ScanGel NEUTRAL Cards Cards
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- Vanessa de Paiva Belo
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1 ScanGel NEUTRAL Cards Cards GEL NEUTRO Grupo ABO, despiste de Ac irregulares, compatibilidade IVD Todos os produtos fabricados e comercializados pela empresa Bio-Rad são submetidos a um sistema de garantia de qualidade, desde a recepção das matérias primas até à comercialização dos produtos acabados. Cada lote de produto acabado é objecto de um controlo de qualidade, sendo comercializado apenas quando em conformidade com os critérios de aceitação. A documentação relativa à produção e ao controlo de cada lote é conservada pelo fabricante. 53
2 I - UTILIZAÇÃO E PRINCÍPIO DO TESTE Esta card é estritamente reservada a uso profissional em diagnóstico in vitro. Destinado à realização da comprovação sérica de grupo ABO, à detecção (despistagem e identificação) de anticorpos irregulares anti-eritrocitários e ao teste de compatibilidade, o teste combina os princípios de aglutinação e filtração em gel. A reacção é obtida e lida após centrifugação de microtubos especialmente concebidos, cheios com gel neutro. A suspensão de glóbulos vermelhos e o soro ou o plasma são depositados no poço de microtubos e centrifugados após um período de incubação. Os glóbulos vermelhos não aglutinados concentram-se no fundo do microtubo, enquanto que os aglutinados são retidos à altura do gel, consoante a sua dimensão. A posição no gel determina a intensidade da reacção II - CARACTERÍSTICAS DOS REAGENTES Os microtubos da card ScanGel NEUTRAL contêm um gel neutro. Este reagente contem azida de sódio (< 0,1%) como conservante. O código do produto e o número de placas por embalagem são mencionados no rótulo da embalagem. III - CONSERVAÇÃO - VALIDADE A data limite de utilização e as condições de armazenamento são indicados na embalagem. As cards devem ser conservadas à temperatura ambiente de +15 C a +25 C. As cards devem ser armazenadas verticalmente, ao abrigo de qualquer fonte de calor e num local com reduzida variação de temperatura e higrometria. IV - ADVERTÊNCIAS E PRECAUÇÕES A fiabilidade dos resultados depende da execução correcta das seguintes Boas Práticas de Laboratório : Não utilizar reagentes que excedam o prazo de validade indicado no rótulo. Não utilizar cards que apresentem sinais de secagem, bolhas ou o cujo selo de vedação esteja danificado ou partialmente retirado. É essencial tomar precauções por forma a evitar contaminação entre os microtubos e, particularmente, durante as fases de distribuição de reagentes. 54
3 Utilizar uma ponta de pipeta diferente para cada amostra e para cada glóbulo vermelho de teste. Verificar a precisão e o bom funcionamento das pipetas e outros equipamentos. Usar luvas e óculos de protecção durante a manipulação de reagentes e de amostras. Nunca pipetar directamente para a boca. Evitar derramamentos. Em caso de derramamento, lavar por meio de lixívia 12 Cl, diluída a 1/10, e limpar com papel absorvente. O material utilizado para limpar deverá ser eliminado num recipiente para resíduos contaminados. Os consumíveis e outros produtos que tenham estado em contacto com amostras ou reagentes contendo material de origem humana devem ser eliminados depois da sua descontaminação. As fichas de segurança podem ser adquiridas a pedido. V - COLHEITA E TRATAMENTO DAS AMOSTRAS O sangue deve ser assepticamente recolhido num tubo sem ou com anti-coagulante (EDTA, CPD). A análise deve ser realizada o mais brevemente possível após a colheita. As amostras que não puderem ser analisadas rapidamente deverão ser conservadas a uma temperatura entre +2 C e +8 C e submetidas a análise nas 48 horas seguintes. Em nenhum caso deverá ser visível hemólise. Não aquecer as amostras. VI - TÉCNICAS Material fornecido Cards ScanGel NEUTRAL Outros materiais necessários mas não fornecidos Incubadora : ScanGel Incubator IH QC : Controlo serológico de grupo sanguíneo IH QC 4 x 6 ml Centrifugadora : ScanGel Centrifuge Pipetas automáticas ou semi-automáticas Pontas de pipeta Tubos descartáveis Recipiente para resíduos de risco biológico Lixívia Luvas de látex Papel absorvente Óculos de protecção 55
