Módulo - Bacteriologia. Condições essenciais para o crescimento e a identificação Bacteriana
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- Maria Antonieta Philippi Cerveira
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1 Módulo - Bacteriologia Condições essenciais para o crescimento e a identificação Bacteriana
2 Estruturas Celulares Essenciais x Facultativas
3 Crescimento bacteriano O crescimento é um somatório dos processos metabólicos progressivos, que normalmente conduz à divisão com concomitante produção de células-filhas a partir de uma bactéria U.F.C. ("unidades formadoras de colônias ) C.F.U. ("colony forming units )
4 U.F.C. ("unidades formadoras de colônias ) C.F.U. ("colony forming units ) Tempo para 1 ciclo completo E. coli => 20 min Micobactérias => hs
5 Crescimento Tensão de Oxigênio atmosférico Aeróbias estritas Mycobacterium sp Anaeróbias estritas Clostridium sp Anaeróbias facultativos Streptococcus sp Microaerófilas Neisseria sp Anaeróbias não estritas Lactobacillus sp
6 Tensão de Oxigênio atmosférico Cultivo em Anaerobiose
7 Tensão de Oxigênio atmosférico Cultivo em Anaerobiose
8 Crescimento Temperatura
9 Crescimento PH
10 Crescimento Salinidade
11 Crescimento bacteriano Meios de cultivo
12 Curva de crescimento bacteriano
13 Meios de Cultura Aspectos gerais Cultivar e manter microrganismos viáveis no laboratório Substâncias essenciais para o crescimento das bactérias Crescimento seletivo Demonstração de propriedades biológicas (hemólise produção de pigmentos e enzimas, fermentação etc... Isolamento
14 Meio de Cultura Principais produtos e compostos utilizados Hidrolizados de proteínas peptonas, infusão de carne, triptona, caseína Carboidratos Dissacarídeos (lactose, sacarose e maltose) Hexoses (glicose) Pentoses (xilose) Tampões Fosfatos monossódicos e dissódicos ou potássicos Enriquecimento Sangue, soro, vitaminas, extratos de levedura Inibidores Corantes de anilina (eosina, verde brilhante etc...) Metais pesados (bismuto) Produtos químicos (azida de sódio, citrato, desoxicolato, álcool feniletílico) Agentes antimicrobianos (oxacilina, vancomicina, novobiocina...)
15 Meio de Cultura Principais produtos e compostos utilizados Indicadores de ph Vermelho de fenol Vermelho neutro Púrpura de bromocrezol Azul de bromotimol etc... Outros indicadores Íons férrico e ferroso H 2 S (sulfeto ferroso) Ágar Extrato gelatinoso extraído de algas vermelhas Substratos para a ação de enzimas Uréia, tiossulfato de sódio, triptofano, lisina etc...
16 Meios de Cultura Principais características-continuar Composição Nutrientes indispensáveis ao crescimento do organismo Concentração não inibitória Meio deve ser submetido a esterilização, eliminando contaminantes Classificação: Formulação Finalidade Funcional
17 Classificação Formulação Sólidos (ágar) 1 a 2,0 % Caldos Ativação das culturas, repiques de microrganismos, provas bioquímicas Semi-sólidos (ágar) 0,05 a 0,3 %
18 Classificação Função Meios de Transporte e Conservação Meios para Crescimento e isolamento Meios comerciais para provas de identificação Meios para teste de sensibilidade aos antimicrobianos
19 Meios de Transporte e Conservação Meio Stuart Caldo Lactosado Cary Blair Salina Tamponada Ágar Nutriente
20 Meios de Transporte e Conservação Meio Stuart Impede a multiplicação do microrganismos e garante apenas sua sobrevivência. Haemophilus sp., Pneumococcus,Salmonella sp., Shigella sp. Cor original do meio: Branco opalescente. Não há evidência de crescimento bacteriano.
21 Meios de Transporte e Conservação Caldo Lactosado Microrganismos (MO) injuriados Ex: Água peptonada, Caldo lactosado -Salmonella sp
22 Meios de Transporte e Conservação Ágar Nutriente Análise de água, alimentos e leite, cultivo e isolamento preliminar das amostras Cor original do meio: branco opalescente. Positivo: Crescimento na superfície do ágar. Negativo: Ausência de crescimento.
