É o exame hematológico mais solicitado para se avaliar as principais alterações eritrocitárias, leucocitárias e das plaquetas.

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1 1/12 1. INTRODUÇÃO / FINALIDADE DO MÉTODO É o exame hematológico mais solicitado para se avaliar as principais alterações eritrocitárias, leucocitárias e das plaquetas. 2. NOME DO TESTE E SINONÍMIAS Hemograma, Eritrograma, Leucograma, Plaquetas, Hematócrito, Hemoglobina, Contagem global e diferencial de leucócitos. 3. ABRANGÊNCIA Setor de Hematologia. 4. PRINCÍPIO DO MÉTODO A contagem de células por impedância foi primeiramente descrita por Wallace Coulter em 1956, depende do fato dos glóbulos vermelhos serem pobres condutores de eletricidade, enquanto certos diluentes são bons condutores; essa diferença forma a base desse sistema de contagem. Dois eletrodos de platina mergulhados separadamente por um orifício de 60 a 100 micrometros de diâmetro, sendo um no interior do equipamento e outro no líquido contendo as partículas a serem contadas, permite que cada partícula que passe pelo orifício desloque o volume de líquido, modificando de forma mensurável a impedância proporcional ao volume deslocado. Esses pulsos são amplificados e contados num volume de sangue predeterminado. Por esse método são contados eritrócitos, e em diferente diluição após lise das hemácias contam-se os leucócitos e as plaquetas. O ajuste do aparelho permite sensibilidade para cada tamanho de partícula, sendo fundamental regular a intensidade da corrente e o "limiar" de detecção para o tamanho de partícula a ser contada. O registro simultâneo da amplitude (volume da partícula) e do número de partículas contadas fornece o volume corpuscular médio (VCM) que, multiplicado pelo número de eritrócitos, fornece o hematócrito. A determinação da hemoglobina por espectrofotometria fornece, por divisão eletrônica, a hemoglobina corpuscular média (HCM) e a concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM). Portanto, esses equipamentos fornecem a leucometria, número de hemácias e plaquetas, VCM, Hematócrito, Hemoglobina, HCM e CHCM. A propriedade de dispersão de luz (Light Scattering) na qual glóbulos vermelhos e outras células do sangue permitem a quantificação por detectores eletro-óticos e varia conforme a área de superfície celular e, portanto, seu volume, faz com que essa luz seja captada por fotomultiplicadores ou fotodiodos convertendo-se em impulsos elétricos. As análises para diferencial de leucometria dependem do volume e de outras características físicas das células e também da ligação de corantes a grânulos ou atividade de enzimas celulares, como a peroxidase. A tecnologia utilizada em estudo para caracterizar as células inclui dispersão da luz, absorbância e impedância medidas com baixa ou alta frequência de corrente eletromagnética.

2 2/12 5. APLICAÇÃO CLÍNICA 5.1 Hematócrito Valores Elevados: choque, desidratação, diarréia, doença de Addison, eclampsia, eritrocitose, hemoconcentração, hemorragia, pancreatite, policitemia, queimaduras. Valores Reduzidos: Anemia, cirrose, descompensação cardíaca, esteatorréia idiopática, fibrose cística, fígado gorduroso, gravidez, hemorragia, edemas sistêmicos, hipoplasia ou aplasia da medula óssea, hipertireoidismo, hipotireoidismo, insuficiência cardíaca congestiva, leucemia, obstrução intestinal, pancreatite hemorrágica, pneumonia, queimaduras, hemólise intravascular, reações hemolíticas à produtos químicos, drogas ou próteses e sobrecarga de líquido. 5.2 Hemoglobina Valores Elevados: Elevadas altitudes, desidratação, diarréia, doença pulmonar obstrutiva crônica, eritrocitose, hemoconcentração, hemorragia, insuficiência cardíaca congestiva, obstrução intestinal, policitemia vera, púrpura trombocitopênica e queimaduras. Valores Reduzidos: Anemia ferropriva, cirrose, doença de Andersen, doença de Hodgkin, embolia gordurosa, esteatorréia idiopática, fibrose cística, fígado gorduroso, gravidez, hemólise, hemorragia, hipertireoidismo, hipervitaminose A, hipotireoidismo, leucemia, linfoma, lúpus eritematoso sistêmico, reação hemolítica à produtos químicos ou drogas ou próteses, retenção de líquido, sarcoidose, sobrecarga intravenosa, transfusão de sangue incompatível. 5.3 Plaquetas Valores Elevados: Anemia (hemolítica, ferropriva, pós-menorrágica, falciforme) artrite reumatóide, asfixia, asplenia, carcinoma, cardiopatia, cirrose, cirurgia, crioglobulinemia, doença do colágeno, doença mieloproliferativa, exercícios, fraturas, gravidez, hemorragia aguda, infecção aguda,inflamação, leucemia, período pós-operatório, período pós-parto, policitemia vera, pós-esplenectomia, pseudotrombocitose, reticulocitose, trombocitopenia idiopática e tuberculose. Valores Reduzidos: Anemia (aplástica, megaloblástica, perniciosa), aplasia hipoplasia da medula óssea, carcinoma metastático, cirrose, coagulação intravascular disseminada, distúrbios auto imunes, doença hemolítica do recém-nascido, doença linfoproliferativa, doenças do colágeno, febre tifóide, hiperesclenismo, hipoplasia megacariocítica, infecções agudas, irradiação, leucemias, menstruação, mielofibrose, mieloma múltiplo, púrpura trombocitopênica idiopática, queimaduras graves, septicemia, síndrome de Bernard-Soulier, síndrome de desfibrilação, síndrome de Wiskott-Aldrish e transfusão sanguínea incompatível. 5.4 Leucócitos

