AVALIAÇÃO FARMACOLÓGICA DE NOVOS DERIVADOS METILENODIOXIFENILSULFONAMÍDICOS DICOS FUNCIONALIZADOS
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- Victorio Domingues
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1 UIVERIDADE FEDERAL D RI DE JAEIR LABRATÓRI DE FARMACLGIA CARDIVACULAR DFBC ICB LABRATÓRI DE AVALIAÇÃ E ÍTEE DE UBTÂCIA BIATIVA LABio - FACULDADE DE FARMÁCIA AVALIAÇÃ FARMACLÓGICA DE V DERIVAD METILEDIXIFEILULFAMÍDIC DIC FUCIALIZAD
2 Principais PDEs encontradas no músculo liso Família (n º de genes) Características Localização Exemplos de inibidores PDE1 Estimulada por Ca 2+ /calmodulina Coração, cérebro, pulmão, músculo liso Vinpocetina PDE3 seletiva para AMPc; inibida por GMPc; Coração, pulmão, plaquetas, tecido adiposo, músculo liso vascular. Milrinona, cilostamida PDE4 Específica para AMPc; insensível a GMPc Vias aéreas, células de ertoli, rim, cérebro, fígado, pulmão. Rolipram PDE5 Específica para GMPc Pulmão, plaquetas, músculo liso ildenafil, zaprinast, dipiridamol
3 Materiais e métodos TEÃ IMÉTRICA DE MÚCUL LI VACULAR E TRAQUEAL Ratos Wistar, machos, 2-3 g derivados,5 µm Anel de aorta ou traquéia Transdutor de tensão inais digitalizados Cuba experimental
4 DERIVAD A CTRATILIDADE DE AÉI DE TRAQUÉIA H 1 Contratura - Acetilcolina LABio 448 LABio 965 LABio 982 LABio 984 LABio 985 LABio 448 LABio 982 H LABio 965 CH log [M] C H 3 H LABio 984 LABio 985
5 DERIVAD A CTRATILIDADE DE AÉI DE TRAQUÉIA H Contratura - Acetilcolina 1 LABio 448 LABio 9 LABio 961 LABio 962 LABio 964 LABio log [M] LABio 959 LABio 961 LABio 448 LABio 9 H LABio 962 LABio 964
6 Materiais e métodos MECAIM DE AÇÃ D RELAXAMET D MÚCUL LI TRAQUEAL Ratos Wistar, machos, 2-3 g Pré-incubação com diversos antagonistas: - L-AME: inibidor da óxido nítrico sintase - indometacina: inibidor da cicloxigenase - propranolol: antagonista de receptor β-adrenérgico derivados 5 µm
7 MECAIM DE AÇÃ DE LABio 448 MÚCUL LI TRAQUEAL Contratura - Acetilcolina LABio 448 LABio L-AME log [M] Contratura - Acetilcolina LABio 448 LABio indometacina log [M] Contratura -Acetilcolina LABio 448 LABio propranolol log [LABio 448] M
8 DERIVAD A CTRATILIDADE DA MUCULATURA LIA VACULAR DE AÉI DE ARTA H Contratura - Fenilefrina LABio 448 LABio 965 LABio 982 LABio 985 LABio log [M] C H 3 LABio 448 LABio 982 H H LABio 965 LABio 984 CH3 LABio 985
9 DERIVAD A CTRATILIDADE DA MUCULATURA LIA VACULAR DE AÉI DE ARTA H LABio 448 Contratura - Fenilefrina LABio 448 LABio 959 LABio 9 LABio 961 LABio 964 CH LABio LABio 961 LABio 9 H log [M] LABio 962 LABio 964
10 AÇÃ MÚCUL LI VACULAR EM ARTA EM EDTÉLI Contratura - Fenilefrina com endotélio sem endotélio LABio log [M] H Contratura - Fenilefrina com endotélio sem endotélio LABio log [M] Contratura - Fenilefrina LABio 448 LABio 959 com endotélio sem endotélio LABio 9 - log [M] LABio 9
