INIBIÇÃO BACTERIANA DO EXTRATO FLUIDO DE Stryphnodendron adstringens (MART.) COVILLE (BARBATIMÃO) SOBRE CEPAS SELECIONADAS de Staphylococcus aureus

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1 INIBIÇÃO BACTERIANA DO EXTRATO FLUIDO DE Stryphnodendron adstringens (MART.) COVILLE (BARBATIMÃO) SOBRE CEPAS SELECIONADAS de Staphylococcus aureus INHIBIT BACTERIAL FLUID EXTRACT Stryphnodendron adstringens (MART.) COVILLE (BARBATIMÃO) ABOUT STRAINS SELECTED Staphylococcus aureus Leonardo Alves Vieira Soares 1, Sabrina Bartz Pereira 2. Como citar: Soares AVS, Pereira SB. Inibição bacteriana do extrato fluido de Stryphnodendron adstringens (mart.) coville (barbatimão) sobre cepas selecionadas de Staphylococcus aureus. Rev. Cient. Sena Aires. 2016; 5(1): RESUMO O Stapyhlococcus aureus é uma bactéria patogênica de extrema importância por apresentar ampla variação de infecções e por ser um membro normal da microbiota do corpo humano. A infecção estafilococica, além disso podem manifestar resistência aos antimicrobianos de escolha disponíveis na terapêutica. Esta pesquisa teve como objetivo analisar a atividade antibacteriana in vitro do Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville (Barbatimão). Através deste estudo Foram desenvolvidos discos na Faculdade de Ciências e Educação Sena Aires, contendo solução aquosa de extrato fluido frente ao micro-organismo padrão estabilizado de S. aureus em meio de cultura Mueller- hinton com abordagem quanti-qualitativa segundo a metodologia de difusão do disco segundo (Kirby-bauer). Ao termino desta pesquisa, concluiu-se que os discos do barbatimão apresentaram halos de inibição com valores próximos aos antibióticos do teste de suscetibilidade para micro-organismos gram-positivos. Descritores: Atividade Antibacteriana do barbatimão; Fitoterapia; Procedimento em Microbiologia. ABSTRACT The Stapyhlococcus aureus is a pathogenic bacterium is extremely important to present wide range of infections and be a normal member of the human body microbiota. Staphylococcal infection also can manifest resistance to antimicrobial of choice available in therapy. This research aimed to analyze the in vitro antibacterial activity of Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville (Barbatimão). Through this study were developed discs at the Faculty of Science and Education Sena Aires, containing aqueous fluid extract against the micro - organism stabilized pattern of S. aureus in the middle of Mueller hinton culture with quantitative and qualitative approach in disseminating methodology second disc ( Kirby- bauer ). At the end of this study, it was concluded that barbatimão discs showed inhibition halos with values close to susceptibility testing of antibiotics in gram-positive microorganisms. Descriptors: Antibacterial activity of barbatimão; Phytotherapy; Microbiology procedure. ORIGINAL Rev. Cient. Sena Aires Jan-Jun; 5(1):

2 INTRODUÇÃO O Staphylococcus aureus é uma bactéria do grupo cocos gram-positivo que é capaz de provocar uma variação de doenças e infecções, apesar de ser um membro normal da microbiota do corpo humano sua importância clinica constata cada vez mais o crescimento por infecções hospitalares e resistência a antimicrobianos sendo comum afetar pessoas com infecções de pele, infecções respiratórias, bacteremia, Sepse, infecções de tecidos moles, impetigo, Síndrome do choque tóxico, Endocardites Infecções do tecido celular subcutâneo e cutâneo, intoxicação alimentar, síndrome da pele escaldada. 1 O diagnostico das infecções é feito pelo isolamento dos processos infecciosos em meio de cultura adequada e exames bacterioscópicos de esfregaços corados pelo método de Gram. no arranjo bacteriano do microrganismo pode ser observado formas em cachos de uva. O Tratamento e controle das infecções por S.aureus deve ser precedido da escolha com base no resultado dos testes de suscetibilidade. (ANTIBIOGRAMA). 2 O antibacteriano considerado como droga de escolha para o tratamento das infecções por Staphylococcus aureus, é a vancomicina, podendo apresentar resistência a meticiclina e outras penicilinas semi-sintéticas. 