3 3/12 Valores elevados: Abscesso, acidose láctica, amebíase, amidalite, ancilostomíase, anemia hemolítica adquirida, anorexia, apendicite, bronquite, câncer de cólon, carbúnculo, cetoacidose, choque, cirrose, citomegalovírus, cólera, crises convulsivas, deficiência de G-6-PD, difteria, desproteinemia, diverticulose, doença de Hodgkin, eclampsia, endocardite, eritroblastose fetal, estresse emocional, estrongiloidíase, exercício, exposição à luz ultravioleta, febre amarela, dengue, febre reumática, fibrose, fígado gorduroso, gangrena, glomerolonefrite, gota, gravidez, hemólise, hemorragia, hepatite alcoólica, enfarto do miocárdio, infecções, intoxicação (artrópodes, produtos químicos, metais, veneno), irradiação ultravioleta, leucemia, leucocitose, linfoma, lúpus eritematoso sistêmico, meningite, menstruação, mielofibrose idiopática, miocardite, mononucleose infecciosa, necrose tumoral, obstrução intestinal, pancreatite, peritonite, pneumonia, policitemia vera, psoríase, queimaduras, reação transfusional, rejeição de transplante cardíaco, rubéola, sepsi, síndrome de Cushing, síndrome do choque tóxico, taquicardia paroxística, traumatismo, tuberculose, úlceras, varicela, varíola e vírus do Epstein-Barr. Valores diminuídos: AIDS, agranulocitose, alcoolismo, amiloidose, anemia (aplásica perniciosa), choque anafilático, cirrose, dengue, doença de Hodgkin, estrongilodíase, faringite, febre reumática, febre tifóide, hepatite, hiperesplenismo, hipotemia, infecção, intoxicação por arsênico, intoxicação por substâncias químicas, leishmaniose, leucemia, leucopenia, linfoma, lúpus eritrematoso disseminado, mielofibrose idiopatica, mononucleose, pneumonia por Pneumocystis, quimioterapia, radioterapia, rubéola, sarampo, sepse neonatal, toxoplasmose, traumatismo renal, tuberculose. Aumento do número de neutrófilos: Acidose diabética, alergia, anemia, amigdalite, anemia perniciosa, ansiedade, apendicite, artrite reumatóide, asma, câncer, cetoacidose, colecistite, cólera, colite, deficiência de G- 6-PD, dermatite, difteria, eclâmpsia, empiema, endocardite, enfisema, estresse pós-operatório, febre reumática, gangrena, gota, hemorragia, infarto do miocárdio, infarto pulmonar, infecções agudas, inflamação, intoxicação (por monóxido de carbono, chumbo, mercúrio, arsênico), leucemia, leucocitose, linfoma, medo, meningite, osteomielite, otite média, pancreatite, pânico, parto, peritonite, pielonefrite, pneumonia, policitemia vera, queimaduras, reação transfusional, salpingite, septcemia, síndrome de Culshing, tabagismo, tifo, tireoidite, varicela e varíola. Aumento do número de eosinófilos: Alergias, anemia falciforme, anemia perniciosa, artrite reumatóide, asma, brucelose, câncer, colite ulcerativa, dermatite, diverticulite, doença de Addison, doença de Hodgkin, doença renal, escarlatina, esplenectomia, flebite, gangrena, Hanseníase, leucemia (granulocítica crônica), leucocitose, malária, parasitoses, policitemia vera, psoríase, radioterapia, rinite, sarcoidose, síndrome de Loffler, síndrome de Sjogerm, trombloflebite e tuberculose. Aumento no número de basófilos: Anemia com corpúsculos de Heinz, colite ulcerativa, doença de Hodgkin, doença do soro, esplenectomia, hipotireoidismo, irradiação, leucemia mielocítica crônica, leucocitose, mielofibrose, nefrose, policitemia vera, reação alérgica a alimentos, drogas, inalantes, sinusite, urticária, varicela, varíola. Aumento no número de linfócitos: Brucelose, citomegalovírus, coqueluche, endocardite, hepatite, leucemia linfocítica, mononucleose infecciosa, sífilis, síndrome Huller, toxoplasmose e xeroftalmia.

