Nome do exame: Fibrose Cística Análise da mutação DF508, Pré-natal. Código: FC2. Sinonímias: FC; Mucoviscidose; Doença Fibrocística do Pâncreas;

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1 Nome do exame: Fibrose Cística Análise da mutação DF508, Pré-natal Código: FC2 Sinonímias: FC; Mucoviscidose; Doença Fibrocística do Pâncreas; Prazo para resultado: 20 a 30 dias. Coleta, processamento, estocagem e envio do material biológico: Material: Vilosidades Coriônicas - Através da data da última menstruação ou ecografia recente, verificar se a gestante está na 12ª semana de gestação, período ideal para a coleta de vilosidades coriônicas, apesar desta poder ser coletada entre a 11ª e a 13ª semana de gestação. Coletar 25 mg de vilosidade coriônica numa seringa estéril, com meio de cultura de células (o meio de cultura de células poderá ser fornecido pelo Genetika, mediante solicitação). Remeter o material refrigerado, em gelo reciclável, sem que a amostra entre em contato direto com o gelo, via SEDEX. Sugerimos que o material seja enviado IMEDIATAMENTE ao Genetika, devendo chegar em 24 horas, não podendo ultrapassar o prazo de 48 horas após a coleta; Material: Líquido Amniótico - Através da data da última menstruação ou ecografia recente, verificar se a gestante está na 16ª semana de gestação, período ideal para a coleta do líquido amniótico, apesar deste poder ser coletado da 15ª semana até o final da gravidez. Coletar 20 ml de líquido amniótico - descartar o primeiro ml coletado - colocando em 2 seringas plásticas estéreis com 10 ml cada, numerando a 1ª e a 2ª. Vedar bem a seringa com agulha descartável e estéril. Remeter o material na própria seringa prendendo a agulha com esparadrapo, refrigerado em gelo reciclável, sem que a amostra entre em contato direto com o gelo, via SEDEX. Sugerimos que o material seja enviado IMEDIATAMENTE após a coleta, sendo ideal a chegada no Genetika em 24 horas, não podendo ultrapassar o prazo de 48 horas após a coleta; Material: Sangue Fetal - Através da data da última menstruação ou ecografia recente, verificar se a gestante está entre a 18ª e a 22ª semana de gestação, período ideal para a coleta de sangue fetal. Coletar 5 ml de sangue fetal em um tubo com EDTA. Remeter o material, em temperatura ambiente, via SEDEX. Sugerimos que o material seja enviado IMEDIATAMENTE ao Genetika, devendo chegar em 24 horas, não podendo ultrapassar o prazo de 48 horas após a coleta; Evitar enviar amostra pré-natal na 6ª feira, preferindo sempre enviar na 2ª feira; Deve vir acompanhado as amostras de sangue dos pais (10 ml de sangue total em EDTA) para controle de contaminação. Informações necessárias para envio deste exame: Dados da Gestante: Nome, idade, idade gestacional, endereço, telefone, dados clínicos; Dados do Médico: Nome, endereço e telefone; Termo de Consentimento informado livre e esclarecido; Tipo de material coletado; Dados específicos para este exame. Causas de rejeição de amostras: Amostras hemolisadas e/ou coaguladas; Coleta e/ou estocagem e/ou envio impróprio do material; Falta de documentos exigidos pelo Genetika; Falta de dados do médico e/ou da gestante. Metodologia: Extração de DNA de vilosidades trofoblásticas ou amniócitos ou linfócitos do sangue fetal, seguida de amplificação pela Reação em Cadeia pela Polimerase, pesquisa da mutação DF508

