ELETROFORESE CAPILAR PRINCÍPIOS E A PLICAÇÕES APLICAÇÕES PROF. MARCONE AUGUST

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1 ELETROFORESE CAPILAR PRINCÍPIOS E APLICAÇÕES PROF. MARCONE AUGUSTO LEAL DE OLIVEIRA

2 EXPERIMENTO DE TISELIUS (1937) Separação de parcial de proteínas constituintes do soro sanguíneo (Prêmio Nobel de 1948) ΔT = 0.239Q 4k r 2 ΔT diferença entre o centro e a parede do tubo Q densidade d de potência (Watts/m 3 ) K condutividade térmica r raio do tubo

3 1930 FRONTEIRA MÓVEL A. TISELIUS 1948 PRÊMIO NOBEL Uppsala University, Suécia Colunas de 300 μm S. HJERTÉN Uppsala University, Suécia 1979 Capilares de 100 μm F. M. EVERAERTS Separação de 16 ânions y gy, Eindhoven University of Technology, Holanda 1981 Capilares de 75 μm J. JORGENSON FSCE teoria simplificada University of North Carolina, EUA LIF detector t de R. ZARE fluorescência Stanford University, EUA induzida por laser E. YEUNG Iowa State University, EUA Detectores Eletroquímicos E. EWING Pennsylvania State University, EUA 1984 MEKC S. TERABE Kyoto University, Japão 1986 INSTRUMENTOS COMERCIAIS 1987 CGE B. KARGER Northeastern University, EUA 1991 CEC KNOX e GRANT separação de HPA s University of Edinburg, Escócia MICROCHIP TECHNOLOGY

4 ELETROFORESE CAPILAR DE ZONA (CZE): CONCEITO

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6 INSTRUMENTAÇÃO 1-Fonte de alta tensão 2-Eletrodos 3-Reservatórios para eletrólito e amostra 4-Capilares 5-Injeção 6-Compartimento estabilizado termicamente 7-Detectores

7 PROPRIEDADES DO CAPILAR - sílica fundida (dióxido de silício amorfo SiO 2 ) revestido com poliimida ou acrilamida (15 µm); - dimensões precisas (25 a 75 µm d.i. x 330 µm d.e.); - alta constante dielétrica; - baixa condutividade elétrica; - resistência mecânica; - maleabilidade; - resistência ao ataque químico; - alta transmissão óptica para um intervalo apreciável de comprimento de onda (190 a 990 nm); - presença de FLUXO ELETROOSMÓTICO;

8 SÍLICA FUNDIDA Si OH + H 2 O pk a = 5,9 Si OH O Si O Si O O H Si O Si O O H Si O Si O O Si O Si + + O O: Si O - H Si O Si O SILANOL silanóis vicinais (ponte de hidrogênio) silanol dissociado SILOXANO Si O Si OH silanol isolado O OH Si OH SUPERFÍCIE SOLUÇÃO silanóis geminais

9 HIDROSTÁTICA h MODOS DE INJEÇÃO P vácuo ELETROCINÉTICA +

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11 DETECTORES UTILIZADOS EM CE Detector Limites de detecção aproximados N o de Mol Molaridade* Absorvância no UV/vis Absorvância indireta Fluorescência Fluorescência indireta fluorescência induzida por laser Espectrometria de massas Amperometria Condutividade Índice de refração Radiométrico * Depende sobretudo do volume de amostra injetado

12 I 0 I T Fonte de luz Capilar Fotodetector 1 A = log = abc T

13 DETECÇÃO DIRETA POR UV/vis

14 DETECÇÃO INDIRETA

15 MOBILIDADE ELETROFORÉTICA E F r + F r a e F = 6 π ηr atrito i v i F elétrica = Z i e E μ i = vi E Mobilidade do íon correspondente a sua velocidade limite v i em um campo elétrico de valor unitário Z e E = i 6 π ηr i v i Z e i μ i = = 6 π ηri q 6 π ηr i

16 Injeção C B A - + Z e μ i = i 6 π η r Comprimento efetivo i q 6 π η r i Detector = mau Tempo, min

17 MOBILIDADE ELETROOSMÓTICA-FLUXO NORMAL IHP OHP PLANO DE CISALHAMENTO - E SUPERFÍCIE CAMADA COMPACTA CAMADA DIFUSA SOLUÇÃO +

18 mau Detector Injeção μ osm Tempo, min μ ef μ osm v obs μef - μosm v obs = v osm v obs

19 A B H = A + + u x Cu x B C

20 μ = ef 6 q π η r i

21 Simultaneous determination of first-line anti-tuberculosis drugs by capillary zone electrophoresis using direct UV detection ti

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23 Simultaneous separation of five fluoroquinolone antibiotics by capillary zone electrophoresis

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25 Determination of Losartan Associated with Chlorthalidone or Hydrochlorothiazide id in Capsules by Capillary Zone Electrophoresis

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27 Simultaneous analysis of spartame, cyclamate, saccharin and acesulfame-k Kby CZE under UVdetection ti

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29 An alternative method for rapid quantitative analysis of majoritycis-trans i t ftt fatty acids by CZE

30 Standard fatty acid electropherogram of (1) C18:0, (2) C18:1 9t, (3) C18:1 9c, (4) C16:0, (5) C18:2cc, (6) C18:3ccc, (7) C13:0 (PI), all with concentration of 0.50 mmol L-1. B- Soy Oil, C- Olive Oil, D- Butter, E- Margarine, F- Filled Cookie, G- Hydrogenated Vegetable Fat and H- Bovine Liver.

31 A Rapid Method for Total Β-Escin Analysis in Dry, ydroalcoholic A Rapid Method for Total Β Escin Analysis in Dry, ydroalcoholic and Hydroglycolic Extracts of Aesculus hippocastanum L. by Capillary Zone Electrophoresis

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