4 4/12 Aumento no número de monócitos: Artrite reumatóide, brucelose, colite ulcerativa, intoxicação por fósforo, intoxicação por dissulfeto de carbono, intoxicacão por tetraidrocloreto, leucemia, leucocitose, lúpus eritrematoso sistêmico, mieloma múltiplo, salmonelose, sífilis, tuberculose e vírus de Epstein-Barr. Diminuição no número de neutrófilos: Agranulocitose, anemia aplásica, anemia ferropriva, anemia perniciosa, carcinoma, caxumba, choque anafilático, cirrose, deficiência de acido fólico, deficiência de vitamina B12, dengue, febre paratifóide, febre tifóide, hemoglobinúria paroxística noturna, hepatite infecciosa, hiperesplenismo, infecções, malária, mielofibrose, mieloma, mononucleose infecciosa, pneumonia, quimioterapia, radioterapia, rubéola, sarampo, sarcoma, septicemia, síndrome de Chediak-Higash. Diminuição no número de eosinófilos: Acromegalia, anemia aplásica, eclampsia, esquistossomose, estresse, hiperesplenismo, infecções, insuficiência cardíaca congestiva, lúpus eritrematoso sistêmico, mononucleose infecciosa e síndrome de Cushing. Diminuição no número de basófilos: Anafilaxia, estresse, gravidez, hipertireoidismo, infecção aguda, ovulação, radioterapia e síndrome de Cushing. Diminuição no número de linfócitos: Anemia aplásica, deficiência de imunoglobulinas, doença de Hodgkin, insuficiência renal, leucemia (granulocítica crônica, monocítica), linforsarcoma, lúpus eritrematoso sistêmico, síndrome de Cushing e uremia. 5.5 Reticulócitos São hemácias jovens, ricas em material ribonucléico do RNA ribossômico. Têm uma meia vida de 24 horas. Valores aumentados: Basicamente em situações em que haja perdas de hemácias (hemólise intravascular disseminada, sangramentos profusos agudos ou crônicos), em disfunções que causam aumento da eritropoietina (como atletas que fazem uso deste hormônio (doping) para aumentarem sua capacidade respiratória), ou policitemias. Valores diminuídos: Os valores baixos revelam uma medula mal funcionante ou não estimulada. Como mau funcionamento da medula, temos a aplasia medular e como falta de estímulo, a insuficiência renal, uma vez que a eritropoietina é produzida pelas supra-renais e o seu não funcionamento encerra a produção do hormônio. 6. AMOSTRA a) Tipo de amostra: Sangue total anticoagulado com EDTA. b) Quantidade mínima de amostra necessária: 1,0 ml.

5 5/12 c) Restrições e critérios para rejeição de amostras: Amostras contendo micro ou macrocoágulos e colhidas sem e/ou com outro anticoagulante são inapropriadas para análise. d) Condições de acondicionamento das amostras: Se conservados em geladeira, os testes deverão ser concluídos em 48 horas. Se conservados em temperatura ambiente, os testes devem ser feitos num prazo de 8 horas após a coleta. e) Procedimentos de tratamento ou pré-tratamento da amostra: As amostras deverão ser homogeneizadas antes de serem colocadas no aparelho. f) Preparo do paciente: Vide o PO Orientação de Preparo e Coleta de Amostras Biológicas (cód. PO-LB-CO-005). g) Transporte da amostra: Vide o PO Manuseio de Transporte de Amostras Biológicas (cód. PO-LB-CO-006). 7. BIOSSEGURANÇA Para esta atividade é necessário a utilização de luvas, jaleco, touca e máscara, conforme descrito no PO de Orientações de Biossegurança (cód. PO-LB-CQ-001) em vigor. 8. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS a) Equipamentos: Analisador Advia (120, 2120 e 2120i); Microscópio óptico b) Materiais: Lâminas de vidro; Lâmina extensora; Estante para tubos; Gaze; Papel toalha; Gral de porcelana; Pistilo de porcelana; Funil de vidro;