2 do éxon 10 do gene da Fibrose Cística (Raskin, S. et al. Cystic Fibrosis genotyping by direct PCR analysis of guthrie blood spots. PCR methods and application. 2(2): , 1992). Estratégia de análise genética: Pesquisa da mutação DF508 por PCR. Valores de referência: Normal: sem mutação no gene CFTR; Portador: com uma mutação no gene CFTR; Alterado: com duas mutações no gene CFTR. Interpretação dos resultados: A mutação DF508 corresponde a 48% das mutações encontradas em caucasóides afetados pela Fibrose Cística na população brasileira; Um resultado alterado (ou positivo) indica que o feto possui duas mutações no gene para Fibrose Cística; Um resultado normal (ou negativo) não exclui totalmente a possibilidade deste diagnóstico e recomenda outras avaliações. Sensibilidade/especificidade/taxa de detecção da análise: Este teste detecta 48% das mutações encontradas em pacientes caucasóides afetados pela FC na população brasileira. Indicações do exame: Diagnóstico pré-natal para famílias que têm risco elevado de gerar um filho com a doença, por terem familiares afetados com Fibrose Cística ou ambos os pais portadores da mutação DF508; Ultra-som fetal anormal sugestivo de FC. Exames relacionados e oferecidos pelo Genetika: Fibrose Cística Pesquisa de grandes deleções, Código FCA, Setor de Genética Fibrose Cística Análise de mutação já detectada na família, Código FCD, Setor de Genética Fibrose Cística Análise de mutação já detectada na família (Pré-natal), Código FCM, Setor de Genética Fibrose Cística Pesquisa da mutação ΔF508, Código FC1, Setor de Genética Fibrose Cística Seqüenciamento completo do gene CFTR, Código FCC, Setor de Genética Fibrose Cística Análise da mutação ΔF508 em neonatos, FCN, Setor de Genética Fibrose Cística Pesquisa de 97 mutações, Código FC7, Setor de Genética Fibrose Cística Pesquisa de 97 mutações (Pré-natal), Código FCP, Setor de Genética Fibrose Cística Análise de ligação, Código A14, Setor de Genética Fibrose Cística Painel para doenças freqüentes em judeus Ashkenazi, Código PA4, Setor de Genética Agenesia Congênita de Vasos Deferentes Seqüenciamento completo do gene CFTR, Código Y01, Setor de Genética Teste do pezinho ampliado Triagem neonatal, Código TPA, Setor de Genética Molecular. Resumo da doença: A Fibrose Cística (FC) é a desordem autossômica recessiva severa mais comum em caucasóides, afetando os órgãos de secreção, especialmente os pulmões e o aparelho digestivo. Na FC as glândulas de secreção produzem muco viscoso nos pulmões que interfere na respiração e desencadeia infecções crônicas, as quais resultam muitas vezes em irreparáveis danos ao pulmão. O muco pode também afetar o pâncreas, causando problemas de digestão; A FC é o resultado de defeitos no gene regulador de condução transmembrana da fibrose cística (CFTR). O gene CFTR está localizado no cromossomo 7 e está envolvido com a regulação de

3 cloro. Existem mais de 1500 mutações descritas no gene CFTR, sendo que a maioria delas é muito rara, sendo a mais freqüente denominada ΔF508 (48% das mutações encontradas em caucasóides afetados pela Fibrose Cística, na população brasileira). A incidência de FC em euro-brasileiros é de 1 em 7.576, sendo que 1 em cada 44 eurobrasileiros é portador de uma mutação. Já para afro-brasileiros, a incidência de fibrocísticos é de 1 em e de portadores de uma mutação é de 1 a cada 60 indivíduos (Raskin S et al. Incidence of Cystic Fibrosis in five different states of Brazil as determined by screening of ΔF508 mutation at the CFTR gene in newborns and patients. Journal of Cystic Fibrosis, 2007 in press). Benefícios advindos da realização do exame: Confirmar a hipótese diagnóstica de fetos em risco; Prevenção de complicações futuras; Melhora na capacidade