PLASMA IMUNE DE COELHO COM INFECÇÃO AGUDA NO CONTROLE DA PARASITEMIA POR Trypanosoma evansi EM RATOS INFECTADOS EXPERIMENTALMENTE

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1 Act Veterinri Brsilic, v.4, n.3, p , 21 PLASMA IMUNE DE COELHO COM INFECÇÃO AGUDA NO CONTROLE DA PARASITEMIA POR Trypnosom evnsi EM RATOS INFECTADOS EXPERIMENTALMENTE [Immune plsm of rbbits with cute infection in the control of Trypnosom evnsi prsitemi in experimentlly infected rts] Mteus A. Otto 1, Aleksndro S. D Silv 2, Lucs T. Gressler 1, Frnciele Bess 1, Letíci P. Dll Agnol 1, Tyn M. Sessegolo 1, Ptrique L. Pereir 1, Silvi G. Monteiro 3,* 1 Curso de Medicin Veterinári d UFSM, Snt Mri, RS, Brsil 2 Progrm de Pós-grdução em Medicin Veterinári d Universidde Federl de Snt Mri (UFSM), Snt Mri, RS, Brsil.. 3 Deprtmento de Microbiologi e Prsitologi d UFSM, Snt Mri, RS, Brsil. RESUMO - O objetivo deste estudo foi comprr o efeito do plsm imune in ntur e congeldo de coelhos com infecção gud no controle profilático e curtivo do Trypnosom evnsi em rtos prsitdos. Form utilizdos, um coelho e 3 rtos dultos. O coelho foi infectdo com, ml de sngue contendo tripomstigots. Ao presentr o prsit n corrente snguíne, foi coletdo o sngue e deste obtido o plsm, o qul foi rmzendo em tubos de criopreservção e congeldo, plsm congeldo e outr metde foi mntid 37 C por 3 minutos, plsm in ntur. Os rtos form seprdos em seis grupos homogêneos, sendo todos infectdos intrperitonilmente com 4, x 1 4 tripomstigots de um isoldo de T. evnsi. Form dministrdos,8ml de plsm nos trtmentos profilático (grupos A e B), dois dis ntes d inoculção do prsito, e curtivo (grupos C e D), dois dis pós inoculção do T. evnsi. O grupo E recebeu pens solução fisiológic, grupo controle. O plsm congeldo foi dministrdo nos grupos A e C e o plsm in ntur nos grupos B e D. Os efeitos do plsm de coelhos com infecção gud foi vlido trvés do período pré-ptente, sobrevid e cur dos rtos. Não houve diferenç entre os períodos pré-ptente. Foi observd um longevidde superior dos rtos do grupo B que foi trtdo com plsm in ntur profilticmente. Nenhum niml obteve cur d infecção, porém podemos concluir que terpêutic com plsm imune de coelhos ument sobrevid de rtos infectdos com T. evnsi. Plvrs-Chve: Trypnosom evnsi, coelhos, rtos, plsm imune, trtmento. ABSTRACT - This study ws imed to compre the effect of fresh nd frozen immune plsm of rbbits with cute infection in the prophylctic nd curtive control of Trypnosom evnsi-infected rts. Thirty dult rts nd rbbit were used. The rbbit ws infected with.ml of blood contining trypomstigotes. Showing the prsite in the bloodstrem, plsm ws obtined nd divided in frozen nd fresh plsm. Frozen plsm ws stored in cryopreservtion tubes nd frozen. Fresh plsm ws kept t 37 C for 3 minutes. The rts were seprted into six equl groups, ll infected intrperitonelly with 4. x 1 4 trypomstigotes of the T. evnsi strin. Ech rt from prophyltic (A nd B) nd curtive(c nd D) groups received.8ml of plsm. Animls from group E (control group) received only sline. Frozen plsm ws dministered in groups A nd C nd the fresh plsm in groups B nd D. The effects of rbbits plsm with cute infection ws estimted by evlution of the preptency period, longevity nd curtive effects of rts. No difference ws observed in the preptency period. The longevity of the nimls treted prophylcticlly with fresh plsm (group B) ws superior thn the other groups. No curtive effect ws observed in the nimls, but bsed upon the results it is concluded tht the tretment with immune plsm of rbbits increses the longevity of T. evnsi-infected rts. Keywords: Trypnosom evnsi, rbbits, rts, immune plsm, tretment. INTRODUÇÃO Trypnosom evnsi é um protozoário d clsse Mstigophor cuj trnsmissão é essencilmente mecânic, pois ele é trnsferido de um hospedeiro mmífero outro pel limentção interrompid de insetos picdores, principlmente tbnídeos e Stomoxys sp. (Lun e Desser, 199). Este protozoário * Autor pr correspondênci. E-mil: sgmonteiro@uol.com.br. 18

