Sistema do Grupo Sanguíneo ABO

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1 Sistema do Grupo Sanguíneo ABO Características Únicas do Sistema do Grupo Sanguíneo ABO A prova ABO é o teste de laboratório mais importante realizado em potenciais receptores de transfusão e doadores de sangue. A natureza crítica do grupo ABO é resultado de duas características do sistema. Primeiro, diferente de outros sistemas de grupos sanguíneos, os anticorpos do sistema ABO estão presentes no soro de quase todas as pessoas que não têm o antígeno correspondente. Esses anticorpos incluem: 1. Anticorpos Naturais : anticorpos IgM não estimulados por hemácias, formados logo no início da vida e provavelmente devido à exposição a antígenos de plantas ou bactérias 2. Anticorpos Imunes : anticorpos IgG formados como resultado da exposição a antígenos estranhos através de hemorragia fetal/maternal, transfusão de hemácias incompatíveis com ABO ou inoculação de antígenos virais ou bacterianos Modelo molecular de um anticorpo monoclonal gerado por computador Segundo, as aloaglutininas do sistema ABO geralmente retêm o complemento e são capazes de causar a hemólise intravascular das hemácias incompatíveis. Por isso, um erro no grupo ABO de um paciente ou doador poderia ser fatal em um cenário de transfusão. Embora a reação cruzada promova uma medida de proteção adicional, uma reação cruzada sorológica talvez não possa ser obtida para toda situação de transfusão potencial. Genética do Sistema do Grupo Sanguíneo ABO Os antígenos A, B e H, assim como os antígenos de outros grupos sanguíneos, representam os genes hereditários da geração anterior. Se um antígeno for detectado, o gene que o controla deve ter sido herdado de um ou ambos os pais e pode ser passado para a próxima geração. Alelos A, B & O A expressão do antígeno A, B, e H é determinada pelos genes localizados em três locos separados (a área de um cromossomo em que está localizado o gene para um traço em particular), conhecido como ABO, Hh e Sese. Os genes A, B e O são alelos localizados no cromossomo 9. Cromossomo 9 : A, B & O Alleles A Atividade dos Genes ABO e H A ação do gene H é necessária para a formação dos antígenos A e B e produção do H, um antígeno encontrado em maior concentração nas hemácias de pessoas do grupo O. O gene H é muito comum; a maioria das pessoas é homozigoto HH, tendo recebido esse gene do pai e da mãe. O alelo de H, h é muito raro. As pessoas que apresentam o genótipo hh são extremamente raras; elas têm o assim chamado fenótipo Bombay, sem a expressão normal dos genes A, B ou O, que elas herdaram. A herança de H independe da herança de ABO, mas todos os antígenos A, B e H são formados a partir do mesmo precursor básico, que por si só é um produto do gene. O material precursor básico tem uma espinha dorsal protéica ou lipídica à qual os açúcares são ligados. A adição de um outro açúcar à cadeia cria um novo antígeno; o tipo de açúcar e a posição na qual é ligado determinam a especificidade do antígeno. Cada gene H, A e B controla a produção das enzimas transferases, que ligam os açúcares ao material precursor. O H age primeiro, produzindo _1,2 fucosiltransferase que liga o açúcar L-fucose ao material básico. A molécula resultante é reconhecida como antígeno H, capaz de estimular e reagir com o anti-h. Como o gene O é inativo (amórfico), ele não acrescentará nada mais à molécula para que as células de uma pessoa do grupo O reajam intensamente com o anti-h. A presença de um gene A resulta na produção de (1,3) N-acetilgalactosaminiltransferase, que liga o açúcar N-acetilgalactosamina ao substrato formado pelo gene H. O açúcar adicional forma um novo antígeno A, que parece interferir na acessibilidade da fucose, já que o anti-h também não reage com as células do grupo A da mesma maneira que as do grupo O. O açúcar D-galactose é o açúcar que fornece especificidade B à cadeia, sendo ligado ao substrato H pelo produto do gene B, (1,3) galactosaminiltransferase. O gene O é amorfo, pois não produz um antígeno detectável. As células do grupo O contêm apenas antígeno H e são reconhecidas pela ausência de antígenos A ou B. O gene O é recessivo, enquanto que os genes A e B são codominantes e produzem antígenos A e/ou B, com exceção do caso do raro genótipo Bombay (hh). (continue na próxima página)