11 AÇÃ MÚCUL LI VACULAR EM ARTA EM EDTÉLI Contratura - Fenilefrina com endotélio sem endotélio LABio log [M] LABio 961 Contratura - Fenilefrina com endotélio sem endotélio LABio log [M] H Contratura - Fenilefrina com endotélio sem endotélio LABio log [M] LABio 964 H CH3 LABio 965
12 CCETRAÇÃ IIBITÓRIA MÉDIA D DERIVAD D LABI 448 ubstâncias Traquéia (μm) Aorta - com endotélio (μm) Aorta - sem endotélio (μm) LABio ,5 ± 3,2 15,4 ± 2,4 79,3 ± 3,7 LABio ,6 ± 6,5 14,3 ± 4,2 75,9 ± 9,1 LABio 9 D 97,7 ± 22,7 D LABio ,3 ± 9,2 13,9 ± 3,3 55,2 ± 5,3 LABio ,5 ± 13,1 - - LABio ,6 ± 45,7 29,5 ± 5,8 28,8 ± 1,7 LABio ,9 ± 29,5 3,1 ± 1,5 11,7 ± 3,7 LABio ,4 ± 11,3 19,9 ± 9,9 - LABio 984 D 33, ± 8,2 - LABio 985 D 16,6 ± 6,9 D
13 Materiais e métodos MECAIM DA AÇÃ VADILATADRA D LABio-985 Ratos Wistar, machos, 2-3 g Remoção mecânica do endotélio vascular Pré-incubação com diversos antagonistas: - L-AME: inibidor da óxido nítrico sintase - atropina: antagonista muscarínico - naloxona: antagonista opióide - indometacina: inibidor da cicloxigenase - glibenclamida: inibidor de canal de K + derivados 5 µm
14 MECAIM DE AÇÃ DE LABio 985 MÚCUL LI VACULAR H Contratura - Fenilefrina sem endotélio com endotélio LABio log [M] C H 3 Contratura - Fenilefrina LABio 985 LABio log [M] com endotélio sem endotélio + L-AME Contratura - Fenilefrina LABio atropina log [M]
15 MECAIM DE AÇÃ DE LABio 985 MÚCUL LI VACULAR LABio naloxona Contratura - Fenilefrina log [M] Contratura - Fenilefrina LABio indometacina LABio glibenclamida log [M] Contratura - Fenilefrina log [M]
16 AÇÃ D DERIVAD EM CRP CAVER DE CBAI Contratura - Fenilefrina L965 L985 L log [M]
17 Materiais e métodos IFUÃ CTÍUA I VIV PARÂMETR HEMDIÂMIC Ratos Wistar ou HR, machos, 2-3g Infusão venosa PA, FC e FR derivados: 1 mg/kg/min Anestesia Éter etílico Veia jugular Infusão 15 min Artéria carótida PA Eletrodos ECG
18 LABio 965 (1 mg.kg -1.min -1 ) A PREÃ ARTERIAL DE RAT WITAR E HR Parâmetros Ratos Wistar Controle 5 min 1 min 15 min Freqüência cardíaca (bpm) 45, ±, 4,± 3, 45, ± 3, 5, ± 75, Freqüência respiratória (irm) 87, ± 3, 96, ± 12, 16, ± 1, 12, ± 18, Pressão sistólica (mmhg) 125, ± 5, 127,5 ± 7,5 127,5 ± 7,5 127,5 ± 2,5 Pressão diastólica (mmhg) 115, ± 5, 115, ± 5, 11, ± 1, 112,5 ± 7,5 Parâmetros - HR Controle 5 min 1 min 15 min Freqüência cardíaca (bpm) 3, ± 32,4 3,± 12,2 367,5 ± 25,6 375, ± 8,7 Freqüência respiratória (irm) 77, ± 1,9 14, ±18,6,5 ± 2,6 85, ± 3,3 Pressão sistólica (mmhg) 177,5 ± 11,8 172,5 ±1,3 167,5 ± 7,8 166,3 ± 18,4 Pressão diastólica (mmhg) 1, ± 12,1 121,3 ±11,3 113,7 ± 6,3 115, ± 14,9