4 Controlos Recomenda-se efectuar, em paralelo com cada teste, um autocontrolo (soro ou plasma e glóbulos vermelhos do doente) para detecção e identificação de anticorpos irregulares. Controlos positivo (soro conhecido, contendo, pelo menos, um anticorpo) e negativo (soro conhecido não contendo qualquer anticorpo). IH QC : Controlo serológico de grupo sanguíneo. Procedimento O procedimento deve ser estritamente seguido. Todos os reagentes devem ser levados à temperatura ambiente antes da utilização. Por centrifugação (2000 g x 2 minutos) separar o soro ou o plasma dos glóbulos vermelhos da amostra a analisar. No caso de o sangue ser recolhido em tubo seco, o soro deve ser recentrifugado a 1500r durante 10 minutos. 1 - Comprovação sérica de grupo ABO Reagentes necessários mas não fornecidos ReverScan A1, A2, B et O : Teste de glóbulos vermelhos para grupo ABO ReverScan A1, B x 5 ml ReverScan A1, A2, B, O x 5 ml Técnica Utilizar os glóbulos vermelhos de teste, prontos a utilizar, ReverScan A1, A2, B ou O. 1. Identificar cada placa ou parte de placa (consoante o número de glóbulos vermelhos de teste, utilizados para a amostra) pelo nome ou número da amostra correspondente; para cada microtubo, identificar o glóbulo vermelho a distribuir. Retirar a totalidade da patilha de alumínio das placas. Ressuspender as hemácias antes da sua utilização. 2. Depositar 50 µl de cada suspensão de glóbulos vermelhos de teste no poço dos microtubos correspondentes. 3. Adicionar 50 µl de soro ou de plasma a testar no poço de todos os microtubos correspondentes à amostra testada. 4. Incubar durante 15 minutos, à temperatura ambiente (+15 C +25 C). 5. Centrifugar durante 10 minutos, na ScanGel Centrifuge. 6. Ler as reacções. 56
5 2 - Despistagem e identificação dos anticorpos irregulares anti-eritrocitários por técnica enzimática em 2 tempos Reagentes necessários mas não fornecidos Papaína Bio-Rad Papaína 2 ml ScanSol : meio de suspensão de glóbulos vermelhos ScanSol 100 ml ScanSol 500 ml ScanCell P, ScanPanel P : glóbulos vermelhos de teste, prontos a utilizar, previamente tratados com papaína, para detecção e identificação de anticorpos irregulares anti-eritrocitários por técnica enzimática, em 2 tempos ScanCell P 3 x 10 ml ScanPanel P 10 x 3 ml a) Tratamento com papaína e preparação de suspensão de glóbulos vermelhos se estes não estiverem prontos a utilizar (autocontrolo) Lavar os glóbulos vermelhos 3 vezes em solução salina isotónica. Adicionar, volume a volume, a papaína reconstituída e o fundo globular. Misturar. Incubar durante 7 minutos a +37 C em banho-maria. É importante respeitar estritamente este tempo de contacto entre as hemácias e a papaína. Lavar 3 vezes em solução salina isotónica. Distribuir 1 ml de ScanSol num tubo descartável, identificado. Adicionar 10 µl de fundo globular com papaína, lavado. Misturar. A suspensão de glóbulos vermelhos pode ser utilizada durante uma semana, devendo ser conservada a uma temperatura entre +2 C e +8 C. b) Técnica 1. Identificar cada placa ou parte de placa (consoante o número de glóbulos vermelhos de teste, utilizados para a amostra) pelo nome ou número da amostra correspondente; para cada microtubo, identificar o glóbulo vermelho a distribuir. Retirar a totalidade da patilha de alumínio das placas. Ressuspender as hemácias antes da sua utilização. 2. Depositar 50 µl de cada suspensão de glóbulos vermelhos de teste, prontos a utilizar ScanCell P ou ScanPanel P ou da suspensão de glóbulos vermelhos preparada em 2- a) no poço dos microtubos correspondentes. 57
6 3. Adicionar imediatamente 25 µl de soro ou de plasma a testar no poço dos microtubos correspondentes à amostra testada. O tempo de espera entre a distribuição de glóbulos vermelhos e a do plasma ou soro não deverá, em caso algum, exceder os 10 minutos. 4. Incubar durante 15 minutos, a +37 C na ScanGel Incubator. 5. Centrifugar durante 10 minutos, na ScanGel Centrifuge. 6. Ler as reacções. 3 - Teste de compatibilidade A. Técnica enzimática em 2 tempos Reagentes necessários mas não fornecidos Papaína Bio-Rad Papaína 2 ml ScanSol : meio de suspensão de glóbulos vermelhos ScanSol 100 ml ScanSol 500 ml a) Tratamento com papaína e preparação das suspensões de glóbulos vermelhos (dadores) Para cada dador : Lavar os glóbulos vermelhos a testar 3 vezes em solução salina isotónica. Adicionar, volume a volume, a papaína reconstituída e o fundo globular (glóbulos vermelhos do dador). Misturar. Incubar durante 7 minutos a +37 C em banho-maria. É importante respeitar estritamente este tempo de contacto entre as hemácias e a papaína. Lavar 3 vezes em solução salina isotónica. Distribuir 1 ml de ScanSol num tubo descartável, identificado. Adicionar 10 µl de fundo globular com papaína, lavado. Misturar. A suspensão de glóbulos vermelhos está pronta a ser utilizada. b) Técnica 1. Identificar cada card ou parte da card pelo nome ou número do receptor e o número do ou dos dadores correspondentes. Retirar a totalidade da patilha de alumínio das cards. Ressuspender as hemácias antes da sua utilização. 