2 Formação de Fenótipos ABO e Bombay A Atividade do Gene Secretor (Sese) Aproximadamente 78% da população dos Estados Unidos secretam substâncias ABH solúveis de mesma especificidade que suas hemácias em sua saliva e outros fluidos corporais. Embora os genes ABO e H sejam responsáveis pela produção de todos os antígenos ABH, o aparecimento de antígenos na saliva é controlado por um outro conjunto de genes: Se e seu alelo se. As pessoas (secretores) dos genótipos SeSe e Sese secretam as substâncias do grupo sanguíneo em sua saliva. As pessoas do genótipo sese são denominadas não-secretores, pois sua saliva não contém substâncias ABH. Os genes Se-se são hereditários independentemente dos genes ABO e H. As substâncias específicas normalmente encontradas na saliva de secretores são mostradas na Tabela 1. Blood Group A B O AB Saliva Antigens A and H B and H H A, B and H Tabela 1. Substâncias ABH na Saliva de Pessoas SeSe ou Sese, com exceção Bombay Padrão de Hereditariedade Quando o mesmo gene foi herdado de cada um dos pais, por exemplo, OO, o indivíduo é considerado homozigoto para esse gene. Quando diferentes genes são herdados, conforme evidenciado no caso de AB, o indivíduo é heterozigoto. O genótipo de uma pessoa do fenótipo A (ou B) pode ser deduzido a partir de um estudo de sua família; o indivíduo que é homozigoto AA passará um gene A para cada um de seus filhos, enquanto que o heterozigoto AO pode passar um gene A ou O para sua descendência. Como para todos os cromossomos, uma única possibilidade determina qual dos pares acabará no zigoto do qual nasce um novo indivíduo. Foto da família representando a hereditariedade do fenótipo Genótipos ABO Possíveis de Várias Combinações Na última década, avanços recentes na análise molecular permitiram a genotipagem ABO através de técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR), como polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição, PCR alelo-específico, polimorfismo de conformação de cadeia simples e eletroforese em gel com gradiente de denaturação sem a necessidade de estudar a família. Group A and B Subgroups The serum of group B persons contains two antibodies: anti-a and anti-a1. By proper absorption, the two antibodies can be separated. Cells of group A that react with anti-a 1 are said to be of the subgroup A 1. Cells that react with anti-a but not with anti-a 1 fall into subgroups weaker than A 1, the majority being classified as A 2. a. Subgroup A 1 1. Consiste em 80% do pool de genes A 2. A maior parte da substância H convertida para antígeno A; um grande número de áreas de antígeno b. Subgrupo A2 e outros subgrupos raros (ex: A3, Aint,AX, Am, etc) 1. Consiste em aproximadamente 20% do pool de genes A 2. Menos substância H convertida em antígeno A; um número menor de áreas de antígeno que o A 1 3. Pode produzir anti-a 1 Os subgrupos B são raros na maioria das populações e podem requerer adsorção e eluição para serem detectados. Em geral, são reconhecidos pelas variações na força da reação com o anti-b, mas não há reagentes disponíveis para fazer a distinção entre eles. O soro do paciente pode conter anticorpos anti-b. Os subgrupos ABO existem devido às modificações nos genes ABO, resultando em atividades de glicosiltransferase alteradas. Anticorpos e Antígenos ABO Anticorpos sendo ligados às hemácias

3 Após ou simultaneamente ao agrupamento das hemácias, o soro de uma pessoa é testado com as hemácias conhecidas do grupo A1 e grupo B, para demonstrar a presença ou ausência de anti-a e/ou anti-b. Basicamente, todo indivíduo que não apresenta um antígeno A e B ou ambos produz anticorpo para o antígeno estranho, por causa da similaridade na estrutura entre os antígenos A e B das hemácias e os antígenos de bactérias e plantas. Os anticorpos resultantes da exposição aos antígenos de bactérias e plantas não são observados até quatro a seis meses de idade. O anti-a e anti-b encontrado no soro de recém-nascidos é de origem materna. Entretanto, anticorpos ABO quase sempre estão presentes em pessoas normais e saudáveis, sendo que o pico de produção de anticorpos ocorre aos 5-10 anos de idade. Porcentagem de Antígenos e Anticorpos ABO nas Populações dos Estados Unidos grupo O Red antígenos No A or B antigens anticorpos Anti-A, Anti-B, & Anti-A,B AB A & B No antibodies A 1 A & A 1 Anti-B 30 A 2 A Anti-B (may develop anti-a1) B B Anti-A & Anti-A 1 15 % Da População dos EUA 50 Observação: A freqüência do antígeno ABO pode variar em outras populações com diferentes misturas étnicas. Testes de rotina ABO Teste de tipo sanguíneo 4 1 A determinação exata do grupo ABO de uma pessoa requer dois procedimentos diferentes: teste de agrupamento de células vermelhas (às vezes chamado para a frente agrupamento) e agrupamento de soro (às vezes chamada prova