23 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Chocolate Ágar Thayer-Martin - Chocolate Ágar Salmonella-Shigella (ss) Caldo Selenito Caldo Tetrationato Caldo Tioglicolato com indicador Caldo Tioglicolato sem indicador Ágar MacConkey Ágar Sangue Ágar CLED cystine lactose electrolyte deficient Caldo BHI infusão de cérebro e coração Löwenstein Jensen
24 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Chocolate Microrganismos exigentes Base - sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta (hemina e hematina) Haemophilus sp., Neisseria sp., Cor original do meio: castanho escuro (chocolate). Colônias de tamanho pequeno a médio, com pigmento amarelo: sugestivo de Haemophilusa sp. Colônias pequenas e delicadas, com pigmento creme claro: sugestivo de Neisseria sp.
25 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Chocolate Haemophilus sp. Neisseria sp.
26 Meios para Crescimento e Isolamento Thayer Martin Ágar Chocolate Vancomicina (G+), Colistina (G-), Nistatina (f) e Trimethoprim (PM)
27 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Sangue Gram negativo e Gram positivo, fungos filamentosos (bolores) e leveduras Eritrócitos íntegros (padrões de hemólise nítidos) Verificação de hemólise dos Streptococcus e Staphylococcus Prova de satelitismo (para identificação presuntiva de Haemophilus spp.). Cor original do meio: vermelho. Beta hemólise Alfa hemólise Gama hemólise
28 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Sangue S. aureus - colônias -hemolíticas
29 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar MacConkey Isolamento de bacilos Gram negativo (seletivo) Inibe Gram positiva (cristal violeta) Utilização de lactose (diferencial) Lactose positiva coloração avermelhada Lactose negativa coloração inalterada Eventualmente, podem crescer Enterococcus, Candida e Bacillus
30 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar MacConkey Salmonella. E.coli
31 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar MacConkey Klebsiella sp
32 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Salmonella-Shigella (SS) Inibem microrganismos Gram positivos (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio) Tiossulfato de sódio e o citrato férrico Colônias com centro negro (H 2 S) ou colônias incolores: suspeita de Salmonella. Colônias incolores: suspeita de Shigella spp. Colônias cor de rosa ou vermelho: suspeita de Escherichia coli ou Klebsiella spp. As bactérias não fermentadoras de lactose cor inalterada. As bactérias fermentadoras de lactose aparecem na cor rosa.
33 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Salmonella-Shigella (SS) Salmonella e Shigella Salmonella Escherichia coli Klebsiella sp
34 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar CLED cystine lactose electrolyte deficient Amostras de Urina. Deficiência de eletrólitos inibem o crescimento de Proteus. Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras. Cor original do meio: azul claro. Colônias lactose positiva: cor amarela. Colônias lactose negativa: cor azul.
35 Meios para Crescimento e Isolamento Ágar CLED cystine lactose electrolyte deficient
36 Meios para Crescimento e Isolamento Löwenstein Jensen Base ovos integrais Teste de niacina (positivo para Mycobacterium tuberculosis). Isolamento primário de micobactérias. Cor original do meio: verde claro Positivo: Crescimento de colônias amarelas/vermelhas Negativo: ausência de crescimento.
37 Meios para Crescimento e Isolamento Löwenstein Jensen Brometo cianogênio + benzidina
38 Meios Comerciais para Provas de Identificação e Classificação Ágar Citrato Simmons Ágar Bile-Esculina Ágar Sangue Caldo base de Moeller Ágar DNAse Ágar Esculina Ágar Fenilalanina CTA Cystine Tryticase Ágar Caldo Triptona Caldo Malonato Caldo Nitrato Ágar Müeller - Hinton Ágar TSI Triplo Açúcar Ferro Ágar base Uréia (Christensen) Vermelho de Metila, Voges-Proskauer
39 Identificação e classificação Ágar Sangue Gram negativo e Gram positivo, fungos filamentosos (bolores) e leveduras Eritrócitos íntegros (padrões de hemólise nítidos) Verificação de hemólise dos Streptococcus e Staphylococcus Prova de satelitismo (para identificação presuntiva de Haemophilus spp.). Cor original do meio: vermelho. Beta hemólise Alfa hemólise Gama hemólise
40 esverdeado Identificação e Classificação Ágar Sangue
41 Identificação e Classificação Ágar Sangue S. aureus - colônias -hemolíticas Alpha-hemólise (Streptococcus pneumoniae) Beta-hemólise (Streptococcus pyogenes) Gama-hemólise (Enterococcus faecalis)
42 Identificação e Classificação Ágar Sangue Teste de Camp Staphylococcus aureus Streptococcus a ser identificado Streptococcus agalactiae