6 6/12 Algodão; Almotolia com água destilada; Óleo de imersão; c) Reagentes: Corantes panóticos; Corante Wright eosina/azul de metileno; 9. CALIBRAÇÃO Proceder conforme POP para operação dos. 10. CONTROLE DE QUALIDADE a) Controle de Qualidade Interno: Conforme plano da qualidade do setor. b) Controle de Qualidade Externo: Conforme plano da qualidade do setor. 11. PROCEDIMENTO TÉCNICO Após preparar o equipamento de acordo com o procedimento de calibração dos Advia 120, 2120 e 2120i, realizarem os exames de acordo com o descrito abaixo Análises das amostras no módulo aberto Clicar em ID MANUAL Selecionar os parâmetros (CBC, CBC/DIFF, CBC/DIFF/RETIC, CBC/RETIC ou RETIC), digitar o código (OS) da amostra, apertar ENTER ou clicar em OK Posicionar a amostra no modo manual fechado ou manual aberto na frente do equipamento. No manual fechado, introduzir o tubo invertido (tampa para baixo) no copo à frente do Advia e pressionar firme. A luz verde irá piscar até a completa aspiração da amostra. Quando esta se apagar retirar o tubo. No modo manual aberto, destampar o tubo e introduzir a probe plástica até a amostra e pressionar a barra atrás do tubo. Aguardar a luz verde parar de piscar e retirar o tubo A análise da amostra só deverá ser feita após a homogeneização desta Análises das amostras no módulo fechado automático Colocar as amostras nas racks depois de homogeneizá-las e inseri-las no aparelho. Apertar o botão laranja situado no lado direito do equipamento. Aguardar a análise das amostras.

7 7/ Preparação da distensão sanguínea Identificar na base da lâmina de vidro com o número da OS e/ou iniciais do paciente Homogeneizar a amostra e colocar uma gota de sangue em uma das extremidades, e com uma lâmina extensora fazer distensão sanguínea Deixar a lâmina secar à temperatura ambiente Procedimento de coloração da lâmina e leitura da distensão sanguínea com o corante panótico Submergir a lâmina no corante Instant Prov I. Cronometrar o tempo de 5 segundos. Após este tempo, retirar a lâmina do Instant Prov I e deixar o corante escorrer durante 5 segundos para dentro da própria cuba Após o tempo de escorrimento de 5 segundos no Instant Prov I, submergir a lâmina no Instant Prov II. Seguir o mesmo procedimento feito para o Instant Prov I. Repetir o mesmo procedimento no Instant Prov III Após o tempo de coloração de 5 segundos, retirar a lâmina do Instant Prov III e deixar escorrer durante 5 segundos. Após este tempo lavar a lâmina em água corrente abundante e demoradamente Esperar secar as lâminas e prosseguir com a microscopia Procedimento de coloração da lâmina e leitura da distensão sanguínea com o corante Wright Cobrir a lâmina completamente com o corante e esperar 3 minutos Gotejar água destilada contida na almotolia sobre a lâmina com o corante e marcar de minutos Desprezar o corante que estava sobre a lâmina e lavar com água corrente, retirando o depósito do corante no verso da lâmina com uma esponja Esperar secar e proceder leitura a) Limites de detecção/sensibilidade: tabela 1 WBC 0. to 400 x 10 3 /µl RBC 0.0 to 7.0 x 10 6 /µl PLT 5.0 to 3500 x 10 3 /µl HB 0.0 to 22.5 g/dl Retic 0.2 to 24.5% b) Linearidade:

8 8/12 WBC: de 0, a 400 x / microlitros RBC: 0,0 a 7 x / microlitros Plaquetas: 5,0 a 3500 x / microlitros Hemoglobina: 0 a 22,5 g/dl Reticulócitos: 0,2 a 24,5 % c) Intervalo reportável (CRR) Não se aplica. Diluir a amostra até obter resultado dentro da linearidade. A diluição deve ser feita com água destilada e repetir a medição. O valor encontrado deve ser multiplicado pelo fator utilizado. d) Valores críticos: tabela 2 WBC RBC PLT HB <2000 ou > /µl <2,5X 10 6 /µl < ou > /µL <6,6 ou > 19,9 g/dl e) Especificidade Não se aplica f) Carryover Não se aplica. 12. CÁLCULOS 12.1 Os eritroblastos presentes na lâmina deverão ser anotados fora da contagem diferencial. Para correção dos leucócitos totais usar a fórmula: Número de leucócitos = Número total de leucócitos do aparelho x número de eritroblastos encontrados