reversa). O indivíduo é atribuído primeiramente a um dos quatro grupos sanguíneos ABO - A, B, AB ou O - baseado na reação de suas células vermelhas de sangue Agrupamento Sera Anti-A e anti-b. Nos exemplos anteriores de reagentes para a detecção de antigénio manufacturados A e B, dos grupos sanguíneos policlonal Anti-soros A e anti-b foram preparadas a partir dos soros de pessoas do grupo B e um grupo de pessoas, respectivamente. Policlonal anti-a, B no soro, a qual foi preparada a partir de indivíduos de grupos especialmente seleccionados de O, não é apenas uma simples mistura de anti-a e anti-b, mas contém um componente do grupo O soro (anti-a, B) que tenha o propriedade especial de reagir com antigénios fracos nas células vermelhas fracas, especialmente os antigénios. Anti-A, B soro vai aglutinar grupo A, grupo B e as células do grupo AB, mas não de células do grupo O. O reagente é particularmente importante quando as unidades de teste do doador para evitar erros de digitação um subgrupo fraco e etiquetar o elemento O. Anti-A, B soro pode ser útil na resolução de resultados discrepantes entre celular e agrupamento soro. Nas duas últimas décadas, os reagentes monoclonais têm sido desenvolvidos, que substituíram o soro policlonal anti-soro monoclonal porque dar especificidade melhorada, avidez, estabilidade e reprodutibilidade. Os anticorpos monoclonais são produzidos por um clone de células derivadas de uma única célula original. Todos os anticorpos produzidos por um clone de células são idênticos uns aos outros em especificidade, classe de imunoglobulinas e de todas as outras propriedades inerentes a célula produtora de anticorpos original. É importante observar que todos os anticorpos monoclonais não podem detectar a expressão fraca de subgrupos, bem como a utilização de reagentes altamente sensíveis monoclonais podem resultar em resultados ambíguos agrupamento clinicamente sangue. Por exemplo, quando o anti-soro monoclonal tipagem ABO especificamente produzido a partir de um clone anti-b designado ES4 foi inicialmente produzido, ele causou um aumento na detecção do fenómeno B adquirida. Devido à gravidade da mistyping que poderia ser associado com estes reagentes, o clone ES4 foi removido do anticorpo monoclonal anti-b e os reagentes adicionados, em vez de na mistura de clones monoclonais anti-a, B reagentes. Considerações gerais: 1. O teste é realizado à temperatura ambiente 2. Aglutinação deve ser observada contra um fundo bem iluminada 3. Pode ser realizada por lâmina, tubo, de microtitulação, ou a tecnologia de aglutinação em coluna usando instrumentação automatizada ou semi-automatizada 4. Pode usar reagentes monoclonais ou policlonais 5. Método deve seguir as instruções do fabricante e Manual de Procedimento Operacional Padrão do laboratório Manual Forward and Reverse Typing Human blood being tested for antigens

4 Assumindo que os testes são adequadamente realizada, a interacção visível com anti-soros anti-a e anti-b (a aglutinação das células) indica que as células possuem o antígeno contra o qual o anti-soro é dirigida. Por outro lado, nenhuma interacção visível indica que as células não possuem o antígeno. Os antisoros utilizadas para a frente de digitação conter anticorpos IgM em um diluente de baixa proteína. A estrutura de IgM é tal que se pode reticular glóbulos vermelhos suspensos em solução salina. Aglutinação de salina suspensos células vermelhas por IgM anti-a e / ou anti-b ocorre à temperatura ambiente e é praticamente imediato. A reacção rápida, que não requer a incubação, é devido não só à natureza e à quantidade do anticorpo no soro, mas também para o facto de que os antigénios A e B estão presentes nas células vermelhas em números muito grandes. Na prova reversa ABO, soro de teste desconhecido é testado com células reagentes conhecidos A1 e B vermelhas. Para células vermelhas ABO frente agrupamento, as propriedades do antigénio e anticorpo permite a utilização de lâmina, tubo de microplacas, ou técnicas de coluna. No entanto, o agrupamento reverso deve ser feita por tubo de ensaio mais sensível, ou métodos de coluna porque o nível de anticorpos no soro de um indivíduo pode ser diminuída. Resultados de aglutinação na prova reversa deve ser apenas isso, o inverso dos resultados de tipagem para a frente. Tecnologia aglutinação coluna Ilustração Teste tubo O mesmo princípio aplica-se de aglutinação para o método de aglutinação em coluna, uma vez que se no método do tubo, no entanto, o teste é realizado em um cartão pré-carregada / cassete contendo gel ou