2. Depositar 50 µl de cada suspensão de glóbulos vermelhos preparada em 3-A.a) no poço dos microtubos correspondentes. 3. Adicionar imediatamente 25 µl de soro ou de plasma do receptor no poço dos microtubos correspondentes. O tempo de espera entre a distribuição da suspensão de glóbulos vermelhos e a do soro ou plasma não deverá, em caso algum, exceder os 10 minutos. 58
7 4. Incubar durante 15 minutos, a +37 C na ScanGel Incubator. 5. Centrifugar durante 10 minutos, na ScanGel Centrifuge. 6. Ler as reacções. B. Técnica enzimática em 1 tempo Reagentes necessários mas não fornecidos ScanLiss : meio de suspensão de glóbulos vermelhos ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml ScanBrom : Bromelina pronta a utilizar ScanBrom 12 ml a) Preparação das suspensões de glóbulos vermelhos (dadores) Para cada dador : Distribuir 1 ml de ScanLiss num tubo descartável identificado. Adicionar 10 µl de fundo globular (glóbulos vermelhos do dador). Misturar. A suspensão de glóbulos vermelhos está pronta a ser utilizada. b) Técnica 1. Identificar cada card ou parte da card pelo nome ou número do receptor e o número do ou dos dadores correspondentes. Retirar a totalidade da patilha de alumínio das cards. Ressuspender as hemácias antes da sua utilização. 2. Depositar 50 µl de cada suspensão de glóbulos vermelhos preparada em 3-B.a) no poço dos microtubos correspondentes. 3. Adicionar imediatamente 25 µl de soro ou de plasma do receptor no poço dos microtubos correspondentes. O tempo de espera entre a distribuição da suspensão de glóbulos vermelhos e a do soro ou plasma não deverá, em caso algum, exceder os 10 minutos. 4. Adicionar 25 µl de ScanBrom no poço de cada microtubo. 5. Incubar imediatamente durante 15 minutos, a +37 C na ScanGel Incubator. 6. Centrifugar imediatamente durante 10 minutos, na ScanGel Centrifuge. O período de espera entre o final da incubação e o início da centrifugação não deverá, em caso algum, exceder os 10 minutos. 7. Ler as reacções. VII - RESULTADOS E INTERPRETAÇÃO A presença de aglutinados (à superfície ou dispersos no gel) ou de uma hemólise corresponde a um resultado positivo, indicador de que a amostra testada contém pelo menos um anticorpo correspondente aos antigénios presentes à superfície dos glóbulos vermelhos testados. 59
8 Um fundo de glóbulos vermelhos concentrados na base do microtubo e a ausência de hemólise corresponde a um resultado negativo, indicador de que a amostra testada não contém anticorpos correspondentes aos antigénios presentes à superfície dos glóbulos vermelhos testados, detectável pela técnica utilizada. Os resultados são válidos unicamente se os controlos positivo e negativo fornecerem os resultados esperados. 1 - Comprovação sérica de grupo ABO Um grupo ABO completo comporta 2 testes complementares : o teste globular realizado com os reagentes anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) e anti-abo3, e o teste sérico realizado com os glóbulos vermelhos de teste A1, B, e eventualmente A2 e O. Os perfis das reacções esperadas com os reagentes anti-abo1 (A), anti-abo2 (B), anti-abo3 (AB) e os glóbulos vermelhos de teste A1, A2, B, O, bem como as respectivas interpretações, são apresentados no quadro seguinte : GRUPOS TESTE SÉRICO : GLÓBULOS TESTE GLOBULAR : REAGENTES VERMELHOS TESTE Anti-ABO1 (A) Anti-ABO2 (B) Anti-ABO3 (AB) A1 A2 B O A B AB O O teste globular e o teste sérico devem ser concordantes. Qualquer divergência entre os testes globular e sérico deve ser resolvida antes de se confirmar um resultado do grupo ABO. Sempre que se observe uma divergência entre os testes globular e sérico, dever-se-á proceder a testes complementares com os controlos apropriados. 2 - Despistagem e identificação dos anticorpos irregulares anti-eritrocitários por técnica enzimática em 2 tempos Um resultado negativo (ausência de aglutinação e de hemólise) em cada um dos microtubos utilizados significa que o soro ou o plasma testado não contém anticorpos correspondentes aos antigénios presentes nos glóbulos vermelhos de teste, detectáveis pela técnica utilizada. Inversamente, um resultado positivo (aglutinação e/ou hemólise) num dos microtubos utilizados permite comprovar a presença de um ou mais anticorpos no soro ou no plasma. Uma identificação deste(s) anticorpo(s) deverá ser realizada. 60