43 Identificação e Classificação Ágar Sangue H.parainfluenzae, H.parahaemolyticus...
44 Provas de Identificação Ágar DNAse Hidrólise de ácido desoxirribonucléico (DNA) DNase positivos: Staphylococcus aureus, Serratia sp. e Proteus sp... DNase negativos: Staphylococcus coagulase negativa, enterobactérias... Revelação com HCl 1 N: Cor original do meio: amarelo claro Positivo: Presença de halo claro na parte inferior e em volta da colônia. Negativo: Ausência de halo claro em volta da colônia. Revelação com azul de toluidina : Cor original do meio: azul claro Positivo: Coloração rosa na parte inferior e em volta da colônia. Negativo: Ausência de cor rosa. O meio permanece com a cor original, azul.
45 Provas de Identificação Ágar DNAse
46 Provas de Identificação Caldo Malonato Malonato de sódio como única fonte de carbono, resultando em alcalinização do meio. Diferenciar gêneros e espécies de enterobactérias e não fermentadores. Cor original do meio: verde. Positivo: azul. Negativo: inalterado (verde).
47 Provas de Identificação Ágar Bile Esculina Hidrolise da esculina. Identificação de Streptococcus x Enterococcus Esculina > glicose + esculetina esculetina + íons férricos
48 Identificação Ágar base Uréia (Christensen) Ação da enzima urease - resultando na alcalinização do meio. Bacilos Gram negativos fermentadores e não fermentadores, Staphylococcus e Haemophilus. Cor original do meio: amarelo palha. Positivo: alteração do meio para cor de rosa, pink. Negativo: sem alteração de cor do meio.
49 Identificação CTA (Cystine-tryptic-agar ) Semi-sólido fermentação de carboidratos Usado para diferenciar espécies de Haemophilus sp., Branhamella catarrhalis e Corynebacterium spp. Neisseria sp.
50 Identificação Ágar Manitol Crescimento e fermentação do Manitol em meio hipertônico S. aureus +, S. saprophyticus +/-, S. epidermidis -
51 H.influenzae Fastidiosas Identificação Ágar Müeller - Hinton Requerem hemina (Fator X) Nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD ou Fator V)
52 Identificação TSI (Tríplice açucar e ferro) Teste bioquímico para identificação Família Enterobacteriaceae Fermentação de glicose, lactose e sacarose; produçaõ de gás e H2S
53 Identificação Vermelho de Metila, Voges-Proskauer Família Enterobacteriaceae VM : Fermenta glicose - via de ácida-mista ( ác. Acético; láctico; fórmico) Ex E. coli +; Klebsiella sp VP : Fermenta glicose via butilenoglicólica ( acetoína, butilenoglicol e poucos ácidos ) + KOH e O 2 a acetoína é convertida em diacetila + alfa-naftol - vermelho ( indicador Vermelho de metila) Ex Klebsiella sp +; E. coli
54 Família Enterobacteriaceae - +
55 Meios para Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton Ágar Sangue
56 Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton Kirby e Bauer e pelo NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards ) - condições de crescimento das principais bactérias. Avaliação da resistência aos antimicrobianos - métodos de difusão em disco e E-test para enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus, Enterococcus sp. A zona do diâmetro é particular para cada droga e organismo, sendo comparado com diâmetros padronizados pelo NCCLS, que determina cada microrganismo sendo sensível, intermediário ou resistente.
57 Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton Sensível - S. epidermidis Zona de inibição > 16mm
58 Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton Detecção da resistência à oxaclina ( meticilina) E-test Susceptibilidade à oxacilina
59 Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos Caldo Mueller Hinton
60 Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Sangue Teste de Bacitracina Streptococcus pneumoniae optoquina (s)
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