2 O Brasil oferece uma ampla biodiversidade e as plantas medicinais são utilizadas há séculos na historia da Medicina. De acordo com a organização mundial de saúde (OMS) estima-se que 65 a 80% das populações em desenvolvimento utilizam plantas medicinais para alguma finalidade terapêutica. A utilização de plantas medicinais é uma das formas mais antigas e adotadas pela humanidade, devido ao fato de apresentar alto teor de propriedades fito farmacológicas, o que de fato justifica sua utilização no tratamento de várias doenças. 3 Inicialmente as pesquisas iniciaram através de investigações obtidas principalmente através estudos etnofarmacobotânicos pelos índios, por ser o grande conhecedor de ervas e plantas medicinais no tratamento de doenças. Outro aspecto importante é a quantidade de plantas existentes no planeta de mil espécies. Somente aproximadamente 5% têm sido estudadas fita quimicamente. 4 O comércio da casca do barbatimão e outras plantas medicinais Segundo dados Do IBAMA, entre os anos de 1994 a 1997 apresentaram exportação de quase 4,5 mil toneladas para Alemanha, Austrália, Estados Unidos, Japão, Coréia entre outros. Sendo a maior fornecedora a floresta amazônica, Mata Atlântida e Cerrado. Nesta época foi demonstrado ser um comércio lucrativo, portanto deve-se ter melhor manejo no extrativismo para evitar a extinção de várias espécies. 5 A implantação da fitoterapia na área médica mostra ser um recurso riscobenefício eficaz e seguro no tratamento de várias doenças antimicrobianas sendo considerado importante instrumento da assistência farmacêutica. A investigação e caracterização química e farmacológica de Plantas Medicinais são importantes na obtenção de novas moléculas com ação farmacológica, podendo ter várias aplicações terapêuticas. 5 O Stryphnondendron adstringens (Mart.) Coville, é popularmente conhecido como barbatimão do cerrado, casca da virgindade pertence à família leguminosae-mimosoidae e crescem com maior freqüência nas regiões do cerrado do Brasil. Segundo dados obtidos no Ministério da Saúde têm sido utilizados em infecções uterinas, infecções urinárias lesões cutâneas, feridas ulcerosas, oleosidade da pele, já o uso interno tem sido relatado no tratamento de hemorragias, infecções respiratórias, complicações pulmonares entre outras. O S. adstringens, divididas por planta inteira, ramos, frutos, semente. 6 Sendo que a parte utilizada para fins medicinais são as cascas caulinares secas, por apresentarem alto teor de taninos que são substâncias adstringentes Rev. Cient. Sena Aires Jan-Jun; 5(1):

3 e hemostáticas presentes em plantas e apresentam atividade antibacteriana o que justifica sua utilização, na terapia de algumas enfermidades. 7 Na manipulação de fitoterápicos obtemos a consciência de que os estudos de plantas medicinais envolvem várias equipes e desta forma conta inicialmente com a botânica, onde ocorre a identificação e classificação da espécie e posteriormente é relacionado com as divisões da farmacologia das plantas medicinais utilizadas em usos populares e tradicionais em ampla modalidade, sempre em beneficio ao paciente. 8 Indústrias produtoras de fitoterápicos terão que validar seus métodos analíticos, matéria prima vegetal quanto para o produto vegetal, essa validação deve seguir a regulamentação descrita na ANVISA, RE nº 899, de 29 de maio de O parâmetro utilizado é a quantidade denominada de principio ativo, ou seja, a produtividade é medida multiplicando a quantidade de material vegetal produzido pelo teor de principio ativo presente. A quantidade de principio ativo obtido por unidade de área. O teor de fato varia de acordo com a planta. Retomando o conceito de planta medicinal é todo vegetal que contem um ou mais em seus órgãos de substâncias que podem ser utilizados na terapêutica em variadas forma farmacêuticas sólidas, semi-sólidas e líquidas. 8 O antibacteriano considerado como droga de escolha para o tratamento das infecções por Staphylococcus aureus, é a vancomicina, podendo apresentar resistência a meticiclina e outras penicilinas semi-sintéticas. 