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1 ANTI-A ANTI-B ANTI-AB Monoclonal Murino IgM PROTHEMO Produtos Hemoterápicos Ltda. Reagentes para classificação do sistema sangüíneo ABO PARA TESTES EM LÂMINA OU TUBO Somente para Uso Diagnóstico IN VITRO Conservar entre: 2º - 8ºC Não congelar Conservante: Azida de Sódio 0,1 % Responsável Técnico: Janaina Martins CRF:

2 SISTEMA DE GRUPO SANGUÍNEO ABO O sistema ABO descoberto por Landsteiner em 1901 é representado por quatro grupos principais, A, B, A,B e O. O indivíduo adulto normal que não possui os antígenos A e/ou B em suas hemácias normalmente apresentam os anticorpos correspondentes em seu soro. Os anticorpos Anti-A e Anti-B podem causar sérias reações hemolíticas transfusionais assim como a Doença Hemolítica do Recém-Nascido. Sendo assim, existe a necessidade de se testar tanto o sangue do receptor quanto do doador para a presença dos antígenos A e/ou B. Posteriormente, seleciona-se sangue de doador compatível para transfusão. O fenótipo ABO de um indivíduo é determinado pelo padrão de reação de suas hemácias com os reagentes Anti-A, Anti-B e Anti-A,B. É conhecida a existência de subgrupos de A e B que podem apresentar reações fracas ou negativas com reagentes Anti-A, Anti-B e Anti-A,B (Classificação Direta). O grupo ABO de um paciente adulto deve sempre ser confirmado, testando-se o soro do paciente contra glóbulos conhecidos dos grupos A1 e B (Classificação Reversa). O soro do recém-nascido não contém os esperados anticorpos Anti- A e Anti-B, podendo inclusive ocorrer à aquisição passiva de anticorpos Anti-A e Anti-B da circulação materna. Desta forma a prova reversa não deve ser realizada no sangue do recém-nascido por não fornecer o resultado confirmatório esperado. As hemácias de recém-nascido podem também não apresentar expressão total dos antígenos A e B e assim resultar em reações ligeiramente mais fracas. PRINCÍPIO BIOLÓGICO DO TESTE Os reagentes causam aglutinação direta macroscópica das hemácias que carregam os antígenos correspondentes. As hemácias possuidoras do antígeno A se aglutinam quando misturadas ao reagente Anti-A; igualmente, hemácias possuidoras do antígeno B se aglutinam na presença do reagente Anti-B. O teste adicional empregando-se o reagente Anti-A,B facilita o reconhecimento de subgrupos raros de baixa reatividade aglutinando as hemácias dos grupos A, B, e A,B, mas não as do grupo O. O uso do reagente Anti-A,B é recomendado na seleção de doadores do grupo O e na confirmação de resultados negativos obtidos nos testes onde se utilizam os reagentes Anti-A e Anti-B. DESCRIÇÃO DO PRODUTO O reagente é preparado utilizando-se anticorpos monoclonais de origem murina reativos em lâmina e tubo, fornecendo um teste

3 específico qualitativo para a identificação dos antígenos A e B nas hemácias. Cada lote produzido é analisado, segundo os métodos adotados pelo FDA, assegurando potência, especificidade, reatividade e avidez iguais ou superiores aos padrões de referência internacionais. O diluente dos reagentes contém: Cloreto de Sódio, Albumina Bovina, Tampão Fosfato e Azida de Sódio a 0,1%. Os reagentes foram otimizados para serem usados como fornecidos sem adições ou diluições. O produto é fornecido em frascos de 10 ml, acompanhados de conta-gotas. Cada gota equivale a 50 µl. Corantes: ANTI-A (Azul Brilhante), ANTI-B (Amarelo de Tartrazina) ANTI-A ANTI-B ANTI-A,B Código Embalagem Código Embalagem Código Embalagem ml ml ml x 10 ml x 10 ml x 10 ml MATERIAIS NECESSÁRIOS NÃO FORNECIDOS Teste em lâmina: lâminas de vidro, pipetas Pasteur e solução salina à 0,9%. Teste em tubo: tubos de vidro (10 x 75 mm ou 12 x 75 mm), pipetas Pasteur, centrífuga e solução salina à 0,9%. ARMAZENAMENTO E PRECAUÇÕES Conservar em geladeira entre 2 e 8 C. Não congelar ou expor o produto a temperaturas elevadas. Não utilizar após o vencimento. Não utilizar o produto se observar nítida turvação o que pode indicar contaminação bacteriana ou deterioração do produto. Não reutilizar os frascos vazios. Evitar a contaminação do reagente. SOMENTE PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO.

4 Os materiais de origem biológica devem ser considerados como se fossem potencialmente infectantes. Devem ser estabelecidos métodos adequados para o manuseio e descarte equivalentes aos utilizados para as amostras de sangue. O não seguimento das instruções de uso pode resultar em diminuição da performance ótima do produto. COLETA DA AMOSTRA: O sangue deve ser coletado por procedimento asséptico aprovado, com ou sem adição de anticoagulante. As hemácias obtidas de coágulo podem ser tipadas em até 5 dias após sangria. As amostras coletadas em EDTA ou Heparina devem ser tipadas em até 48 horas. Se a demora para a execução do teste for inevitável, hemácias de sangue coagulado e as colhidas em EDTA ou Heparina devem ser separadas do soro/plasma, lavadas e ressuspendidas em solução preservativa de glóbulos. Estocar a 2-8 C por no máximo 20 dias. O sangue coletado em anticoagulante ACD, CPD e CPDA-1 pode ser tipado até a data de expiração se armazenado entre 2 e 8 C. O armazenamento prolongado de hemácias antes da execução do teste pode causar deterioração de antígenos e resultar em reações mais fracas. PROCEDIMENTO DO TESTE Teste em lâmina: 1 - Preparar uma suspensão de glóbulos a 40% no próprio soro, plasma ou solução salina à 0,9%. 2 Colocar uma gota do reagente Anti-A no lado esquerdo da lâmina e uma gota de reagente Anti-B no lado direito. Em uma segunda lâmina, colocar uma gota de reagente Anti-AB. Realizar os testes à temperatura ambiente (20º a 25º C). 3 Adicionar 1 gota da suspensão de hemácias a cada reagente. 4 Misturar o reagente com a suspensão de glóbulos em uma área de 2x3 cm. Movimentar delicadamente a lâmina para promover a mistura e examinar a presença ou não de aglutinação

