AUMENTO DA NEUROGÊNESE ENDÓGENA EM MODELO DE AVC APÓS ADMINSTRAÇÃO INTRAVANENOSA DE CÉLULAS-TRONCO DA MEDULA ÓSSEA

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1 : AUMENTO DA NEUROGÊNESE ENDÓGENA EM MODELO DE AVC APÓS ADMINSTRAÇÃO INTRAVANENOSA DE CÉLULAS-TRONCO DA MEDULA ÓSSEA 1 Aragão-Dias, A. 1, CHAVES, L.E.S. 2, SOUSA, T. C. 1, FONSECA, A. C. G. 2, FRANCO, E. C. S. 1, GOMES, B. D. 1, GOMES, B. D. 1 Instituto de Ciências Biológicas - UFPA, 2 Centro de Inovações Tecnológicas - IEC FAPESPA - Fundação de Amparo a Pesquisa do Pará No modelo experimental de acidente vascular cerebral (AVC), a oclusão de artérias cerebrais causa isquemia focal em regiões específicas do cérebro e, consequentemente, degeneração significativa de neurônios e células gliais. Este trabalho tem por objetivo analisar a proliferação neuronal (células DCX positivas-neuroblastos) em um modelo de AVC implementado em animais submetidos à isquemia e tratados com células mononucleadas da medula óssea (CMMO). Neste estudo foram usados dez ratos Wistar (machos adultos) pesando de 250 a 300g. Todo o procedimento foi aprovado pelo CEPAE-UFPA (Protocolo Nº BIO ). Os animais foram submetidos à isquemia focal pela injeção de 40 pmol do vasoconstritor endotelina-1 (Sigma, USA) no córtex motor. Vinte e quatro horas após a lesão os animais foram tratados com 5x106 (CMMO (n=5) ou solução salina estéril (n=5) administrada pela veia caudal. Após sete dias os animais foram sacrificados, os cérebros fixados e crioprotegidos. Secções de 30µm foram analisadas pela técnica de imunoistoquímica para anti-dcx. O número de células DCX+ na região cortical foi de 6,5±1,7 e 22,3±3,7 nos grupos controle e tratado, respectivamente (ANOVA+Bonferroni p < 0.01). Células DCX+ também foram quantificadas em toda a extensão da zona subventricular (SVZ) onde foi observado um total de 83,2±8,5 células no grupo controle e 93,1±9,7 células no grupo tratado (ANOVA, Bonferroni p > 0.01). A análise qualitativa da zona subgrandular do hipocampo (SGZ) demonstrou um maior número de células DCX+ em animais do grupo tratado quando comparados aos animais controle. Estes resultados demonstraram que o tratamento com CMMO promove um aumento da neurogênese endógena nas regiões neurogênicas (SVZ e SGZ) e migração destas células para o córtex lesado. É provável que a migração significativa (>3vezes) destas células em animais tratados com CMMO para a área lesada auxilie na recuperação funcional observada após terapia celular.

2 : AÇÃO ANTIBACTERIANA IN VITRO DO EXSUDATO DO COÁGULO DE FIBRINA RICO EM PLAQUETAS E LEUCÓCITOS (L-PRF). 1 BOZELLI, A. F. 1, REIFF, R. B. D. M. 1, JUNIOR, D. O. S. 1, LUSTRI, W. R. 2, CORBI, P. P. 1, AMARAL, A. C. 1 Ciências Biológicas e da Saúde - UNIARA, 2 Departamento de Química - UNICAMP CNPq O objetivo desta pesquisa é investigar a ação antibacteriana do exsudato extraído do coágulo de fibrina rico em plaquetas e leucócitos (L-PRF) in vitro. Tais resultados poderão ser correlacionados com as evidências relatadas por Bielecki e colaboradores (J Bone Joint Surg Br. 89:417, 2007) da ação antibacteriana demonstrada pelos subprodutos plaquetários e leucocitários contidos no gel rico em plaquetas e leucócitos (L-PRP). A caracterização da efetividade biológica destes métodos faz-se necessária para a fundamentação científica para a futura utilização clínica dos concentrados autólogos de plaquetas e leucócitos no tratamento de lesões cutâneas infectadas. Voluntários masculinos saudáveis (n=5), com idade entre 19 e 24 anos, disponibilizaram 25 ml de sangue venoso periférico que foram coletados em um tubo de 5 ml, contendo anticoagulante (EDTA-Na 0,027g), e 2 tubos de 10 ml cada, contendo ativador de coagulação sanguínea (revestimento com silicone). O sangue coletado com anticoagulante foi utilizado para a caracterização do hemograma. Os dois tubos com ativador de coagulação foram submetidos, imediatamente, ao processo de centrifugação a 2700 rpm durante 12 minutos. Os coágulos de fibrina obtidos foram separados em outro tubo estéril após a remoção