2 Act Veterinri Brsilic, v.4, n.3, p , 21 cus um importnte doenç populrmente conhecid como surr ou Ml ds cdeirs que se encontr mplmente distribuíd em regiões tropicis e subtropicis no mundo. Est doenç fet um grnde vriedde de mmíferos domésticos, silvestres e tulmente o homem (Stevens et l., 1989; Nunes e Oshiro, 199; Nunez et l., 1993; Frnke et l., 1994; Silv et l., 1996; Joshi et l., 2). A doenç é crcterizd por lts txs de morbidde e mortlidde em nimis não trtdos. Os principis sinis clínicos incluem febre de cráter intermitente, edems subcutâneos, nemi, linfdenopti, emgrecimento, letrgi, incoordenção motor e um mnqueir típic que crcteriz doenç (Silv et l., 1996; Silv et l., 22; Brndão et l., 22; Colpo et l., 2). Infecções nturis em cães e eqüinos com mnifestção de sinis clínicos severos têm sido reltds em municípios do estdo do Rio Grnde do Sul, Brsil (Frnciscto et l., 27; Znette et l., 28). A infecção por T. evnsi não ocorre d mesm form em tods s espécies nimis. Em coelhos, prsitemi e os sinis clínicos d doenç não se mnifestm em todos os nimis que entrm em contto com o prsito (Uche et l., 1992). Trblhos reltm que coelhos possuem nticorpos cpzes de destruir o T. evnsi e durnte o curso d infecção estes nimis mntêm elevdos seus níveis de imunoglobulins (IgG, IgM e IgA). Alguns pesquisdores já descreverm cur d tripnossomose por T. evnsi em coelhos infectdos (Uche et l., 1992; D Silv et l., 28). No plsm estão presentes os principis ftores envolvidos n imunidde do hospedeiro que, segundo pesquisdores, não são perdidos com o congelmento e são pssíveis de trnsmissão pssiv (Hunt e Moore, 199). Este trblho teve como objetivo comprr o efeito do plsm imune in ntur e congeldo de coelhos com infecção gud no controle profilático e curtivo d prsitemi por T. evnsi em rtos prsitdos. Animis MATERIAIS E MÉTODOS Neste trblho, utilizou-se um coelho (Nov Zelândi) mcho, dulto e 3 rtos (Rttus norvegicus), mchos, com dois meses de idde. Todos os nimis form mntidos em mbiente com tempertur controld (23ºC), recebendo águ e rção comercil à vontde. Obtenção do plsm O coelho foi infectdo com,ml de sngue contendo um concentrção de 1 4 tripomstigots de T. evnsi, vi intrperitonil. Dirimente form relizdos esfregços snguíneos com sngue periférico obtido d orelh, cordos com pnótico rápido e nlisdos em microscópio óptico (D Silv et l., 26). Entre o sétimo e décimo di pós inoculção o coelho presentou tripomstigots n circulção, período em que foi nestesido com ssocição de quetmin e xilzin pr colet de sngue vi intrcrdíc. Depois d colet do sngue o niml foi eutnsido com um sobredose dos medicmentos. A mostr de sngue foi mntid em tubos com EDTA 1% e centrifugd pr obtenção do plsm imune. Metde do plsm obtido foi locdo em tubos de criopreservção e rmzendo em nitrogênio líquido -2ºC por 48 hors, plsm congeldo. A outr prte do plsm foi mntid em bnho-mri 37ºC por 3 minutos, plsm in ntur. Teste em roedores Pr verificr trnsmissão de imunidde pssiv, nti-tripnossom, pelo plsm imune de coelhos com infecção gud por T. evnsi form utilizdos rtos infectdos experimentlmente por este