9 9/ REGISTROS DOS RESULTADOS Os resultados são interfaceados através do sistema CENTRALINK, PO Software ADVIA Centralink (cód. PO-LB-CT- 004). 14. PROCEDIMENTOS EM CASO DE RESULTADOS ANORMAIS Se o resultado do hemograma apresentar parâmetros com valores: monócitos > 15%; neutrófilos >80%e < 20%; linfócitos > 60% e < 15%;, VCM < 77 ou > 100 e plaquetas <130 ou > 600, eosinófilos > 25%, RDW > 15,5, HGB < 10 e HCT < 32 %, deve-se proceder a confirmação microscópica. Na presença de plaquetopenia, confirmar pelo método de Fônio (Vide POP), e se necessário corrigir o valor pela confirmação microscópica. São considerados valores críticos: a) Hemoglobina < 5,0 g /dl b) Plaquetas < / UL c) Leucócitos > /UL d) Leucócitos < 1.000/UL e) Presença de blastos na distensão sanguínea f) Lâminas sugestivas de mielodisplasias g) Lâminas com hematozoários h) Presença de células sugestivas de linfoma i) Qualquer outra anormalidade que requeira opinião especializada Diante de resultados críticos, deve-se proceder a repetição da análise. Caso o resultado mostre-se novamente crítico, pode-se usar o recurso do Consultório (SMART) e verificar se há alguma informação que justifique tal resultado. Caso não exista essa informação, e se faça necessário deverá ser solicitada nova amostra para confirmação. Deve-se entrar em contato com o médico e/ou paciente, realizar e registrar no formulário Programa de Medicina Laboratorial Baseada em Evidências (cód. LAB-121-VR01). 15. VALORES DE REFERÊNCIA 15.1 Eritrograma / Idade RBC 10 6 U/L HGBg/dL HCT % MCH pg MCHC % MCV fl RDW WBC 10 6 U/L Homens Mulheres R.nascidos meses

10 10/12 até 1 ano anos anos Leucograma / Idade neutrofilos eosinófilos basófilos linfócitos monócitos10 3 U/L 10 3 U/L 10 3 U/L 10 3 U/L 10 3 U/L Adultos % 1-6% inf. 1% 20-45% 2-10% R. nascidos até 3 dias até 7 dias até 15 dias até 1 ano até 4 anos até 6 anos até 10 anos Plaquetas PLT Plaquetas 10 3 U/L MPV Volume médio 10 3 U/L PCT Plaquetocrito PDW Variação do diametro Adultos ,8-11,0 0,158-0,425 12,0-16,8 Crianças ,8-11,0 0,158-0,425 12,0-16, Reticulócitos RETIC Reticulócitos (%) Adultos 0,5 a 2,0 Crianças 2,5 a 15,0%

11 11/12 WINTROBE- Hematologia Clínica volume1, 1º edição.brasileira Ed. Manole Ltda. 16. INTERFERÊNCIAS Amostra coagulada pode diminuir os valores de hematócrito, hemoglobina, plaquetas etc. Drogas que interferem: Alopurinol, anestésicos, barbitúricos, bitartarato de adrenalina, borato de adrenalina, cloridrato de adrenalina, dietil-carbamazina, eritromicina, esteróides, sulfato de atropina, sulfato de estreptomicina, sulfonamidas, metildopa, gentamicina, anticoncepcionais orais, cloridrato de adrenalina. 17. DOCUMENTOS DE REFERÊNCIA a) Bibliografia WINTROBE- Hematologia Clínica volume1, 1º edição.brasileira Ed. Manole Ltda. b) Documentos Complementares Manual do Usuário do Equipamento Advia 120, 2120 e 2120i Plano da qualidade do setor da Hematologia (cód. PQ-LB-HM-001) Orientação de Preparo e Coleta de Amostras Biológicas (cód. PO-LB-CO-005). PO Manuseio de Transporte de Amostras Biológicas (cód. PO-LB-CO-006). PO de Orientações de Biossegurança (cód. PO-LB-CQ-001) PO Software ADVIA Centralink (cód. PO-LB-CT-004). 18. HISTÓRICO DAS REVISÕES Pg. Natureza da Revisão Data da Revisão Versão Responsáveis 1-12 Procedimento adequado para atender ao item 5.3 da Norma PALC, versão /08/ Procedimento adequado para atender ao item 5.3 da Norma PALC, versão 2013 Após Pré auditoria. 27/11/ Procedimento revisado e sem alterações.

12 12/ REGISTRO DE TREINAMENTO DATA NOME COMPLETO ASSINATURA