da sua região inferior abundante em hemácias. Um processo de agitação mecânica vigorosa, com duração de 5 minutos, foi conduzido para a extração do exsudato contido no coágulo nos períodos de 1 e 5 horas após sua obtenção (períodos de ativação para degranulação plaquetária). Para a determinação da possível atividade antibacteriana as amostras de exsudato foram submetidas ao ensaio de difusão em disco de Kirby-Bauer. Um volume de 12 μl do exsudato foi aplicado no disco estéril (6 mm de diâmetro) e colocado em contato com as placas contendo meio de cultura (BAB) e semeadas com as cepas bacterianas de Escherichia coli (ATCC 25922), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) e Staphylococcus aureus (ATCC 25923), utilizando como controles positivos os antibióticos Amicacina (AMI), Cef-triaxona (CRO) e Oxacilina (OXA). As placas foram incubadas em estufa a 37 C por 18 horas e a análise da atividade antibacteriana estabelecida mediante a observação e quantificação do diâmetro dos halos de inibição em milímetros. O projeto foi aprovado pelo CEP/UNIARA sob o protocolo 1267/11. Os resultados demonstraram que não foram encontradas evidências de ação antibacteriana do exsudato do L-PRF, independentemente do tempo de ativação do coágulo após centrifugação ou perfil das cepas bacterianas avaliadas. A análise de todas as amostras foi caracterizada pela ausência do halo de inibição (diâmetro de 6 mm compatível com o diâmetro do disco). Já os controles positivos exibiram os valores de halo de 20,9±1,3 para AMI e 19,6±2,1para CRO na cultura de P. aeruginosa, 18±0 para AMI e 19,8±4 para CRO na cultura de E.coli e 19,2±1,6 para AMI, 32,4±3,3 para CRO e 6±0 para OXA na cultura de S. aureus. Estes resultados nos levam a concluir que os subprodutos plaquetários e leucocitários contidos no exsudato, obtidos através do procedimento de concentração plaquetária pelo método de L-PRF, não desencadearam atividade antibacteriana contra as cepas de Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus.

3 : Perfil de distribuição de fibras colágenas na placenta de pacientes com suspeita de infecção por Escherichia coli. 1 DUARTE*, P. O. 1, FERMIANO, M. H. 1, ZANIN, P. H. 2, TOZETTI, I. A. 1, JARDIM, M. I. A. 1,2, DOURADO, D. M. 1 Laboratório de Toxinologia e Plantas Medicinais - UAU, 2 Programa de Pós- Graduação em Doenças Infecciosas e Parasitárias - UFMS Universidade Anhanguera-Uniderp, UFMS, INAU, CPP, CNPQ, Hospital Santa Casa, Campo Grande/MS O objetivo deste trabalho foi comparar a quantidade de colágeno no tecido placentário ao redor dos grandes vasos e nos vilos terminais em mulheres com suspeita de infecção por Escherichia coli, correlacionando com infecção do trato urinário e doença hipertensiva específica da gestação. Foram utilizadas para a pesquisa onze amostras de placenta, provenientes de gestantes com idade entre 21 e 41 anos. A coleta das amostras biológicas placentárias foi realizada no Hospital Santa Casa, Campo Grande/ MS. Imediatamente após o parto, segmentos pesando 1 a 2 g foram cortados com bisturi cirúrgico, entre a inserção do cordão umbilical e a borda da placenta, incluindo desde a face fetal até a face materna. As amostras placentárias foram imersas em solução de Formol tamponado 10% por 24 horas, processadas (álcool e xilol), incluídas em parafina, sendo os cortes de 5µm de espessura colocados sobre lâmina histológica para coloração pelo método de Tricrômico de Gomori modificado (TGM) e Picrossírius- Hematoxilina (MICHALANY, 1980). A quantificação do colágeno foi avaliada de forma semi-quantitativa, através do programa de captura de imagem (Imagelab ). Este projeto foi avaliado pelo CEP (Comissão de Ética em Pesquisa Envolvendo Seres Humanos)da Anhanguera Educacional com PARECER: 004/2012 -MS. As medidas tanto dos grandes vasos quanto dos vilos terminais foram comparadas estatisticamente utilizando-se o teste de Tukey para comparação entre diferentes médias para variâncias iguais, utilizando um nível de significância de 5%. As gestantes um, dois e três tiveram a maior média na