flgeldo. Trint roedores, divididos em cinco grupos com seis nimis cd (A, B, C, D, E) form inoculdos, vi intrperitonel, com um concentrção de 4, x 1 4 de um isoldo T. evnsi (Colpo et l., 2), criopreservdo em nitrogênio líquido. Os efeitos d terpi com plsm imune congeldo e in ntur form medidos trvés do período pré-ptente, sobrevid e cur dos rtos. Os nimis dos grupos A e B receberm terpi profilátic, isto é, o plsm imune foi dministrdo dois dis ntes d infecção experimentl dos rtos. Os roedores dos grupos C e D form trtdos curtivmente, ou sej, o plsm foi dministrdo dois dis pós inoculção do T. evnsi nos nimis. O grupo E foi utilizdo como grupo controle, não trtdo. A dose de,8 ml de plsm, vi intrperitonel, utilizd neste estudo foi bsed no trblho de Wechsler e Kongshvn (1984) que obteve cur dos nimis infectdos por Trypnosom musculi. Os rtos do grupo E receberm pel mesm vi solução fisiológic. Pr verificr se o rmzenmento 186

3 Act Veterinri Brsilic, v.4, n.3, p , 21 interferiu n conservção de constituintes do sistem imunológico presentes no plsm, form relizdos os trtmentos profiláticos e curtivos com plsm congeldo (grupos A e C) e plsm in ntur (grupos B e D). Avlição d prsitemi Após inoculção do prsito e início dos trtmentos com plsm imune, os rtos form vlidos, em intervlos de dois dis, trvés d pesquis de tripomstigots em esfregço do sngue periférico (D Silv et l., 26). O período experimentl foi de 4 dis, momento em que os rtos sobreviventes form eutnsidos (Lucc et l., 1996). Análise esttístic A nálise esttístic dos ddos foi feit trvés d nálise de vriânci (ANOVA), seguid d plicção do teste de Tukey pr comprção entre s médis do período pré-ptente e longevidde, clculndo-se o coeficiente de vrição pr verificr precisão dos ddos (Silv e Azevedo, 22). Período (dis) Período (dis) Pré-ptente Pré-ptente Plsm congeldo Plsm in ntur Longevidde b b Longevidde Grupo A Grupo C Grupo B Grupo D Figur 1. Período pré-ptente e longevidde de rtos infectdos por T. evnsi pós imunoterpi com plsm imune de coelhos congeldo e in ntur. (Letrs iguis pr o mesmo prâmetro não diferem esttisticmente entre si % no teste de Tukey n mesm terpi). Comitê De Étic e Bem Estr Animl O presente experimento foi provdo pelo Comitê de Étic e Bem-Estr Animl d Universidde Federl de Snt Mri (UFSM), n /28-29, de cordo com legislção vigente e os Princípios Éticos publicdos pelo Colégio Brsileiro de Experimentção Animl (COBEA). RESULTADOS Período (dis) Terpi profilátic b b Pré-ptente Longevidde Grupo A Grupo B Não foi observdo diferenç entre os trtmentos profiláticos e curtivos com relção o período préptente e sobrevid dos rtos trtdos com plsm congeldo. Já qundo foi vlid ção do plsm in ntur no protocolo terpêutico profilático, observou-se períodos de vid pós-inoculção prolongdos (Figur 1). Qundo se comprou os trtmentos curtivos e profiláticos foi verificdo que o profilático elevou longevidde dos rtos trtdos com plsm in ntur, o que não ocorreu nos demis grupos teste. No entnto, o período préptente não diferiu entre protocolos profiláticos e curtivos (Figur 2). A tx de mortlidde pr os grupos A, C, D e E foi de 1% e pr o grupo B foi de 34,4%. Período (dis) Pré-ptente Terpi curtiv Longevidde Grupo C Grupo D Figur 2. Período pré-ptente e longevidde de rtos infectdos por T. evnsi pós imunoterpi profilátic e curtiv com plsm imune de coelhos. (Letrs iguis pr o mesmo prâmetro não diferem esttisticmente entre si % no teste de Tukey n mesm terpi) 187