grânulos misturados com o reagente apropriado. As amostras dos pacientes pode ser pipetado para as colunas manualmente ou por um sistema automatizado. Posteriormente, cartões de teste são girados e ler. Os resultados são estáveis e prontas para relatar, eliminando a variabilidade dos glóbulos vermelhos (resuspensions agitação tubo) e interpretação de reacções. Testes de aglutinação coluna eliminar técnica dependentes de variáveis, o que pode afetar a sensibilidade do teste e especificidade. Claros, estáveis e bem definidas significam endpoints interpretação objectiva, consistente e reprodutível dos resultados dos testes, juntamente com uma redução na repete. Teste para os subgrupos de A 1. Anti-A: alguns reagentes monoclonais (ex: anti-a derivado de clone designado como MH04 ) conseguem detectar pequenas quantidades de antígeno A e, se usados rotineiramente, eliminam a necessidade de realizar testes freqüentes com outros reagentes complementares. REAÇÕES DOS SUBGRUPOS DE A Fenótipo Reagente Anti-A Anti-B Células A 1 Células B Conclusão A X Monoclonal 3+* neg neg 4+ Group A A com B adquirido Cordão A com antígeno A fraco Policlonal neg neg neg 4+ Inconclusivo Monoclonal 4+ neg* neg 4+ Group A Policlonal neg 4+ Inconclusivo Monoclonal 3+* neg n/a n/a Group A Policlonal neg neg n/a n/a Inconclusivo * Pode variar de 0 a 3+ com clone e formulação reagente 2. Anti-A,B e Anti-A Monoclonal mais Anti-B: reage com A e subgrupos de A; usado para distinguir o grupo O (sem reação) dos subgrupos A, principalmente se testes de rotina produzir resultados inconclusivos. 3. Anti-A1 lectina: extrato da planta Dolichos biflorus; reage intensamente apenas com RBCs de indivíduos A Anti-H: reage seletivamente com os grupos ABO de acordo com a quantidade de substância H no grupo sanguíneo. REAÇÕES CELULARES DOS SUBGRUPOS DE A SUBGRUPO A ANTI-A ANTI-A,B ANTI-H ANTI-A1 LECTINA A A neg A 3 MF* MF +++ neg A int A x neg neg A m +/- +/- +++ neg * MF = mistura da reação em campo 5. Células A 2 : usadas para confirmar a presença de anti-a 1 ; a aglutinação ocorre com Células A 1 e soro de paciente, mas não há aglutinação com células A 1 ; e soro de paciente, mas não há aglutinação com células A 2 e soro de paciente: sugere a presença de anti-a Células O: fornecem antígenos para detectar a maioria dos anticorpos clinicamente significativos, que podem ser encontrados no soro de paciente; aloanticorpos que reagem em temperatura ambiente podem interferir na prova reversa ABO, causando falsos resultados positivos. Outros Testes Necessários Sob Circunstâncias Especiais Testes mais abrangentes são necessários sempre que houver discrepância entre a prova de hemácias e a prova reversa ou quando as hemácias reagem fracamente com um anti-soro. Outros reagentes podem ser usados, condições de teste podem ser modificadas em termos de temperatura e testes de saliva podem ser

5 úteis. O objetivo de testes adicionais é determinar se estamos lidando com um problema técnico ou uma amostra de sangue anormal de um paciente ou doador. Os resultados dos controles, de reagente e procedimento, ajudam a definir a causa de um resultado de teste incomum. As Causas das Discrepâncias ABO Discrepâncias dos Testes ABO Ocasionalmente, ocorrem problemas no sistema de teste que podem ser atribuídos a erros de equipamento ou tecnólogo. Esses problemas são os seguintes: 1. Identificação inadequada das amostras 2. Leitura, registro ou interpretação dos resultados feitos incorretamente 3. Falha no equipamento 4. Falha nos reagentes 5. Falha ao adicionar os reagentes apropriados 6. Falha ao identificar a hemólise como uma reação positiva 7. Aquecimento do sistema de teste Para detectar e prevenir discrepâncias nos testes ABO, os controles de reagente e procedimento devem ser partes integrantes do sistema de teste. Os controles de reagente mostram se os reagentes estão funcionando apropriadamente. Esses controles consistem em células conhecidas do grupo A e B, testadas com Soros Anti-A e Anti-B do Grupo Sanguíneo. Esse teste cruzado confirma a adequabilidade das hemácias reagentes e anti-soros reagentes. Por outro lado, os controles de procedimento mostram se o método e as condições escolhidas (como temperatura e centrifugação) são apropriados para o sistema de teste. Desde que a prova de células e a prova reversa combinem, não há necessidade de usar controles de procedimento separados. Se nenhuma reação for observada para as células grupo O em temperatura ambiente, é mais provável que ocorra reação com as células A ou B usadas na prova reversa