ANTI HUMANO. Anti IgG Anti C 3 d Poliespecífico

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1 ANTI HUMANO Anti IgG Anti C 3 d Poliespecífico PROTHEMO Produtos Hemoterápicos Ltda. PARA TESTES EM LÂMINA OU TUBO SOMENTE PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO Conservar entre: 2º e 8ºC Não congelar Conservante: Azida de Sódio 0,1 % Responsável Técnico: Janaina Martins CRF:

2 PRINCÍPIO DO TESTE O Soro Anti-Humano PROTHEMO, também conhecido como Soro Antiglobulina de largo espectro, é empregado na pesquisa de anticorpos adsorvidos às hemácias humanas. Os anticorpos dos grupos sangüíneos, na sua maioria, são gamaglobulinas. Entretanto, alguns são mais bem detectados pela propriedade de fixar frações do complemento ao reagirem com o antígeno correspondente (tais como alguns anticorpos dos Sistemas Kidd e Lewis). DESCRIÇÃO DO PRODUTO O Soro Anti-Humano PROTHEMO é preparado a partir de soro de coelhos e/ou cabras imunizados com uma fração específica do plasma humano, para a produção de anticorpos contra as gamaglobulinas e componentes do complemento. O diluente do reagente contém: Cloreto de Sódio, Albumina Bovina, Tampão Fosfato, Potencializadores e Azida de Sódio a 0,1%. O reagente foi otimizado para ser utilizado como fornecido, sem adições ou diluições. O produto é fornecido em frascos de 10 ml, acompanhados de contagotas. Cada gota equivale a 50 l. SORO ANTI-HUMANO PROTHEMO Anti-IgG e Anti-C3d - Poliespecífico Código Embalagem ml x10 ml MATERIAIS NECESSÁRIOS NÃO FORNECIDOS - Teste em Lâmina: lâminas de vidro, pipetas Pasteur e solução salina à 0,9%. - Teste em Tubo: tubos de vidro (10x75mm ou 12 x 75 mm), pipetas Pasteur, Banho-Maria à 37ºC, centrífuga e solução salina à 0,9%.

3 ARMAZENAMENTO E PRECAUÇÕES Conservar em geladeira entre 2º e 8ºC. Não congelar ou expor o produto a temperaturas elevadas. Não utilizar após o vencimento. Não utilizar o produto se observar nítida turvação, o que pode indicar contaminação bacteriana ou deterioração do produto. Evitar a contaminação do reagente. Não reutilizar frascos vazios. SOMENTE PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO Os materiais de origem biológica devem ser considerados como se fossem potencialmente infectantes. Devem ser estabelecidos métodos adequados para o manuseio e descarte equivalente aos utilizados para as amostras de sangue. O não seguimento das instruções de uso pode resultar em diminuição da performance ótima do produto. COLETA DA AMOSTRA O sangue deve ser coletado por procedimento asséptico aprovado, com ou sem adição de anticoagulante. As hemácias obtidas de coágulo podem ser utilizadas em até 5 dias após sangria. As amostras coletadas em EDTA ou Heparina devem ser utilizadas em até 48 horas. Se a demora para a execução do teste for inevitável, hemácias de sangue coagulado e as colhidas em EDTA ou Heparina devem ser separadas do soro/plasma, lavadas e ressuspendidas em solução preservativa de glóbulos. Estocar a 2º a 8 C por no máximo, 20 dias. O sangue coletado em anticoagulante ACD, CPD e CPDA-1 pode ser utilizado até a data de expiração, se armazenado entre 2º a 8ºC. O armazenamento prolongado de hemácias antes da execução do teste pode causar deterioração dos antígenos e resultar em reações mais fracas. TESTE DE COOMBS DIRETO OU TESTE DA ANTIGLOBULINA DIRETO APLICAÇÕES: Na pesquisa de anticorpos já fixados às hemácias, como ocorre em: - Doença Hemolítica do Recém-Nascido - Anemia Hemolítica Adquirida Autoimune - Pacientes que tenham recebido transfusões incompatíveis.

4 PROCEDIMENTO DO TESTE 1. Colocar em um tubo de hemólise uma gota de suspensão a 5% de hemácias do paciente previamente preparadas em solução salina à 0,9%. 2. Lavar as hemácias do tubo por três vezes com solução salina à 0,9%, secando bem as bordas do tubo na última lavagem, para retirar toda a solução. 3. Acrescentar duas gotas de Soro Anti-Humano Prothemo. Misturar bem. 4. Centrifugar imediatamente a rpm por 15 segundos. 5. Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presença ou não de aglutinação. INTERPRETAÇÃO Teste da Antiglobulina Direto (Coombs Direto) Aglutinação Positivo Ausência de aglutinação Negativo TESTE DE COOMBS INDIRETO OU TESTE DA ANTIGLOBULINA INDIRETO APLICAÇÕES: - Provas de compatibilidade pré-transfusional - Pesquisa de anticorpos no soro de gestantes - Identificação de anticorpos utilizando hemácias com antígenos conhecidos - Titulação de anticorpos - Pesquisa de variantes fracas do antígeno D (D U ).

