Cursos de Enfermagem e Obstetrícia, Medicina e Nutrição. Disciplina Mecanismos Básicos de Saúde e Doença MCW 240. Aula Prática 3 Módulo Microbiologia

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1 Cursos de Enfermagem e Obstetrícia, Medicina e Nutrição Disciplina Mecanismos Básicos de Saúde e Doença MCW 240 Aula Prática 3 Módulo Microbiologia Teste da eficácia de agentes físicos e químicos sobre bactérias PRIMEIRA PARTE Testar diferentes métodos que empregam o calor no controle do crescimento de formas vegetativas e nos endósporos. Materiais: Autoclave Banho-maria Pipetas de 2 ml Bico de Bunsen Tubos de ensaio (2 ml) com meio de cultura Bactéria: Escherichia coli e Bacillus subitlis Estufa de incubação Procedimento: Esta prática deve ser feita para os dois micro-organismos. Cada grupo escolhe um tipo de bactéria. 1. Separar 4 tubos com o meio de cultura estéril e inocular cada tubo com 1 gota de cultura. Em seguida, os meios inoculados devem ser submetidos às diferentes condições listadas a seguir e incubados por h, a temperatura ambiente. Primeiro tubo = controle

2 Segundo tubo = banho-maria, 100 C, 5 min Terceiro tubo = banho-maria, 100 C, 20 min Quarto tubo = autoclave 20 min Interpretação dos resultados: 1. E. coli deve ser eliminada após aquecimento em banho-maria a 100 C, por 20 minutos e na autoclave. Pode crescer no tempo de 5 minutos. 2. B. subtilis deve crescer no tubo aquecido em banho-maria por 5 e 20 minutos, sendo eliminado apenas após autoclavação. SEGUNDA PARTE Testar diferentes anti-sépticos no controle do crescimento de micro-organismos. Segunda parte - Materiais: Placa de Petri com crescimento de Serratia marscecens Placa de Petri com meio de cultura de caldo simples Bico de Bunsen Estufa de incubação Quatro tipos de anti-sépticos Sugestão: álcool iodado, álcool a 70%, água e sabão, água oxigenada a 10 volumes Procedimento: Demarcar na placa de Petri com caneta para retroprojetor 3 regiões distintas: 1, 2 e 3 Região 1 = pressionar levemente o polegar Região 2 = pressionar o mesmo polegar no crescimento de S. marscecens e, em seguida, pressionar o dedo com a cultura nesta região Região 3 = lavar o polegar com um dos anti-sépticos, deixar secar e pressionar na região 3

3 Interpretação dos resultados: 1. Na região 1 aparecem os micro-organismos da flora normal do dedo do aluno. Na região 2, o crescimento deve corresponder à cultura de S. marscecens, podendo aparecer também algumas colônias da flora. Na região 3, se o anti-séptico usado for 100% eficaz, não crescerá nenhum micro-organismo. Se não, poderão crescer tanto S. marscecens, quanto micro-organismos da flora, caso estejam presentes na região 2.

4 Cursos de Enfermagem e Obstetrícia, Medicina e Nutrição Disciplina Mecanismos Básicos de Saúde e Doença MCW 240 Aula Prática 4 Módulo Microbiologia Preparo de lâminas para observação microscópica de micro-organismos preparações a fresco e coloração de Gram 1. Manusear adequadamente o microscópio óptico 2. Conhecer os principais métodos de observação microscópica de microorganismos 3. Identificar os principais tipos morfológicos de bactérias 4. Distinguir a importância do método de Gram na identificação de microorganismos Materiais: Lâminas prontas com bactérias Gram-positivas e Gram-negativas Cultura de E. coli em caldo simples Cultura de B. subtilis em caldo simples Lâminas limpas Lamínulas limpas Óleo de imersão Solução salina estéril Microscópios ópticos Alças e agulhas de inoculação Procedimentos: Preparação de lâminas para observação ao microscópio óptico.

5 1. Preparação a fresco: após flambar a alça de inoculação, colocar uma gota de suspensão de E. coli em uma lâmina e cobrir com uma lamínula. Adicionar pequena gota de óleo de imersão e observar ao microscópio óptico com objetiva de imersão 2. Coloração de Gram: colocar uma pequena gota de solução salina sobre uma lâmina de microscopia. Flambar uma alça e com ela retirar uma pequena porção do crescimento bacteriano. Colocar a porção sobre a gota de salina e espalhar, obtendo assim o esfregaço. Deixar secar espontaneamente. a. Fixar o esfregaço à lâmina, segurando-a com um pregador de madeira e passando-a 3 X sobre a chama do bico de Bunsen, com a parte do esfregaço para cima. b. Proceder à coloração de Gram: Tratar o esfregaço com uma solução de cristal violeta durante 1 a 2 minutos Lavar ligeiramente com água. Escorrer Cobrir o esfregaço com lugol durante 1 a 2 minutos Descorar rapidamente pelo álcool a 95% Lavar ligeiramente com água. Escorrer Cobrir com uma solução de safranina ou fucsina, por 30 segundos, para contra-corar Lavar e enxugar entre 2 papéis de filtro, com cuidado, sem esfregar Adicionar sobre o esfregaço corado uma pequena gota de óleo de imersão e examinar ao microscópio óptico com a objetiva de imersão Interpretação dos resultados: 1. Preparação a fresco: observar o tamanho relativo de E. coli, sua forma e locomoção 2. Coloração de Gram: distinguir o tamanho, a forma (coco ou bastonete) e a reação ao Gram: roxas, Gram-positivas; vermelhas, Gram-negativas. Observar alguns arranjos característicos