal) cuidando para não haver contaminação com urina ou água. Não colher as fezes diretamente do vaso sanitário.
2 POP: P-09 Página 2 de 6 Utilizar-se de utensílio limpo e seco e transferir uma porção de material, na quantidade estabelecida, para o frasco de colheita entregue pelo laboratório. 5.4 Preservação e transporte: O material deverá ser acondicionado em pote fornecido pelo laboratório, limpo, seco e hermeticamente fechado. Transportar o material colhido à temperatura ambiente e dentro das normas de segurança legais. Encaminhar ao laboratório o mais rápido possível. Melhores resultados serão obtidos se o teste for executado no prazo de até 5 dias depois da coleta da amostra. Pode ser armazenada durante 10 dias em geladeira (2 8 C). 5.5 Identificação da amostra: Etiqueta com código de barras geradas pelo sistema de gerenciamento de dados do LAC. A etiqueta deverá ser posicionada de forma que fique visível e sem enrugamentos. 5.6 Armazenamento: No pote fornecido pelo laboratório por até cinco dias após a colheita a temperatura ambiente ou 10 dias entre 2 e 8ºC. Não congelar. 5.7 Amostras Inadequadas: Coletadas de vaso sanitário, conservadas em formalina, amostras coletadas diretamente do solo, contaminadas com urina, óleo, agentes germicidas ou com qualquer aditivo. 6. Reagentes e materiais: OBSERVAR O KIT EM USO ANTES DE REALIZAR O TESTE: - Kit FOB Test Biocon é composto por dispositivo de teste contendo reagentes imobilizados em membrana e tubo coletor de amostra contendo tampão de extração (25 unidades de cada). - Kit Feca-Cult One Step é composto de dispositivo contendo reagentes imobilizados em membrana em uma proteína matriz com azida sódica + tubo coletor contendo uma suspensão de proteína e conservantes (25 unidades de cada). Vide bula do kit. - Kit Imuno-Rápido Wama é composto de placas-teste contendo reagentes imobilizados em membrana e tubos coletores de amostra que contém tampão de extração (20 unidades de cada). Vide bula do kit. 6.1 Preparo: Kit comercial pronto para uso. 6.2 Estabilidade: Até a data de vencimento. 6.3 Armazenamento: Entre 2-30ºC. Não congelar. 7. Equipamentos:
3 POP: P-09 Página 3 de 6 8. Calibração: 9. Procedimento (passo a passo): Preparação das amostras: As amostras serão entregues no setor de hematologia/parasitologia (geladeira de EPFs) provenientes do ambulatório, postos de saúde comunitária, UPA, emergência e hospitais (HCC, HCR e HNSC). Avaliá-las quanto a identificação, volume e condições de colheita. Preparação dos mapas de trabalho: Retirar os mapas de trabalho conforme rotina preconizada (Sistema Pleres). Vide POP-L14 Sistema de informatização laboratorial. Técnica: 1. A placa-teste, o tubo coletor e as amostras de pacientes devem atingir a temperatura ambiente (15-30ºC) antes da análise. 2. Abrir o tubo coletor, remover o aplicador e inserir o palito em três diferentes locais da amostra fecal. 3. Recolocar o palito no tubo coletor fechando-o. Agitar bem para misturar o tampão de extração e a amostra. Esta amostra, dentro do tubo coletor, é estável até 5 dias em temperatura ambiente. 4. Retirar o dispositivo da embalagem somente no momento da realização da prova para evitar condensação de umidade na membrana. Identificar o dispositivo com os dados do controle. 5. Agitar o tubo coletor vigorosamente para assegurar uma boa suspensão. Invertê-lo e desenroscar a tampa do dispensador de amostra. 6. Dispensar 2 gotas de solução (aprox.100µl) na cavidade da amostra (S) do dispositivo evitando a formação de bolhas de ar na amostra. 7. Aguardar 5 minutos e ler o resultado. Não fazer a leitura após 10 minutos. Teste Positivo: duas linhas de cor rosa avermelhado, uma em T e uma em C. A intensidade de cor em T poderá variar dependendo da concentração de hemoglobina presente na amostra. Qualquer linha visível na região da linha Teste (T) indica um resultado positivo. Teste Negativo: uma faixa de cor rosa avermelhado em C. Inválido: Um teste sem faixas de cor é considerado inválido e deve ser repetido com novo dispositivo. 8. Descartar os dispositivos após uso único em local apropriado. 10. Controle de qualidade: 10.1 Interno: Controle de qualidade está incorporado ao teste para assegurar a realização apropriada e a qualidade do kit (Faixa Controle ).