devido ao anti-a ou anti-b. Contudo, se houver reações com as células grupo O em temperatura ambiente, é possível ou provável uma reação esperada ou inesperada com as células A ou B, respectivamente, devido à mesma causa, requerendo então maiores investigações. Nem todos os erros resultam dos equipamentos ou pessoal de teste. Muitos são inerentes a problemas do paciente, como: Idade (recém-nascido e idoso) Foto de um recém-nascido As aloaglutininas do Sistema ABO são predominantemente IgM. Se o anti-a e/ou anti-b for esperado no soro de uma pessoa e não puder ser demonstrado, isso pode indicar que o paciente o doador produz menos IgM que o normal. Os níveis de IgM são muito baixos no nascimento, e o recémnascido consegue produzir quantidades limitadas de IgM. Os níveis de IgM aumentam gradativamente durante os primeiros 18 meses de vida e, em geral, diminuem com o avanço da idade. A titulação das aloaglutininas ABO reflete essas mudanças. Leucemias, carcinomas, linfomas Fotomicrografia de esfregaço sanguíneo mostrando células leucêmicas Ocasionalmente, a amostra de um paciente apresentando leucemia aguda pode parecer que contém populações de hemácias de dois grupo sanguíneos diferentes, pois algumas células perdem todo o seu antígeno original, enquanto que outras retêm pequenas quantidades. No decorrer da doença, a reatividade das células pode se tornar progressivamente mais fraca e, em casos extremos, as células dos pacientes do grupo A ou grupo B parecer ser do grupo O. Isso tem sido demonstrado como resultado da redução nos níveis de transferase. Quando o paciente está em remissão, o tipo de hemácia pode voltar ao normal. Quando as hemácias apresentam aglutinação incomumente fraca ou em campo misto com anti-a ou anti-b ou um paciente com aparente grupo O reverte para os grupos A ou B, as informações para o diagnóstico clínico devem ser buscadas. Se a leucemia aguda for o diagnóstico, serão necessários testes adicionais, possivelmente incluindo análise molecular, para determinar o verdadeiro grupo do paciente antes da transfusão. Drogas imunossupressoras/ doenças por imunodeficiência Injeção de ciclosporina e cápsulas de gelatina A capacidade do organismo em produzir IgM pode ser afetada por doenças e por

6 drogas imunossupressoras. Portanto, quando as aloaglutininas esperadas são fracas ou estão ausentes, são necessárias informações sobre a idade e diagnóstico do indivíduo sendo testado. Se a amostra for de um bebê recém-nascido ou uma pessoa idosa, a falha em reverter o grupo conforme esperado é provavelmente apenas um reflexo da idade. Um diagnóstico de hipogamaglobulinemia ou leucemia é consistente com a redução na produção de imunoglobulina. Ao testar bebês, idosos ou pacientes com doenças, nos quais os níveis de IgM são reconhecidamente inferiores ao normal, a prova reversa pode ser enganosa. Sob essas circunstâncias, a única alternativa é confiar nos resultados dos testes de hemácias. Níveis anormais de globulina Ocasionalmente, as aloaglutininas esperadas não são demonstráveis no soro ou plasma de adultos saudáveis. Embora isso pode não seja significativo, pode indicar que o antígeno correspondente está presente nas hemácias do indivíduo. A observação de uma reação fraca no teste de hemácias pode ter sido negligenciada porque os tubos de ensaio foram agitados muito vigorosamente ou as lâminas foram lidas com pressa. Ou então, o antígeno é tão fraco que requer reagentes ou técnicas especiais para ser detectado. Pacientes recentemente transfundidos/transplantados Paciente submetido à transfusão Em geral, aglutinação em campo misto no grupo ABO indica transfusão com sangue de um grupo diferente, como grupo O para grupo A, ou mais significativamente, grupo A para grupo O. Devido à natureza séria da transfusão de sangue de um grupo ABO diferente do próprio grupo do paciente, é extremamente importante solucionar a causa da aglutinação em campo misto, antes da transfusão. Considerar que um paciente é do grupo A ou B, porque alguns das células em sua circulação são A ou B, poderia levar a conseqüências desastrosas. Uma investigação do histórico do paciente pode ajudar a verificar a causa da aglutinação em campo misto. Se transfusões recentes e hemorragia fetomaterna poderem ser conclusivamente excluídas, então outras causas deverão ser consideradas quimera, subgrupo A3, leucemia e Tn poliaglutinação. Antígenos ou subgrupos fracos São esperadas reações fortes ao testar as hemácias dos grupos A, B e AB com anti-soros reagentes. A aglutinação fraca no grupo de hemácias pode