de prognosticar, baseada na comparação com outros casos da doença descritos na literatura; A confirmação do diagnóstico pré-natal pode alterar a conduta médica para o feto e permite suspender condutas e terapias inadequadas e avaliar possíveis terapias específicas para esta doença; Permite o aconselhamento genético adequado para futuras gestações deste casal. Vantagens competitivas do Genetika: O Genetika é o primeiro laboratório brasileiro de apoio especializado em genética a obter o Certificado de Qualidade ISO 9001/00 e possui mais de uma década de experiência na área de genética, já tendo realizado milhares de exames laboratoriais de genética; Aconselhamento genético pré e pós-exame, feito por Médico especialista em Genética Clínica; Dedica toda a sua infra-estrutura para realizar exclusivamente exames da área de genética médica; O resultado do exame é facilmente compreendido e no laudo constam a metodologia utilizada, interpretação e conclusão. O diretor do laboratório revisa todos os resultados e assina o laudo final. Os resultados são imediatamente transmitidos por telefone ou enviados via fax, e/ou correio para o médico solicitante, sempre respeitando a privacidade e o sigilo das partes envolvidas no teste; Possui profissionais qualificados para a realização dos exames, Biólogos e Bioquímicos com Mestrado e Doutorado que realizam o processamento das amostras e analisam os resultados obtidos; O Laboratório oferece uma tabela de exames com indicação dos testes mais adequados para cada caso (por exemplo: uma mutação específica no gene, um painel de mutações ou o seqüenciamento completo do gene); As informações sobre os exames são facilmente obtidas via fax, telefone, Serviço de Atendimento ao Cliente - SAC (ligação gratuita) ou pela internet (web site ou ); Possui laboratórios conveniados nas diversas localidades do País, que estão treinados para realizar a coleta e envio das amostras biológicas à sede do Genetika. Limitações do exame: Cerca de 52% das mutações no gene da FC não são detectadas por este teste; Somente um gene implicado na doença será estudado. Mutações em outros genes não serão detectadas. Mutações em outros códons e em partes não estruturais do gene não são detectadas; O teste genético molecular de um membro da família afetado pode ser necessário para determinar a mutação causadora da doença, presente na família; Todo procedimento de diagnóstico pré-natal invasivo tem um risco à gravidez, com o risco de necessitar de uma nova coleta de material fetal, portanto, o consentimento informado é exigido em conjunto com o aconselhamento genético. Especialidades médicas com interesse no exame: Andrologia; Clínica Médica;

4 Gastroenterologia; Gastroenterologia Pediátrica; Neonatologia; Pediatria; Pneumologia; Pneumologia Pediátrica; Reprodução Humana; Urologia. Referências bibliográficas preliminares: Raskin S, Pereira-Ferrari L, Reis FC, Abreu F, Marostica P, Rozov T, Cardieri JM, Ludwig N, Valentin L, Rosário Filho NA, Camargo Neto E, Lewis E, Giugliani R, Diniz EMA, Culpi L, Phillipis III JÁ, Chakraborty R. Incidence of Cysitic Fibrosis in five different states of Brazil as determined by screening of ΔF508 mutation at the CFTR gene in newborns and patients. Journal of Cystic Fibrosis, 2007 in press. Konialis CP, Hagnefelt B, Kazamia C, Karapanou S, Pangalos C. CFTR DeltaF508 Mutation Detection from Dried Blood Samples in the First Trimester of Pregnancy: A Possible Routine Prenatal Screening Strategy for Cystic Fibrosis? Fetal Diagn Ther. Sep 22; 22(1): 41-44, Slack