quantificação de colágeno placentário. São gestantes que durante a gravidez apresentaram infecção do trato urinário (ITU), causada pela bactéria Escherichia coli ( < i>e. coli) e apresentaram também, doença hipertensiva específica da gestação (DHEG) que caracteriza diminuição da perfusão placentária e considerável alteração na ultraestrutura dos vasos do leito placentário, sugerindo lesão endotelial. Nessas pacientes a avaliação da quantificação de colágeno placentário ao redor dos grandes vasos teve uma média de 49 (±10,81); 34 (±8,44); 62 (±5,93), já nos vilos terminais a média foi de 27 (±13,68); 22 (±6,34); 18 (±7,65). As demais gestantes não apresentaram significativas alterações na quantificação de colágeno quando comparadas as gestantes um, dois e três e mantiveram uma média de colágeno nos grandes vasos entre 28 (±08,48); 34 (±09,28) e nos vilos terminais entre 15 (±5,62); 14 (±04,54). Dentre as 11 amostras de placenta avaliadas, concluiu-se que as maiores porcentagens de colágeno foram mais evidentes nas gestantes um, dois e três e, que também apresentaram infecção do trato urinário e doença hipertensiva gestacional. Comparando-se os valores encontrados nos vilos terminais com os dos grandes vasos, verificou-se que as médias foram diferentes, ou seja a quantidade de colágeno foi maior ao redor dos grandes vasos comparados ao observado nos vilos terminais.

4 : EVALUATION OF THE ANTIEDEMATOGENIC EFFECT OF HYDROGELS CANTAINING NANOCAPSULES AND NANOEMULSIONS OF TTO 1 FLORES, F. C. 1, LIMA, J. A. 1, SILVA, C. R. 1, FERREIRA, J. 1, BECK, R. C. R. 1, SILVA, C. D. B. D. 1 Farmácia Industrial - UFSM CNPq and FAPERGS The aim of this work was to evaluate the in vivo antiedematogenic effect of hydrogels containing nanoemulsions (HG-TTO- NE) and nanocapsules suspensions (HG-TTO-NC) of tea tree oil in mice, in order to check the influence of nanostructured systems in anti-inflammatory effect of TTO. NE and NC were prepared by spontaneous emulsification and interfacial deposition of preformed polymer methods, respectively. Then, hydrogels were prepared by a gel forming polymer dispersed in aqueous nanoemulsions and nanocapsules, resulting in a TTO content of 1% (w/w). Blank hydrogels containing nanodroplets controls (HG-C-NE and HG-C-NC), a hydrogel containing free TTO (HG-TTO) and respective control (hydrogel without oil HG) were made. All procedures were approved by Universidade Federal de Santa Maria Institutional Ethics Committee (number 94/2010, UFSM). The in vivo antiedematogenic effect was evaluated by ear thickness measurement after UVB-irradiation (0.27 mw/cm2 at dose of 0.5 J/cm2) in mice. For this, adult male Swiss mice weighing g were used. Animals (n=6) were topically treated on the ear surface with 0.06 g of hydrogels. The formulations were applied 1 h before irradiation of the ear surface and also 4 h after irradiation. An untrated irradiated control group was also included. Ear thickness was measured before and 24 h after UVB irradiation. Hydrogels showed adequate physicochemical characteristics such as homogeneous aspect and ph values between The protective effect of hydrogels against UVB radiation was observed. Semisolid formulations containing TTO loaded nanodroplets (HG-TTO NE and HG-TTO-NC) were able to reduce significantly ( p < 0.01 vs. un-treated mice) the ear edema after the exposition of the UVB radiation. A reduction of, approximately, 67% was obtained for HG-TTO-NC and HG- TTO-NE in relation to the untrated group. On the other hand, neither hydrogels containing free oil nor formulations without oil reduced the ear thickness induced by light UVB. So, the inclusion of TTO in the nanocapsules and nanoemulsions allowed verifying its effect in reducing the edema induced by UVB exposure, unlike free oil formulation, where this effect was not observed. This work presented a bioassay to evaluate the antiedematogenic effect of hydrogels. The effect of semisolid formulations containing TTO associated nanodroplets in the anti-inflammatory response to skin damage was showed.