indicar que o sangue é de um indivíduo que pertence a um subgrupo de A ou B. Essa é a explicação mais provável quando são observadas reações em uma pessoa saudável, como um doador de sangue. Os Soros Anti-A,B do Grupo Sanguíneo podem detectar alguns subgrupos de A e B, que não reagem com os reagentes anti-a ou anti-b. Nos doadores, existe o risco de que os subgrupos de A ou B podem ser tipados erroneamente e a unidade identificada como grupo O. Outros métodos sorológicos ou moleculares podem ser necessários para detectar esses antígenos expressos fracamente. Antígenos adquiridos de distúrbios intestinais Micrografia eletrônica de varredura debactérias E. coli no processo de divisão Alguns indivíduos do grupo A apresentando obstrução intestinal, carcinoma do cólon ou reto e outros distúrbios no baixo intestino adquirem um antígeno tipo B. A reação observada entre o anti-b e o antígeno B adquirido geralmente é fraca, sendo dispersada com facilidade. O aumento na permeabilidade da parede intestinal permite a passagem de enzimas bacterianas para a circulação. Essas enzimas atuam no açúcar terminal do antígeno A, causando a aglutinação das hemácias do paciente pelo anti-b (além de sua reatividade original com o anti-a, que não é afetada). Entretanto, na prova reversa, os resultados observados são os mesmos esperados de uma pessoa do grupo A; isso é, o anti-b está presente somente no soro. Se a condição intestinal melhorar, as hemácias voltam ao normal e não reagem mais com o anti-b. Poliaglutinação A poliaglutinação das células do sangue não tem relação direta com o sistema ABO; a poliaglutinação é discutida aqui, pois é inicialmente observada com mais freqüência ao testar-se com anti-a e anti-b policlonal. Muitas formas de poliaglutinação foram descritas, mas as melhores compreendidas são T, Tn, Tk e Cad. Cada uma dessas formas pode causar reações discrepantes, ao testar-se com reagentes anti-a e/ou anti-b. A poliaglutinabilidade de T e Tk resulta da exposição dos receptores de hemácias T e Tk. Portanto, cada receptor (antígeno) pode reagir com seu respectivo anticorpo (anti-t e anti-tk), normalmente presente no soro da maioria dos adultos. Os receptores de T ou Tk nas células são expostos pela ação das enzimas bacterianas in vivo ou, às vezes, in vitro. Deve-se suspeitar da poliaglutinação, se um antígeno e o anticorpo correspondente parecerem estar presentes na mesma amostra de sangue. É comum que as células com um antígeno B adquirido sejam T-ativadas também. Aparentemente, o mesmo organismo

7 produz ambas as enzimas que causam esses fenômenos. Hoje, a presença desses antígenos enzimaticamente expostos a antígenos crípticos é raramente detectada, devido ao uso quase exclusivo de reagentes ABO monoclonais. Aloanticorpos Se um soro ou plasma reagir com as células A1 e B, mas as hemácias não parecerem ser do grupo O, é muito provável que a reação ocorreu devido a um aloanticorpo inesperado do que devido ao anti-a ou anti-b. Todo anticorpo, que consegue aglutinar as células suspensas em solução salina em temperatura ambiente, consegue reagir com as células da prova reversa, se carregarem o antígeno apropriado. Anti-M, anti-p1, anti-a1, anti-lea e anti-leb, bem como outras aglutininas frias, interferem na prova reversa ocasionalmente; mas, de um ponto de vista econômico, não é viável para os fabricantes selecionar células A e B que sejam exclusivamente M negativo, P1 negativo e Le(a-b-). Se um soro reage com as células de triagem do grupo O, quando testadas sob as mesmas condições que as células A ou B, esse soro contém um anticorpo inesperado, que pode ser o responsável pela aglutinação das células na prova reversa. Se as células da triagem de anticorpos não forem aglutinadas pelo soro, qualquer reatividade com as células A ou B é quase certamente causada pelo anti-a ou anti-b. Se as células forem do grupo A, a explicação mais provável é o anti-a1 no soro de um subgrupo de A. Existe uma possibilidade menor de ser um anticorpo direcionado contra um antígeno, que tenha baixa incidência na população geral (como Mg), mas que esteja presente, por acaso, nas células A ou B. A presença do anti-a1 deve ser confirmada por testes com células adicionais A1, A2 e O, conforme descrito em outras publicações. Excesso de substância A ou B Fluido ascítico de cistos ovarianos de secretoras podem conter titulações muito altas de substâncias do grupo ABH. Ocasionalmente, a substância(s) pode ser encontrada no soro do paciente em quantidades grandes o suficiente para neutralizar os reagentes da tipagem