4 Act Veterinri Brsilic, v.4, n.3, p , 21 DISCUSSÃO O período pré-ptente, compreendido desde infecção té detecção dos tripomstigots no sngue periférico, não diferiu entre os grupos (Figur 1 e 2). Os trtmentos testdos tmbém não interferirm n pré-ptênci do T. evnsi em rtos, pois o período mnteve-se entre 1 e,6 dis, como descrito pel litertur (Oliveir et l., 1989; Queiroz et l., 21; Doyle et l., 27). A criopreservção do gente em nitrogênio líquido já foi reltd prolongndo vid de rtos infectdos com T. evnsi (D Silv et l., 29). Por este motivo, foi utilizdo neste estudo sngue criopreservdo pr infectr os nimis, fim de umentr longevidde e consequentemente elevr probbilidde de respost pssiv pretendid com terpi com plsm de coelho infectdo com T. evnsi. Tl objetivo foi lcnçdo, pois o período de sobrevivênci de todos os nimis do experimento foi superior 1 dis (Figur 1 e 2). Nest pesquis, foi observd um longevidde superior do grupo B, rtos trtdos com plsm imune, in ntur, profilticmente. Os demis trtmentos tiverm mortlidde de 1% dos nimis, ssim como o grupo controle, diferente do grupo B, onde tx de mortlidde foi de 34,4%. Cbe ressltr, que os rtos sobreviventes presentvm o prsito circulnte o finl do experimento. Segundo pesquisdores, o processo de congelmento do plsm snguíneo não lter os ftores de cogulção, proteíns plsmátics e imunoglobulins (Hunt e Moore, 199). Porém, foi evidente neste estudo, qundo comprmos os grupos, mior sobrevid dos rtos onde se utilizou terpi profilátic, in ntur. Então, credit-se que lgum elemento do sistem imunológico sej perdido no processo de criopreservção. Não sberímos explicr porque o trtmento curtivo com o plsm in ntur não teve o mesmo efeito, porém supõe-se que como prsitemi já estv presente no momento d terpi neste grupo (D), o hospedeiro teve um menor tempo pr orgnizr um respost imune frente o gente, trvés dos nticorpos trnsferidos pssivmente pelo plsm. Este experimento foi motivdo pelos resultdos obtidos por Hunt et l. (199) e Wechsler e Kongshvn (1984) que utilizrm plsm imune de rtos curdos d infecção por T. musculi n terpi deste flgeldo em roedores com elevdos picos de prsitemi. Os utores observrm que o protocolo testdo controlou infecção e curou os roedores. O mesmo sucesso não se obteve neste estudo, no entnto, verificou-se que o plsm in ntur de coelhos com prsitemi por T. evnsi influenciou longevidde e tx de mortlidde destes roedores infectdos experimentlmente. Coelhos são resistentes infecção por T. evnsi. Estes mnifestm prsitemi e sinis clínicos, porém conseguem utocur (Uche et l., 1992; D Silv et l., 28). Neste trblho, testou-se pssgem de elementos imunológicos presentes nos coelhos que pudessem surtir o mesmo efeito nos rtos infectdos. Est hipótese foi confirmd em prte, pois com o plsm imune não congeldo, conseguiu-se prolongr vid dos nimis e reduzir tx de mortlidde durnte o período experimentl, no entnto não ocorreu eliminção d prsitemi. CONCLUSÃO O plsm imune in ntur de coelhos tem efeito sobre o período de sobrevivênci de rtos infectdos experimentlmente com T. evnsi qundo utilizdo profilticmente. Provvelmente com o congelmento de mostrs de plsm imune ocorre perd ou intivção de lguns elementos envolvidos n imunidde contr o T. evnsi. REFERÊNCIAS Brndão LP, Lrsson MHMA, Birgel EH, Hgiwr MK, Ventur RM, Teixeir MMG (22). Infecção nturl por Trypnosom evnsi em cães relto de cso. Clínic Veterinári, 36: Colpo CB, Monteiro SG, Stinki DR, Colpo ETB, Henriques GB (2). Infecção nturl por Trypnosom evnsi em cães. Ciênci Rurl, 3: D Silv AS, Doyle RL, Monteiro SG (26). Método de contenção e confecção de esfregço snguíneo pr pesquis de hemoprsits