4 POP: P-09 Página 4 de 6 Realizar controle interno de sangue oculto através da simulação de reação positiva com adição de sangue em fezes: acrescentar 0,006 ml de sangue total a aproximadamente um grama de fezes e realizar o teste. Informar dados e resultado no FORM P 02. Alternativamente, pode-se empregar o controle interno de sangue oculto que é fornecido pelo ControlLab, provedor. Preparar a amostra fecal controle gotejando toda a solução diluente, que contém quantidade conhecida de hemoglobina humana, sobre o material em pó, que simula fezes frescas. Deve-se usar exclusivamente o diluente enviado junto ao material. Misturar, com auxílio de um bastão, até que seja obtida uma pasta homogênea. Proceder a realização do teste informando dados e resultado no FORM P 03. Freqüência mensal Externo: Vide TABELA PCIQ PAEQ HEMATO. 11. Resultados: Negativo ou positivo. As informações contidas nos laudos resultam de processamento dentro de condições ótimas, sendo liberadas diretamente em rede informatizada, após conferência individualizada por profissional de nível superior habilitado Unidades: 11.2 Cálculos: 11.3 Critérios de aceitação: Resultados cujas amostras foram preparadas rigorosamente dentro das condições estabelecidas. 12. Valores de referência: Negativo. 13. Valores críticos: 14. Linearidade: 15. Especificações de Desempenho:
5 POP: P-09 Página 5 de 6 Sensibilidade analítica: detecta hemoglobina em níveis acima de 50 ng/ml de fezes ou 6µg de hemoglobina/g de fezes. Efeito Prozona: amostras com concentrações altas como 1 mg/ml de hemoglobina ainda reproduzem resultados reagentes. Especificidade: quando o critério foi de sangramento para os vários tipos de patologias, a especificidade do Wama Imuno-Rápido foi de 94% contra 88% do HEMOCULT II. Usando o critério para somente os portadores de câncer colorretal e pólipo > 0,5 cm, a especificidade foi de 91% e 80%,respectivamente. Sensibilidade: quando o critério foi de sangramento para os vários tipos de patologias, a sensibilidade do Wama Imuno-Rápido foi de 38% contra 26% do HEMOCULT II. Usando o critério para somente os portadores de câncer colorretal e pólipo >0,5cm, a sensibilidade foi de 52% e 28%,respectivamente. O FOB Test Biocon foi comparado com outro teste rápido disponível no mercado e a correlação entre eles foi de 98%. 16. Limitações do método: - Nunca usar amostras colhidas com conservante formalina tamponada. - Não usar amostras de pacientes com sangramento como hemorróidas, tratamento dentário, irritações gástricas, constipação ou sangramento de menstruação e abuso de álcool. - Não usar amostras de pacientes em tratamento com aspirina ou outros medicamentos em excesso (tais como, anti-inflamatórios não esteroides, anticoagulantes, colchicina, reserpina, vitamina C, iodo, sulfato ferroso e contraste radiológico). - Níveis de hemoglobina inferiores a 50 nanolitros/g de fezes. 17. Interpretação dos resultados: O câncer de cólon ou reto é uma das mais comuns malignidades, é o terceiro câncer mais diagnosticado nos EUA, com aproximadamente casos esperados a cada ano, e a segunda causa mais comum de morte por câncer. Muitos, senão todos, desenvolvem-se a partir de um pólipo adenomatoso benigno por um período superior a dez anos, mas somente aproximadamente 5% dos pólipos tornam-se malignos. Um resultado reagente sugere presença de hemoglobina pois a presença de sangue nas fezes pode ter várias etiologias além de sangramento colo retal, tais como hemorróidas, irritações gástricas, etc. Resultados negativos não excluem sangramento, uma vez que alguns pólipos e câncer colo-retal pode ter sangramento intermitente. Além disso, o sangue pode não ser distribuído uniformemente em amostras fecais. Estágio muito precoce de polipose colo retal pode não apresentar sangramento. Por essa razão é recomendado que o teste seja realizado anualmente em indivíduos acima de 45 anos. Como em qualquer procedimento diagnóstico, o resultado deste teste deve ser sempre interpretado com outras informações clínicas disponíveis, bem como com os achados radiológicos.
6 POP: P-09 Página 6 de 6 Não é um teste sensível para detecção de sangramento gastrointestinal superior porque há degradação do sangue quando este passa pelo sistema gastrointestinal. 18. Biossegurança: Usar equipamento de proteção individual (luvas, óculos, etc.). Fazer a descontaminação de bancadas e equipamentos conforme as normas de segurança do laboratório. Descartar resíduos de acordo com as Boas Práticas de Laboratório e com as normas federais, estaduais e locais. Vide Manual de Biossegurança. 19. Anexos: Anexo-01 Sangue oculto- Controle de qualidade (FOB Test Biocon) Anexo-02 Sangue oculto- Controle de qualidade (Feca Cult One Step) Anexo-03 Sangue oculto- Controle de qualidade (Wama Imuno-Rápido Sangue Oculto) 20. Bibliografia: De Carli, G.A. Parasitologia Clínica. 1ª Ed. São Paulo: Editora Ateneu, Pessoa, A.B. Parasitologia Médica. 9ª Ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, Bula do kit.
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