Anti-A e/ou Anti-B, especialmente se RBCs não-lavados de pacientes forem usados para o teste de ABO. A discrepância ABO pode ser resolvida, usando RBCs lavados e suspensos em solução salina de pacientes para a tipagem direta. As Resoluções das Discrepâncias ABO Resolução das discrepâncias ABO Uma discrepância entre a prova de hemácias e a prova reversa ou um resultado incomum no teste de hemácias provavelmente não ocorre devido a um problema técnico. Contudo, algumas etapas devem ser seguidas para eliminar possíveis erros laboratoriais, antes de realizar outros testes. As etapas para a resolução incluem: 1. Verificar todas as identificações 2. Obter novas amostras de paciente 3. Verificar os registros de paciente 4. Verificar os equipamentos e reagentes quanto ao controle da qualidade apropriado 5. Usar reagentes de teste complementares 6. Realizar outros procedimentos de teste, como redução da temperatura de reação, adsorção/eluição e estudos do secretor Observando o quadro geral, ou seja, os resultados de teste da célula e soro e o histórico do paciente ou doador, podemos obter dicas sobre a razão para os resultados incomuns do teste de ABO. As seguintes situações problemáticas representam uma amostragem de alguns dos vários problemas que podem ser encontrados no laboratório do banco de sangue. Cada situação problemática oferece a oportunidade de você comparar os métodos de seu laboratório, para resolver discrepâncias similares. Observação: Talvez nem todos os testes especiais sejam necessários para resolver as discrepâncias descritas e os atuais avanços nas técnicas moleculares permitem a resolução definitiva de muitas discrepâncias sorológicas ABO. Situação Problema # 1 1. Anti-A Anti-B negativo 3. As células de A Células B Interpretar teste de rotina 1. Um grupo para a frente 2. Grupo reversa, discrepância com as células de A1 1. Anti-A1 lectina determina grupo A1 2. Anti-H força de reacção determina o subgrupo 3. Células A2 determinar a presença 4. de anti-a1 5. Células O descarta aloanticorpos temperatura ambiente 6. Paciente autocontrolo r / o autoanticorpos 4. Resultados do teste especiais 1. Anti-A1 lectina negativo 2. Anti-H Células A2 negativos 4. As células S negativos 5. Autocontrole paciente negativo 1. Negativa com anti-a1 lectina: grupo de doentes não é A1 2. Positivo anti-h: 3 + sugere uma reacção de um subgrupo, com excepção de A1 ou A intermediário 3. Negativo com células A2: um subgrupo que desenvolveu anti-a1 4. Negativo com células O: paciente não tem um aloanticorpo temperatura ambiente 5. Autocontrole paciente negativo: exclui auto-anticorpos

8 Figura 1: 6. Conclusão: Subgrupo de A, provavelmente A2, que desenvolveu Anti-A1 Situação Problema # 2 1. Anti-A Anti-B As células de A Células B Interpretar teste de rotina 1. Para a frente, Grupo AB; reversa Grupo O 2. Opções 1. Alta freqüência frio aloanticorpo (reagindo 2. com células reversas) 3. o problema do paciente 1. frio de auto-anticorpos 2. estado de doença 1. Paciente autocontrolo r / o autoanticorpos ou interferência de proteínas anormais 2. mais testes 1. Células de lavar; substituição de soro ou soro diluído 2. datilografar novamente 3. Estudos secretoras se não for resolvido por 1 & 2 4. Resultado de teste especial 1. Autocontrole paciente Autocontrole paciente positivo consistente com diagnóstico de mieloma múltiplo e produção de proteínas anormais Figura 2: 6. Conclusão: discrepância ABO devido ao diagnóstico do paciente de mieloma múltiplo Situação Problema # 3 2. Anti-A negativo 3. Anti-B negativo 4. As células A1 negativos 5. Células B negativos 2. Interpretar exames de rotina 6. Para a frente, o grupo S; reversa Group AB 7. opções Figura 3: 1. Problemas do paciente, causando perda de antígenos ou perda de anticorpos 1. Verificar os registros dos pacientes 1. idade 2. diagnóstico 3. medicação 4. Os níveis de imunoglobulina 2. Incubação a 22 º ou 4 º C para aumentar a expressão ABO fraco (inclui autocontrolo para r / o presença de autoanticorpos + Grupo células tela O para descartar presença de frioaloanticorpos que reagem) 4. Conclusão: discrepância ABO devido ao problema do paciente Situação Problema # 4 3. Anti-A negativo 4. Anti-B negativo 5. As células de A Células B Interpretar exames de rotina 1. Frente e verso, Grupo O 3. Ensaio especiais (sugerido por incompatibilidade com o soro do paciente células O, células tanto de tela e unidades S crossmatched com soro de um paciente; pode ser devido à presença de anticorpos anti-h) 1. Anti-H lectina para determinar se o paciente é um O 2. Autocontrole paciente para r / o auto-anticorpos 4. Resultados do teste especiais 1. Anti-H negativo 2. Autocontrole paciente negativo Figura 4: 1. Negativa com anti-h: o paciente NÃO é Grupo O 2. Autocontrole negativo: r / o autoanticorpos 6. Conclusão: O paciente é, provavelmente, um raro Bombay, Oh; paciente pode receber apenas Oh células Situação Problema # 5 (usando reagentes policlonais) 1. Anti-A Anti-B As células A1 negativos 4. Células B