5 PROCEDIMENTO DO TESTE 1- Colocar em um tubo de hemólise uma gota de suspensão de hemácias a 5% escolhidas para o teste, previamente preparadas em solução salina à 0,9%. 2 - Adicionar duas gotas de soro a ser testado. 3 - Acrescentar duas gotas de Albumina Bovina a 22% Prothemo. Misturar bem. 4 - Incubar o tubo em Banho-Maria durante minutos a 37ºC. 5 - Lavar as hemácias do tubo por três vezes com solução salina à 0,9% secando bem as bordas do tubo na última lavagem para retirar toda a solução. 6 - Acrescentar duas gotas do Soro Anti-Humano Prothemo. Misturar bem. 7 - Centrifugar imediatamente a rpm por 15 segundos. 8 - Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presença ou não de aglutinação. INTERPRETAÇÃO Teste da Antiglobulina Indireto (Coombs Indireto) Aglutinação Positivo Ausência de Negativo aglutinação CONTROLES POSITIVO E NEGATIVO PARA O TESTE DA ANTIGLOBULINA INDIRETO Na execução do Teste da Antiglobulina Indireto é de primordial importância realizar em paralelo os controles Positivo e Negativo. 1. Colocar em dois tubos de hemólise uma gota de suspensão a 5% de hemácias O Rh positivo, previamente preparadas em solução salina à 0,9%. Identificá-los. 2. Adicionar ao tubo Controle Negativo uma gota de solução salina à 0,9% e ao tubo Controle Positivo, uma gota de Soro Anti-D Prothemo. 3. Executar o mesmo procedimento técnico descrito para o Teste de Coombs Indireto a partir do item n. o 3. PROVA DE COMPATIBILIDADE MAIOR PRÉ-TRANSFUSIONAL A prova de compatibilidade Maior Pré-Transfusional é um método eficaz e oferece a máxima segurança ao receptor, protegendo-o contra uma reação transfusional e assegurando o aproveitamento da transfusão

6 recebida. As hemácias do doador são colocadas em presença do soro do receptor Esta prova permite revelar a existência de anticorpos de diferentes grupos sangüíneos, os quais poderiam destruir as hemácias transfundidas. PROCEDIMENTO 1 - Pesquisa de anticorpos salinos (à temperatura ambiente) - Em um tubo de hemólise colocar duas gotas de soro do receptor. - Adicionar uma gota de suspensão a 5% de hemácias do doador em solução salina à 0,9%. - Centrifugar a rpm por 15 segundos. - Ressuspender as hemácias, agitando o tubo e examinar a presença ou não de aglutinação e/ou hemólise. - Registrar o resultado 2 - Pesquisa de anticorpos albuminosos (à temperatura ambiente) - Adicionar ao mesmo tubo, duas gotas de Albumina Bovina à 22% Prothemo. - Centrifugar a rpm por 15 segundos. - Ressuspender as hemácias, agitando suavemente o tubo e examinar a presença ou não de aglutinação e/ou hemólise. - Registrar o resultado. 3 - Pesquisa de anticorpos albuminosos (à temperatura de 37ºC) - Incubar o tubo em Banho-Maria durante minutos à 37ºC. - Centrifugar a rpm por 15 segundos. - Ressuspender as hemácias, agitando suavemente o tubo e examinar a presença ou não de aglutinação e/ou hemólise. - Registrar o resultado. 4 Pesquisa de anticorpos bloqueadores. - Lavar as hemácias do tubo por três vezes com solução salina à 0,9%. - Desprezar o sobrenadante, secando as bordas do tubo na última lavagem para retirar toda a solução. - Acrescentar duas gotas do Soro Anti-Humano Prothemo. Misturar bem. - Centrifugar a rpm por 15 segundos. - Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presença ou não de aglutinação.

7 INTERPRETAÇÃO: Se não ocorrer aglutinação em todas as fases do teste, o sangue pode ser considerado compatível. PROVA DE COMPATIBILIDADE MENOR PRÉ-TRANSFUSIONAL Este teste vem complementar a prova anterior e tem como objetivo detectar anticorpos presentes no plasma do doador, os quais, se transfundidos, poderiam causar destruição dos glóbulos do receptor. PROCEDIMENTO Executar o mesmo procedimento para o Teste de Compatibilidade Maior Pré-transfusional, com as seguintes alterações: - Usar duas gotas de soro do doador. - Usar suspensão de hemácias à 5% de glóbulos do receptor em solução salina à 0,9%. LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO TÉCNICO I Resultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer: 1. Se as hemácias não forem apropriadamente lavadas ou se na vidraria utilizada restarem traços de globulinas humanas. 2. Se a incubação for inadequada. 3. Se o reagente antiglobulina perdeu sua reatividade, por conservação inadequada, ou se as hemácias utilizadas estiverem deterioradas. 4. Se o Soro Anti-Humano foi omitido durante o teste. II Resultados FALSO-POSITIVOS podem ocorrer: 1. Quando o soro, as hemácias e o Soro Anti-Humano estiverem excessivamente frios, detectando a presença de aglutininas frias. 2. Se a centrifugação for excessiva.

8 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1-Walker Rh, ed. Technical Manual. 11 th Edition. Bethesda: AABB, Race R.R and Sanger R. Blood Groups in Man, 6 th Edition Oxford Blackwell Scientific Publishers, Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine. 7 th Edition. Oxford Blackwell Scientific, Guidelines for the Blood Transfusion Service H.M.S.O. GARANTIA Este produto é garantido por Prothemo Produtos Hemoterápicos Ltda durante o prazo de validade indicado no rótulo se conservado e utilizado segundo as instruções recomendadas. PROTHEMO PRODUTOS HEMOTERÁPICOS LTDA. CNPJ / Rua Augusto Ferreira de Morais, Socorro - CEP: São Paulo - SP - BRASIL Atendimento ao consumidor: Fone (11) e FAX (11) Data da edição: Nov/2009

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