5 : EVALUATION OF THE IRRITANT POTENTIAL OF ANTHRALIN ASSOCIATED TO NANOCARRIERS BY HEN S EGG TEST CHORIOALLANTOIC MEMBRANE TEST METHOD (HET- CAM) 1 SAVIAN, A. L. 1, RODRIGUES, D. 1,1,1,1, SILVA, C. D. B. D. 1 Farmácia Industrial - UFSM CNPq, CAPES Anthralin is a potent drug used in the topical treatment of psoriasis. However, its use is limited due to side effects such as erithema, necrosis and staining of the skin. The entrapment of drug in nanocarriers can help to improve the efficacy of the drug and reduce its side effects. The aim of this work was to evaluate the irritation potential of anthralin-loaded polymeric nanocapsules by in vitro chorioallantoic membrane of fertilized hen s egg (HET-CAM). Anthralin-loaded polymeric nanocapsules (0.5 mg/ml) containing EDTA (0.05% An-NCE) and ascorbic acid (0.02% An- NCAA) were prepared (n = 3) by interfacial deposition of the preformed polymer method. Formulations were characterized by particle size, polydispersity index (PDI), zeta potential and drug content. Blank formulations (without the drug B-NCE and B-NCAA) and a dispersion containing free anthralin (AnD) were also prepared (n = 3). The irritation potential of the samples was evaluated by means of the hen s egg (HET). Fertilized chicken (Cobb 500) eggs on the 10th day of incubation (37.3 ºC, 65% relative humidity) were used. Once opened, the membrane was removed and 0.3 ml of the formulations was applied to the CAM (n = 6). Positive controls (0.1N NaOH and 1% lauryl ether sulfate) and negative control (0.9% NaCl) were examined. After 5 minutes, the presence or not of irritant characteristics (vasoconstriction, hemorrhage and coagulation) was evaluated. The irritation score (IS) was determined. Lesions were classified as non-irritant, slightly, moderate and severe irritant. Results were evaluated by ANOVA. Nanocapsules containing anthralin presented nanometric mean size (An-NCE, 241 ± 04 nm; An-NCAA, 234 ± 07 nm), appropriate polidispersity index ( < 0.25), negative zeta potential (An-NCE, ± 0.06 mv; An-NCAA, - 9,04 ± 1,41 mv and drug content close to the theoretical value (An-NCE, ± 3.51%; An-NCAA, ± 2.71%; AnD ± 3.84%). Considering the parameters evaluated, no statistical difference was obtained between the formulations (p > 0.05). In the HET-CAM assay, nanocapsules containing anthralin, blank nanocapsules and negative control showed no reactions, being classified as non-irritant. The sample containing the free drug (AnD) and the positive controls were classified as strong and severe irritant (AnD IS = ± 0.67; 0.1N NaOH IS = ± 1.22; 1% lauryl ether sulfate IS = ± 0.21). Anthralin-loaded polymeric nanocapsules were developed and showed satisfactory characteristics. This strategy may minimize to zero the strong irritancy caused by drug, evaluated by HET-CAM in vitro assay. The HET-CAM test contributes to reduce and replace in vivo assays, besides refining pain and stress in animals and reducing the time and cost of analysis. Nanocapsules evaluated in this work can be a new model of topic formulations for the treatment of psoriasis. Studies are in progress in an attempt to increase the stability and effectiveness of the drug.