C, Lurix K, Lewis S, Lichten L. Prenatal genetics: the evolution and future directions of screening and diagnosis. J. Perinat. Neonatal Nurs. Jan-Mar; 20(1): 93-7, Konialis CP, Hagnefelt B, Kazamia C, Karapanou S, Pangalos C. CFTR DeltaF508 Mutation Detection from Dried Blood Samples in the First Trimester of Pregnancy: A Possible Routine Prenatal Screening Strategy for Cystic Fibrosis? Fetal Diagn. Ther. Sep 22; 22(1): 41-44, Ormond K. Implementing prenatal screening for cystic fibrosis in routine obstetric practice. Am J Obstet Gynecol. Mar; 194(3): 904, Accurso FJ, Sontag MK, Wagener JS. Complications associated with symptomatic diagnosis in infants with cystic fibrosis. J Pediatr. Sep; 147(Suppl. 3): S37-41, Morgan MA, Driscoll DA, Mennuti MT, Schulkin J. Practice patterns of obstetrician-gynecologists regarding preconception and prenatal screening for cystic fibrosis. Genet Med. Sep-Oct; 6(5): 450-5, Palomaki GE, FitzSimmons SC, Haddow JE. Clinical sensitivity of prenatal screening for cystic fibrosis via CFTR carrier testing in a United States panethnic population. Genet Med. Sep-Oct; 6(5): , Raskin S, Pereira L, Reis F, Rosario NA, Ludwig N, Valentim L, Phillips JA 3rd, Allito B, Heim RA, Sugarman EA, Probst C, Faucz F, Culpi L. High allelic heterogeneity between Afro-Brazilians and Euro-Brazilians impacts cystic fibrosis genetic testing. / Genet Test. Fall; 7(3): 213-8, Goloni-Bertollo EM, Rossit AR, Junior JB, Fett-Conte AC, Raskin S. CFTR molecular analysis reveals infrequent allele frequencies in nine cystic fibrosis patients from Sao Paulo State, Brazil. / Hum. Biol. Jun; 75 (3): 393-8, Raskin S, Phillips JA, Kaplan G, McClure M, Vnencak-Jones C, Rozov T, Cardieri JM, Marostica P, Abreu F, Giugliani R, Reis F, Rosario NA, Ludwig N, Pereira L, Faucz F, Gabardo J, Culpi L. Geographic heterogeneity of 4 common worldwide cystic fibrosis non-df508 mutations in Brazil. / Hum Biol. Feb; 71(1): , Marostica PJ, Raskin S, Abreu-e-Silva FA. Analysis of the delta F508 mutation in a Brazilian cystic fibrosis population: comparison of pulmonary status of homozygotes with other patients. / Braz. J. Med. Biol. Res. Apr; 31 (4): , Raskin S, Phillips JA 3rd, Krishnamani MR, Vnencak-Jones C, Parker RA, Rozov T, Cardieri JM, Marostica P, Abreu F, Giugliani R, Reis F, Rosario NA, Ludwig N, Culpi L. Cystic fibrosis in the Brazilian population: DF508 mutation and KM-19/XV-2C haplotype distribution. / Hum Biol. Aug; 69(4): , Raskin S, Philips JA 3rd, Krishnamani MR, Vnencak-Jones C, Parker RA, Dawson E, Rozov T, Cardieri JM, Marostica P, Abreu F, Giugliani R, Reis F, Rosario NA, Ludwig N, Culpi L. Regional distribution of cystic fibrosis-linked DNA haplotypes in Brazil: multicenter study. / Hum Biol. Feb; 69(1):75-88, 1997.

5 Raskin S, Phillips JA 3rd, Krishnamani MR, Vnencak-Jones C, Parker RA, Rozov T, Cardieri JM, Marostica P, Abreu F, Giugliani R, et al. DNA analysis of cystic fibrosis in Brazil by direct PCR amplification from Guthrie cards. / Am J Med Genet. Jul 1; 46(6): 665-9, Raskin S, Phillips JA 3rd, Vnencak-Jones C, Dawson E, Kaplan G, McClure M. Utility of internal markers to improve the accuracy of cystic fibrosis genotype analysis. / Biotechniques. Sep; 13(3): 372-4, Raskin S, et al. Cystic fibrosis genotyping by direct PCR analysis of guthrie blood spots. PCR methods and application. 2(2): , Molina Cabanero JC, Perez Jurado LA, Raskin S, Vicario JL, Balas Perez A, Garcia Novo MD. Simple method for cystic fibrosis carrier screening. / Lancet. Oct 17; 340 (8825): 983-4, 1992.