5 macroscópica. A aglutinação se inicia em poucos segundos. Não observar a lâmina por mais de 2 minutos, quando não houver aglutinação. Alternativamente, pode-se realizar o teste em lâmina utilizando-se uma suspensão de glóbulos à 10% em solução salina à 0,9%. Teste em tubo: 1 - Preparar uma suspensão a 3-5% do glóbulo a ser testado em solução salina à 0,9%. 2 Adicionar uma gota de reagente Anti-A, Anti-B e Anti-AB respectivamente em três tubos de ensaio e identificá-los. 3 Acrescentar uma gota da suspensão de hemácias 3-5% a cada tubo. Misturar bem o conteúdo. 4 - Centrifugar por 15 segundos a 3400 rpm. 5 - Ressuspender delicadamente o botão de hemácias e examinar a presença ou não de aglutinação. 6 - Graduar e registrar o resultado. A força centrífuga aplicada deve ser a mínima necessária para se obter um sobrenadante claro e um botão nitidamente delineado que possa ser ressuspendido facilmente. As centrífugas devem ser calibradas individualmente para se obter o tempo e velocidade ótimos de centrifugação. Nota: OS TESTES PARA CLASSIFICAÇÃO ABO NUNCA DEVEM SER INCUBADOS À 37 C. INTERPRETAÇÃO DO RESULTADO POSITIVO: excluindo-se as limitações do teste, a aglutinação dos glóbulos pelo reagente indica a presença do antígeno correspondente. Igualmente, a aglutinação da amostra pelo reagente Anti-A,B indica a presença dos antígenos A e/ou B, caracterizando não se tratar de grupo O. NEGATIVO: excluindo-se as limitações do teste, a ausência de aglutinação no teste indica ausência do antígeno correspondente.

6 O padrão de reação esperada com os fenótipos comuns é como se segue: Classificação Direta Classificação Reversa Grupo Anti-A Anti-B Anti-A,B A 1 B ABO + o + o + A o o B o o o + + O o o AB Nota: A hemólise observada na tipagem direta ABO não deve ser interpretada como resultado positivo, pois pode ser causada por contaminação bacteriana. Qualquer discrepância entre a prova direta e reversa deve ser resolvida antes da liberação do resultado de grupo sangüíneo. LIMITAÇÕES DO TESTE Resultado falso-negativo ou reações fracamente positivas podem ocorrer com amostras de sangue de subgrupos A e B ou após estocagem prolongada. Resultado falso-positivo pode ocorrer com hemácias colhidas do cordão de recém-nascidos. As variáveis relativas ao procedimento técnico, tais como: técnica, suspensões muito concentradas ou diluídas, centrifugação ou incubação inadequadas, solução salina à 0,9% contaminada ou vidraria suja podem causar falsas reações positivas ou negativas. As anomalias sorológicas inerentes à amostra podem causar reações inesperadas ou discrepância entre tipagem direta e reversa. O Grupo ABO de um indivíduo só pode ser determinado se existir uma concordância exata entre a classificação direta e classificação reversa. O reagente foi otimizado para as técnicas descritas. Outros procedimentos devem ser validados pelo usuário. CONTROLES 1- O resultado obtido na tipagem ABO em adultos deve ser confirmada pela prova reversa com reagente de células A1 e B (Rh negativos).

7 2- É importante que a reatividade e especificidade do reagente sejam confirmadas a cada dia de uso utilizando-se um controle positivo, de preferência hemácia A 2 B e um controle negativo, hemácia do grupo O. DESEMPENHO Os anticorpos Anti-A, Anti-B, Anti-A,B (Monoclonal Murino) aglutinam especificamente hemácias humanas na presença dos antígenos correspondentes. A especificidade do produto é determinada através da inclusão de um painel de hemácias, representando os antígenos com freqüência igual ou superior a 1% na população. Para assegurar reatividade adequada, na análise final para liberação do lote, os reagentes são testados com hemácias positivas para o antígeno correspondente. Em se tratando do reagente Anti-A, incluem-se amostras do fenótipo A 2 B. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1- Walker Rh,ed.Technical Manual. 11th Edition. Bethesda: AABB, Race R. R. and Sanger R. Blood Groups in Man, 6th Edition Oxford Blackwell Scientific Publishers, Mollison P. L. Blood Transfusion in Clinical Medicine. 7th Edition. Oxford: Blackwell Scientific, Guidelines for the Blood Transfusion Service H.M.S.O. GARANTIA Este produto é garantido por Prothemo Produtos Hemoterápicos Ltda. durante o prazo de validade indicado no rótulo se conservado e utilizado segundo as instruções recomendadas. Prothemo Produtos Hemoterápicos Ltda. C.N.P.J: / Rua Augusto Ferreira de Morais, Socorro - CEP: São Paulo - SP - Brasil Atendimento ao Consumidor: Fone: (11) / Fax: (11) Edição: Nov/2009

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