em rtos e cmundongos. Revist d Fculdde de Zootecni, Veterinári e Agronomi, 13(2): D Silv AS, Cost MM, Doyle RL, Lopes STA, Monteiro SG (28). Infecção experimentl por Trypnosom evnsi em coelhos. Ciênci Animl Brsileir, 9(2): D Silv AS, Wolkmer P, Gressler LT, Otto MA, Bess F, Tvres KCS, Znette RA, Monteiro SG (29). Ptogenicidde do isoldo de Trypnosom evnsi em rtos inoculdos com o prsito em sngue in ntur e criopreservdo. Ciênci Rurl, Prelo. Doyle RL, D Silv AS, Monteiro SG, Snturio JM, Grç DL (27). Eficáci de medicmentos no controle d infecção experimentl por Trypnosom evnsi em rtos. Act Scientie Veterinrie, (1): Frnciscto C, Lopes STA, Teixeir MMG, Monteiro SG, Wolkmer P, Grmtz BC, Pim CB (27). Cão nturlmente infectdo por Trypnosom evnsi em Snt Mri, RS, Brsil. Ciênci Rurl, 37(1):

5 Act Veterinri Brsilic, v.4, n.3, p , 21 Frnke CR, Greiner M, Mehlitz D (1994). Investigtion on nturlly ocurring T. evnsi infections in horses, cttle, dogs nd cpybrs (Hydrocheris hydrocheris) in Pntnl de Poconé (Mto Grosso, Brzil). Act Tropic, 8(1): Hunt E, Moore JS (199). Use of blood nd blood products. Veterinry Clinics of North Americ: Food Animl Prctice, 6 (1): Joshi PP, Shegokr VR, Powr RM, Herder S, Ktti R, Slkr HR, Dni VS, Bhrgv A, Jnnin J, Truc P (2). Humn Trypnosomosis cused by Trypnosom evnsi in Indi: the first cse report. The Americn Journl of Tropicl Medicine nd Hygiene, 73(3): Luc RR, Alexndre SR, Mrques T, Souz NL, Mousse JLB, Neves (1996). Mnul Pr Técnicos Em Bioterismo. São Pulo: Winner Grph, 29. Lun ZR, Desser SS (199). Is the brod rnge of hosts nd geogrphicl distribuition of Trypnosom evnsi ttributble to the loss of mxicircle kinetoplst DNA? Prsitology Tody, 11(1): Nunes VLB, Oshiro ET (199). Trypnosom evnsi in the coti from the Pntnl region of Mto Grosso do Sul Stte, Brzil. Trnsctions of the Royl Society of Tropicl Medicine nd Hygiene, 84(): 692. Nunes VLB, Oshiro ET, Dorvl MEC, Grci LAM, Silv AAP, Bogliolo AR (1993). Investigção epidemiológic sobre Trypnosom (Trypnozoon) evnsi no pntnl sulmtogrossense. Estudo de reservtórios. Revist Brsileir de Prsitologi Veterinári, 2(1): Oliveir TCG, Meneguin JM, Pereir EA (1989). Comportmento do Trypnosom evnsi (T. equinum) em nimis de lbortório. Arquivos Brsileiros de Veterinári e Zootecni, 41(4): Queiroz AO, Smnt APL Xvier CC, Jnsen AM (21). Specific ntibody levels nd ntigen recognition of wistr rts inoculted with distincts isoltes of Trypnosom evnsi. Memóris do Instituto Oswldo Cruz, 96(7): Silv RAMS, Brros ATM, Herrer HM (1996). Trypnosomosis outbreks due to Trypnosom evnsi in the Pntnl, Brzil. A preliminry pproch on risk fctors. Revue d'élevge et de Médecine Vétérinire des pys Tropicux, 48(4): Silv RAMS, Seidl A, Rmirez L, Dávil AMR (2). Trypnosom evnsi e Trypnosom vivx: Biologi, Dignóstico e controle. Corumbá: Embrp Pntnl, 141. Silv FAZ, Azevedo CAV (22). Versão do progrm computcionl Assistt pr o sistem opercionl windows. Revist Brsileir de Produtos Agroindustriis, 4: Stevens JR, Nunes VLB, Lnhm SM, Oshiro ET (1989). Isoenzyme chrcteriztion of Trypnosom evnsi isolted from cpybrs nd dogs in Brzil. Act Tropic, 46(2): Uche UE, Jones TW (1992). Pthology of experimentl Trypnosom evnsi infection in rbbits. Journl Comprtive Pthology, 16(3): Wechsler DS, Kongshvn PAL (1984). Cure of Trypnosome musculi infection by het-lbile ctivity in immune plsm. Infection nd Immunity, 44(3): Znette RA, D Silv AS, Cost MM, Monteiro SG, Snturio JM, Lopes STA (28). Ocorrênci de Trypnosom evnsi em eqüinos no município de Cruz Alt - RS, Brsil. Ciênci Rurl, 38():