19 LABio 448 e 959 (1 mg.kg -1.min -1 ) A PREÃ ARTERIAL DE HR 959 ão provocou nenhuma alteração nos parâmetros hemodinâmicos de HR 448 Parâmetros Controle 5 min 1 min 15 min Freqüência cardíaca (bpm) 4, ±, 375, ± 45, 39, ±, 39, ±, Freqüência respiratória (irm) 76, ± 4,, ±,, ±, 88, ±, Pressão sistólica (mmhg) 217,5 ± 17,5 197,5 ± 17,5 195, ± 15, 192,5 ± 17,5 Pressão diastólica (mmhg) 175, ± 15, 155, ± 15, 147,5 ± 7,5 147,5 ± 7,5
20 LABio 985 (1 mg.kg -1.min -1 ) A PREÃ ARTERIAL DE RAT WITAR Controle 5 min 1 min 15 min 15 5 LABio mg.kg -1.min -1 mmhg 25 mm/s 1s Parâmetros Controle 5 min 1 min 15 min Freqüência cardíaca (bpm) 39, ± 27,4 3, ± 24,5 382,5 ± 22,5 382,5 ± 22,5 Freqüência respiratória (irm) 112, ± 4, 128, ±, 126, ± 1, 13, ± 1, Pressão sistólica (mmhg) 131,3 ± 11,6 123,8 ± 11,4 118,8 ± 8,3 117,5 ± 5,2 Pressão diastólica (mmhg) 93,8 ± 9,4 75, ± 15,1 65, ± 1,2 65, ± 1,6
21 LABio 985 (1 mg.kg -1.min -1 ) A PREÃ ARTERIAL DE HR Controle 5 min 1 min 15 min 15 5 mmhg LABio mg.kg -1.min mm/s 1s Parâmetros Controle 5 min 1 min 15 min Freqüência cardíaca (bpm) 3, ±, 3,±, 3, ±, 3, ±, Freqüência respiratória (irm) 132, ± 28, 136, ±24, 152, ± 8, 1, ±, Pressão sistólica (mmhg) 197,5 ± 7,5 162,5 ± 7,5* 157,5± 12,5* 1, ± 5,* Pressão diastólica (mmhg) 145, ± 1, 15, ±1,* 9, ± 1,* 75, ± 1,* *P <,5: PA e PAD 5, 1 e 15 min versus controle
22 Materiais e Métodos TRATAMET CRÔIC 14 DIA LABio 985 Ratos HR, machos, 2-2g LABio 985: - 5 mg/kg - 1 mg/kg Administração intraperitoneal Tratamento: 14 dias Medidas: Pressão sistólica Pressão diastólica Pressão arterial média Medida não invasiva: Pletismógrafo
23 LABio 985 (5 e 1 mg/kg) A PREÃ ARTERIAL DE HR TRATAMET CRÔIC PREÃ ITÓLICA 2h após tratamento 24h após tratamento P (mmhg) P (mmhg) 5 mg/kg 1 mg/kg 5 mg/kg 1 mg/kg Tratamento (dias) Tratamento (dias)
24 LABio 985 (5 e 1 mg/kg) A PREÃ ARTERIAL DE HR TRATAMET CRÔIC PREÃ DIATÓLICA 2h após tratamento 24h após tratamento 2 2 PD (mmhg) 1 PD (mmhg) 1 5mg/kg 1mg/kg mg/kg 1mg/kg Tratamento (dias) Tratamento (dias)
25 LABio 985 (5 e 1 mg/kg) A PREÃ ARTERIAL DE HR TRATAMET CRÔIC PREÃ ARTERIAL MÉDIA 2h após tratamento 24h após tratamento 2 2 PAM (mmhg) 1 PAM (mmhg) 1 5 mg/kg 1mg/kg mg/kg 1mg/kg Tratamento (dias) Tratamento (dias)
26 Materiais e Métodos HITLGIA Fixação: formol 1% Clivagem 1ª Desidratação: álcool 2ª Desidratação: xilol Inclusão em parafina Microtomia Fixação do corte na lâmina Coloração: Eosina e Hematoxilina Montagem
27 DM LABio-985 (5mg/kg) LABio-985 (1mg/kg) ARTA BAÇ CÉREBR X
28 DM LABio-985 (5mg/kg) LABio-985 (1mg/kg) CRAÇÃ FÍGAD PULMÃ X
29 DM LABio-985 (5mg/kg) LABio-985 (1mg/kg) RIM EDL LEAR X
30 Etapas a serem realizadas Concluir a investigação do mecanismo de ação para LABio-985 no músculo liso vascular Tratamento crônico com LABio-985, 2 vezes ao dia em ratos normais e HR Tratamento agudo por injeção em bolo e infusão venosa de LABio-985 tendo em vista possível aplicação no tratamento de emergências hipertensivas
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