9 Levando em consideração as infecções causadas por S.aureus, a resistência bacteriana causada pelos mesmos e a necessidade de estudos que proporcionem novos farmácos antibacterianos, o presente trabalho tem como objetivo avaliar a atividade antibacteriana do S.adstringens (Mart.) Coville barbatimão através dos discos de extrato fluido desenvolvidos na Faculdade de Ciências e Educação Sena Aires sobre espécies de S. aureus em cultura de Mueller-hinton. MÉTODO Trata-se de um estudo descritivo informativo com base em pesquisa, sendo coletados todos os dados e informações na revisão da literatura nos períodos de em artigos científicos, livros, bula, normas do fabricante, tabela padrão para interpretação de halos de inibição. Com intuito de manuseio seguro com o micro-organismo e demonstrando qualidade de esterilidade e atendendo todas as normas de biossegurança. Esta pesquisa iniciou-se após a autorização do termo de concordância em disponibilizar os laboratórios de Química, Farmacotécnica, Microscopia, Pesagem e CME da instituição (FACESA), Faculdade de Ciências e Educação Sena Aires, pelo período de execução no mês de março e abril de Foram selecionados micro-organismo padrão viável de Staphylococcus aureus NEWP Validade julho de 2016, Cada disco foi hidratado em tubo para transporte de amostra contendo 3ml de caldo TSB meio adequado de acordo com as normas de revitalização da cepa selecionada, Logo após a difusão do micro-organismo foi incubada durante 2 horas e 30 minutos a 35ºC até a turvação adequada seguindo a escala 0,5 de McFarland. Com auxilio de uma alça calibrada de 100 microlitros foram inoculadas duas placas no meio Ágar sangue, por esgotamento e encubado a 35º(overnight), e comprovando sua pureza. O Extrato fluido Stryphnondendron adstringens (Mart.) Coville, barbatimão Foram obtidos na empresa Farmácia Manipulação Vivendas, contendo 50 ml na concentração de 100% para uso externo. Data de fabricação Rev. Cient. Sena Aires Jan-Jun; 5(1):

4 11 de dezembro de 2015, validade 08 de junho de 2016, lote: all , CNPJ atendendo as demandas necessárias para sua utilização. Foi utilizado para a realização dos testes de avaliação da resistência aos antimicrobianos o método de difusão do disco segundo (Kirby-Bauer) e utilizado o meio Mueller-hinton, Agar pertencente ao lote , com validade 31 de maio de Foi pesado 38g do meio Mueller-hinton e hidratado em 1 litro de água purificada com auxilio de um balão de fundo chato, conforme as instruções do fabricante, ph para 7,2 e autoclavado a 121ºc por 15 minutos. Foram utilizadas placas de petri de plástico 90x15 estéril e descartável, distribuído 30 ml aproximadamente 4 mm de espessura do meio Muellerhinton em cada placa, sendo resfriado a temperatura ambiente, embalado e resfriado a 8ºc, sendo que parte amostragem foi levada a estufa microbiológica a 35 C por 24 horas. Para comprovar o controle de qualidade e sua esterilidade e liberar o mesmo para uso. Os discos foram desenvolvidos através de papel filtro com o auxílio do perfurador de folha tradicional, sendo desenvolvidos discos aparentemente, com a mesma espessura dos utilizados para antibiograma. Com auxílio de uma micropipeta os discos foram embebidos com a solução fluida e levados para capela exautora durante 3 minutos para retirar o excesso de extrato presente em cada disco. Logo após para sílica durante 15 minutos embalados e armazenados na geladeira a 8ºC. Na inoculação e na incubação, foi introduzido uma alça calibrada no tubo com a suspensão do microrganismo e semeado em três direções distintas. Após o inoculo secar, foram aplicado os discos do barbatimão juntamente com os discos controle, encubados de lado contrários a 35 c durante 24 horas. Após 24 horas de incubação com uma régua foram obtidos resultados qualitativos, halos de inibição em milímetros discos do barbatimão e comparados com os discos de controle positivo dentro dos limites aceitáveis descritos a partir dos dados fornecidos pelo documento vigente CLSI. RESULTADOS E DISCUSSÃO A análise dos resultados teve foco buscar e identificar a atividade antibacteriana do extrato fluido de S. adstringens, considerando não quantificar a dose amento de extrato empreguinado em cada disco. As quantidades de discos foram preparadas em triplicata para cada placa testada. Os resultados obtidos foram através de halos apresentados e comparados segundo CLSI, como mostra as tabelas 1,2 e 3. Tabela 1. Resultados do perfil de sensibilidade ao barbatimão e antimicrobianos padrões pela metodologia de Kirby-Bauer. (discos) extrato Resultados interpretativo obtidos em zonas de inibição em mm S. adstringens Rev. Cient. Sena Aires Jan-Jun; 5(1):