6 : EXPRESSION OF MMP-2 AND TIMP-2 IN A RENAL CELL CARCINOMA AFTER ES GENE THERAPY 1,2 CHAVES, K. C. B. 1,2, BRAGA, M. S. 1,2, FOGUER, K. 1,2, BELLINI, M. H. 1,2, BELLINI, M. H. 1 MEDICINA - UNIFESP, 2 CENTRO DE BIOTECNOLOGIA - IPEN FAPESP Evaluate expression of MMP-2 and TMIP-2 in an orthotopic model metastatic renal cell carcinoma after treatment with ES. Male Balb/c mice (aged 8-10 weeks, weight 22g) bearing Renca cells were divided into two experimental groups (N=10, Ethics Committee Number of Process: 87/11). Endostatin (ES)-treated group was treated with NIH/3T3-LendSN cells and control group was injected with NIH/3T3-LXSN cells. At the end experimental, mice were euthanized, the metastatic lungs were collected, fragmented to immunoflourescence staining and frozen to real time-pcr. Single comparison was performed using Student s t test, using GraphPad Prism, version 4.0. P < 0.05 was considered statistically significant. The number of the metastatic foci was significantly decrease ES-treated group compared to the control group (12,14 ± 1,5 vs 64,47 ± 9,2) (P < 0.001). Metalloproteinase-2(MMP-2) mrna expression did not change with ES treatment. Besides, the Tissue inhibitor metalloproteinase-2(timp-2)mrna expression level increased 1.7 fold in the ES-treated group compared to the control group( P < 0.001). Immunofluorescence analysis revealed that MMP-2 was mainly expressed in cytoplasm of tumor cells. ES treatment led to a slightly reduction on the MMP-2 expression. On the contrary, strong TIMP-2 staining was mostly detected in the stroma of the metastatic lung in the control group. Whereas, in the ES treated group was found a significant increase of TIMP-2 expression. Endostatin gene therapy seems to inhibit the activity of MMP-2 by transcriptional activation of TIMP-2

7 : MUTAÇÃO 35delG EM PACIENTES SURDOS PRÉ-LINGUAIS SUBMETIDOS AO IMPLANTE COCLEAR NO RIO GRANDE DO SUL 1 MOTTA, L. H. C. 2, FÉLIX, T. M. 2, SOUZA, L. T. 1, LAVINSKY-WOLFF, M. 2, COSTA-MOTTA, F. M. M. 1, FARIA, M. R. 3, PERES, W. 1, LAVINSKY, L. 1 Serviço de Otorrinolaringologia - UFRGS, 2 Serviço de Genética Médica - HCPA, 3 Ciências de Alimentos e Tecnologia - UFPEL FIPE/HCPA É de conhecimento geral que mutações no gene GJB2 (13q12, codificadora da proteína conexina 26, que forma junções GAP entre células de sustentação do ouvido interno), principalmente a 35delG, são responsáveis pela maioria dos casos de surdez profunda de causa genética em pacientes pré-linguais (termo conceitual para pacientes que nunca tiveram exposição sensorial ao som, ou seja, nasceram surdos). Este estudo foi a primeira investigação genética já relatada em crianças com surdez profunda pré-lingual na região Sul do Brasil, e teve como objetivo determinar a prevalência da mutação 35delG no gene GJB2 em pacientes com surdez pré-lingual, sem etiologia definida, submetidos à habilitação auditiva através de Implante Coclear no Serviço de Otorrinolaringologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Este trabalho foi aprovado no Comitê de ética do HCPA (08/182). Consiste em um estudo transversal aninhado a coorte retrospectiva. Foram coletados 5mL de sangue em EDTA dos pacientes. Após a extração de DNA, a mutação 35delG foi estudada através de PCR (Polymerase Chain Reaction) e sequenciamento do gene GJB2. Entre os 152 pacientes do Programa de Atendimento ao Surdo Severo e Profundo (PASSP) que foram submetidos ao implante coclear entre 2001 e 2008, 37 pacientes com etiologia indeterminada para surdez foram incluídos nesta pesquisa após preencherem os critérios de inclusão. A prevalência da mutação 35delG entre os pacientes foi de 11% (8 alelos). A prevalência da mutação 35delG neste estudo, corrobora com a literatura brasileira. Estudos adicionais utilizando estes pacientes devem ser realizados para que possamos estabelecer se existe diferença no resultado auditivo do implante coclear entre os pacientes com surdez de origem genética quando comparados com pacientes surdos devido a outra etiologia, ou se os resultados a longo prazo são similares.