de células de neuroblastoma
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- Theodoro Valente Alcântara
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1 O inibidor da histona desacetilase, butirato de sódio, previne o IX Salão de Iniciação Científica PUCRS efeito estimulador do bloqueio de GRPR sobre a proliferação de células de neuroblastoma de Almeida, V. R. 1,2,3 ; Schwartsmann G. 3,4 ; Brunetto, A. L. 3,4 ; Abujamra, A. L. 3,4 ; Roesler, R. 2,3 1 Acadêmica de Ciências Biológicas, Faculdade de Biociências, PUCRS, Porto Alegre, RS, Brasil. 2 Departamento de Farmacologia, ICBS, UFRGS, Porto Alegre, RS, Brasil. 3 Laboratório de Pesquisas em Câncer, Centro de Pesquisas, HCPA, Porto Alegre, RS, Brasil. 4 Instituto do Câncer Infantil, ICI, Porto Alegre, RS, Brasil. Resumo O neuroblastoma é o tumor sólido extracranial mais comum em crianças, representando 8-10% dos cânceres infantis. O receptor do peptídeo liberador de gastrina (GRPR) tem expressão aberrante em vários tipos de câncer e contribui para o crescimento tumoral. Assim, antagonistas do GRPR têm sido desenvolvidos como novos agentes antitumorais. Nós avaliamos os efeitos do antagonista de GRPR, RC-3095, sozinho ou em combinação com o inibidor de histona desacetilase, butirato de sódio (NaB), um agente
2 antitumoral experimental que age influenciando o relaxamento da cromatina, em células de neuroblastoma murinas, Neuro-2A. Introdução O neuroblastoma origina-se de células da crista neural associadas ao sistema nervoso parassimpático. O peptídeo liberador de gastrina (GRP) age como potente mitógeno para tecidos neoplásicos pela ativação do seu receptor (GRPR). O inibidor seletivo de GRPR, RC- 3095, tem sido amplamente estudado como um potente agente antitumoral, devido à sua atividade anti-proliferativa em linhagens de câncer de próstata, pulmão e colorretal (ROESLER,2006). No entanto, não foi ainda avaliado em combinação com outros adjuvantes para quimioterapia em neuroblastomas. O butirato de sódio (NaB), um potente inibidor de histona desacetilase, induz parada do ciclo celular e apoptose em células malignas(rosato,2003). Neste estudo foi avaliado o efeito de RC-3095 sozinho ou em combinação com NaB na linhagem celular murina de neuroblastoma, Neuro-2A. Metodologia As células Neuro-2A foram semeadas em placas com 24- ou 96-poços com meio DMEM-LG, antibióticos, antifúngicos e soro fetal bovino a 10%. Foram tratadas com butirato de sódio (1mM), RC-3095 (100nM, 10nM, 1nM, 0.1nM), ou uma combinação de ambos e analisadas 48h pós-tratamento. Para este ponto as células foram submetidas ao teste de exclusão por trypan blue ou ensaio de MTT, respectivamente para avaliar a proliferação celular e viabilidade. Resultados e Discussão
3 Através do teste de exclusão por trypan blue, verificamos a curva de dose de RC-3095, e que a dose de 100nM de RC-3095 teve efeito proliferativo em células Neuro-2A quando comparada ao controle. O efeito pró-proliferativo do RC-3095 (100nM) foi prevenido por NaB (1mM) (Figs. 1 e 2). Proliferação Celular Células Viáveis (contagem bruta) Controle RC nM RC nM RC3095 1nM RC3095 0,1nM NaB 1mM NaB 1mM + RC nM NaB 1mM + RC nM Figura 1 Proliferação celular de células Neuro-2A pós-tratamento 48h. p= 0.03, p= 0.001
4 Viabilidade Celular Absorbância (492nm) Controle RC 100nM RC 0.1nM NaB 1mM NaB 1mM + RC 100nM NaB 1mM + RC 0.1nM Figura 2 Ensaio MTT de células Neuro-2A pós-tratamento 48h. p=0,21, p=0,001, p=0,000 Conclusão O antagonista GRPR RC-3095 induziu um efeito pró-proliferativo em células Neuro- 2A. O co-tratamento com NaB preveniu esse efeito. Esses dados fornecem a primeira evidência de efeito estimulador de um antagonista GRPR sobre a proliferação celular e indicam o potencial antitumoral de agentes que regulem o relaxamento da cromatina em neuroblastoma. Referências KOURAKLIS G, THEOCHARIS S, Histone deacetylase inhibitors: a novel target of anticancer therapy (review), Oncology reports, vol. 15 (2006), pp
5 TONINI GP, PISTOIA V, Moleculary guided therapy of neuroblastoma: a review of different approaches. Current Pharmaceutical Design, vol. 12, ed. 18(2006), pp ROESLER R, KAPCZINSKI F, QUEVEDO J, DAL PIZZOL F, SCHWARTSMANN G, The Gastrin-Releasing Peptide Receptor as a Therapeutic Target in Central Nervous System Disorders, Recent patents on CNS drug discovery, vol. 2, n 2 (2007), pp ROESLER R, LUFT T, OLIVEIRA SH, FARIAS CB, ALMEIDA VR, QUEVEDO J, DAL PIZZOL F, SCHRÖDER N, IZQUIERDO I, SCHWARTSMANN G, Molecular mechanisms mediating gastrin-releasing peptide receptor modulation of memory consolidation in the hippocampus, Neuropharmacology, vol.51,ed.2 (2006), pp ROSATO RR, GRANT S, Histone deacetylase inhibitors in cancer therapy, Cancer Biology & Therapy, vol. 2, ed. 1(2003), pp
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