5 Figura 1. Halo do barbatimão 12 mm Tabela 02 Resultado do antimicrobiano de escolha para infecção por S. aureus. Disco de Resultados interpretativo Padrão antibiograma obtidos em zonas de inibição em mm Vancomicina Figura 2. Halos de inibição da vancomicina 20mm Tabela 03 Comparação do extrato do barbatimão com antimicrobiano de referência. Disco de antibiograma Resultados interpretativos obtidos em zonas de inibição em Padrão Vancomicina S. adstringens mm Nota: Cada domínio representa e avalia uma área. demonstramos nesta tabela que após a analise dos resultado. Segundo as tabela 01, extrato fluido de S.adstringens (barbatimão) apresentou efeito de inibição de crescimento formando halo de 12-13mm frente a cepa selecionada de S.aureus NEWP Na tabela 02 identificamos que o halo de inibição da vancomicina apresentou efeito de inibição de crescimento Rev. Cient. Sena Aires Jan-Jun; 5(1):

6 formando halo de 12-20mm frente a cepa selecionada de S.aureus NEWP Já a tabela 03, onde comparamos os resultados obtidos na pesquisa com o resultado padrão CSLI, observamos que a vancomicina apresentou halos dentro deste mesmo padrão. Observamos também que os halos de inibição do barbatimão em comparação aos da vancomicina apresentou resultado relevante, pois vemos que o menor halo de inibição obteve a mesma medida vancomicina. CONCLUSÃO Pelo fato do Brasil oferecer uma ampla biodiversidade, este estudo teve maior ênfase em selecionar uma planta medicinal encontrada com maior frequência na região do centro-oeste. O S.adstringens (Mart.) Coville barbatimão. Os testes in vitro, foram apresentados resultado em halos de inibição próximo aos valores dos antibióticos de referencia utilizados na terapêutica frente ao micro-organismo S.aureus. Ao concluir este estudo foi observado que pode ser empregada uma análise de cromatografia que é constituído de um processo físico-químico capaz de separar e isolar as sustâncias ativas presentes no S. adstringes (barbatimão), potencializando uma ou mais substância responsável pela atividade antibacteriana e ressaltando para o desenvolvimento de novos fármacos que auxiliem no tratamento de imunoconpetentes, e de certa forma, diminua o uso frequente de antibióticos. Portanto a presente pesquisa teve ênfase em colaborar de forma significativa para o campo da saúde, investigando supostas substâncias eficazes e menos tóxicas colaborando contra a resistência bacteriana. REFERÊNCIAS 1. Trabulsi LR. Microbiologia. 4 ed. São Paulo: Atheneu; Cotran RS, Kumar V. Patologia estrutural e funcional. 6ª Ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan; Gonçalves AL, Alves Filho A, Menezes H. Estudo comparativo da atividade antimicrobiana de extratos de algumas árvores nativas. Arq Inst Biol. 2005; 72(3): Cechinel Filho V, Yunes RA. "Estratégias para a obtenção de compostos farmacologicamente ativos a partir de plantas medicinais. Conceitos sobre modificação estrutural para otimização da atividade. Qim nova. 1998; 21(1): Souza TM, Moreira RD, Pietro RCLR, Isaac VLB. Avaliação da atividade antiséptica de extrato seco de Stryphnodendron adstringens (Mart.) Coville e de preparação cosmética contendo este extrato. Rev Bras Farmacogn.2007;17(1): Lopes GC, Sanches ACC, Toledo CEM, Isler AC. Mello JCP. Determinação quantitativa de taninos em três espécies de Stryphnodendron por cromatografia líquida de alta eficiência. Braz J Pharm Sci. 2009; 45(1): Hasenack BS, Sichinelli JM, Garcia AF, Gomes KS, Spiti S, Costa CL, et al. Atividade antibacteriana do extrato Barbatimão sobre cepas de Staphylococcus Aureus isoladas de secreções de feridas crônicas de pacientes ambulatoriais. Ciênc Biol Saúde. 2008; 10(1): Betolucci SKV, Pinheiro RC. Manipulação de fitoterápicos. 2 a ed. Lavras: UFLA/FAEPE; Santos AL, Santos DO, Freitas CC, Ferreira BLA, Afonso IF, Rodrigues CR, et al. Staphylococcus aureus: visitando uma cepa de importância hospitalar. Bras Patol Med Lab. 2007; 43(6): Rev. Cient. Sena Aires Jan-Jun; 5(1):