9 2. Interpretar exames de rotina 1. Para a frente do grupo AB 2. Inverter o grupo A 1. Anti-A1 lectina determina grupo A 2. B-Anti de doador não-imunizado confirmará reação de um verdadeiro grupo B 3. Monoclonal anti-a e anti-b irá detectar verdadeiras antígenos e não reagir com antígenos adquiridos 4. O a r células / oa aloanticorpo temperatura ambiente que reagiu com as células B reagentes 5. Absorção / eluição estudos para testar a presença do antígeno B verdadeiro 6. Estudo secretor determina o tipo de verdadeiro ABO 4. Resultados do teste especiais 1. Anti-lectina A Anti-B (dos não imunizados doador) negativo 3. Células O negativas 4. Um monoclonal anti Anti-B * monoclonal negativo 6. Adsorção / eluição de estudos: 7. nenhum antígeno B 8. Estudo secretor: secretores A 1. Positivo com Anti-A1 lectina: confirma grupo A1 2. Negativa com Anti-B (dos não imunizados doador): o paciente não tem antígeno B verdadeiro 3. Positiva com anti-a e negativa com reagente anti-b monoclonal confirma grupo A 4. Negativo com células O: paciente não tem um aloanticorpo temperatura ambiente, que reage com as células B reagentes 5. Adsorção / eluição estudos revelam nenhum antígeno B 6. Secretor A: doente é um grupo A Figurea5: 6. Conclusão: O paciente é do Grupo A1 com um adquirido antigénio B, verificar o diagnóstico do paciente para infecções bacterianas, especialmente para GI carcinoma; estudos adicionais podem incluir estudos de eluição de adsorção e para determinar a presença ou ausência de antigénio B; paciente pode com segurança ser transfundido com Grupo As células A ou O * Pode variar com o fabricante Situação Problema # 6 1. Anti-A Anti-B As células de A Células B negativos 2. Interpretar exames de rotina 1. Para a frente do grupo AB 2. Inverter grupo B 1. O células r / o quarto temperatura aloanticorpos 2. Células de A1 a partir de um número de lote diferente de corrente para determinar se as células de A1 contêm antigénio para a qual o soro do paciente contém aloanticorpo (pode ser necessário determinar o aloanticorpo, se estiver presente, e, em seguida, as células de antigénios do tipo A1 antes de chegar a uma conclusão) 3. Paciente autocontrolo r / o autoanticorpos 4. Forte reacção com anticorpos anti-a e anti-b não indica testes suplementares para confirmação dos antigénios A e B 4. Resultados do teste especiais 1. As células O + 2. As células A1 a partir de número de lote diferente negativo 3. Autocontrole paciente negativo Figura 6: 1. Positiva com as células O: indica paciente tem aloanticorpo temperatura ambiente 2. Células de resultado negativo A1: sugere a presença de aloanticorpo temperatura ambiente que reagiu com rotina células A1 3. Autocontrole paciente negativo: r/o auto-anticorpos 6. Conclusão: O paciente é do Grupo AB com aloanticorpo reativo temperatura ambiente para o qual a corrente de ensaio A célula continha o antigénio; painel da célula deve ser feito para determinar a especificidade do anticorpo, podem ser transfundidos paciente com Grupo AB Situação Problema # 7 (usando reagentes policlonais) 1. Anti-A + / - 2. Anti-B negativo 3. Reverter digitando não fez no sangue do cordão umbilical 2. Interpretar exames de rotina 1. Grupo frente sugerem Grupo A (?) 1. Lave as células para remover proteínas interferentes 2. Heelstick amostra não contém proteínas interferentes 3. Redigite utilizando antisoro monoclonal que reage especificamente e muito mais

10 fortemente com um pequeno número de locais de antigénio em células positivas 4. Resultados do teste especiais 1. Células lavadas, os mesmos resultados 2. Exemplo, Heelstick mesmos resultados 3. anti-soro monoclonal 1. Anti-A Anti-B negativo 1. Mesmos resultados com células lavadas indica que os problemas de digitação não são devido às proteínas interferentes 2. Mesmos resultados com amostra heelstick indica que o problema de digitação não é devido às proteínas interferentes positiva com anticorpos monoclonais anti-a indica Grupo A Figura 7: 6. Conclusão: infantil é provavelmente um Um grupo; confirme prova reversa após 6 meses de idade Ortho-Clinical Diagnostics, Inc 2013