9 Um resultado positivo no microtubo de autocontrolo pode indicar a presença de um anticorpo. Se, para além do autocontrolo, pelo menos um dos glóbulos vermelhos se apresentar aglutinado, deverá considerar-se a necessidade de uma mistura auto-anticorpo/alo-anticorpo. Só podem ser detectados os anticorpos correspondentes aos antigénios presentes nos glóbulos vermelhos. No âmbito de uma identificação, a análise comparada entre as reacções positivas e as reacções negativas observadas com cada um dos glóbulos vermelhos teste do painel utilizado, permite caracterizar, com a ajuda da ficha de análise que acompanha o painel, a ou as especificidades dos anticorpos presentes no soro (ou plasma) testado. 3 - Teste de compatibilidade Um resultado positivo (aglutinação e/ou hemólise) demonstra a existência de uma incompatibilidade entre o soro ou o plasma do receptor e os glóbulos vermelhos do dador. VIII - DESEMPENHOS 1 - Comprovação sérica de grupo ABO As hemácias ReverScan (A1, A2, B, O) foram avaliadas num painel de 1132 amostras. Cada resultado foi comparado com o obtido em técnica de placa, microplaca ou filtração em gel. No total das amostras, 1130 deram resultados conformes com os esperados e 2 apresentaram discordâncias com um dos métodos utilizados em paralelo, as quais puderam ser eliminadas após confrontação com o teste globular. Qualquer que seja a amostra testada, as hemácias ReverScan associadas às card ScanGel NEUTRAL. apresentam boa reprodutibilidade, tanto intra como inter-ensaio. 2 - Despistagem e identificação dos anticorpos irregulares anti-eritrocitários por técnica enzimática em 2 tempos A avaliação dos desempenhos realizada em 2517 amostras (1783 doentes e 734 dadores) evidenciou uma reacção equilibrada entre sensibilidade e especificidade. Cada resultado foi comparado com o obtido em técnica de imunoaderência ou filtração em gel. A percentagem global de doentes comprovados como positivos na detecção de anticorpos irregulares (despistagens positivas tendo como resultado a identificação de um ou mais alo e/ou auto-anticorpos) é de 3.8%. A especificidade numa amostragem de doentes globais é de 98.8%. Dado que certos antigénios, como MNS1(M), MNS2(N), MNS3(S), FY1(Fy a ), FY2(Fy b ) e XG1(Xg a ), são destruídos ou alterados com o tratamento dos glóbulos vermelhos com enzimas proteolíticos, a técnica enzimática não 61
10 pode ser utilizada como única técnica para detecção de anticorpos irregulares anti-eritrocitários. A reprodutibilidade da aplicação foi testada e demonstrou bons desempenhos, tanto intra como inter ensaios. 3 - Teste de compatibilidade A avaliação dos desempenhos forneceu resultados concordantes com o reagente utilizado como referencial. Cada resultado foi comparado com o obtido em técnica de filtração em gel. Algumas incompatibilidades não puderam ser demonstradas apenas através deste teste; no entanto, foram demonstradas pelo teste indirecto de antiglobulina, em técnica ScanGel. Além disso, certos antigénios, como MNS1(M), MNS2(N), MNS3(S), FY1(Fy a ), FY2(Fy b ) e XG1(Xg a ) são destruídos ou alterados ao tratar-se os glóbulos vermelhos com enzimas proteolíticos. A técnica enzimática não pode, por isso, ser utilizada como única técnica para o teste de compatibilidade. A reprodutibilidade da aplicação foi testada e demonstrou bons desempenhos, tanto intra como inter ensaios. LIMITAÇÕES A obtenção de resultados anómalos pode ser provocada por : uma contaminação bacteriana ou química do soro, do plasma, dos glóbulos vermelhos ou do material. uma medicação ou um estado patológico do doente, fornecendo uma reacção cruzada. a utilização de um meio de suspensão de glóbulos vermelhos diferente do preconizado. uma colocação em suspensão incompleta dos glóbulos vermelhos. uma preparação de glóbulos vermelhos diferente da preconizada. uma hemólise das amostras ou dos glóbulos vermelhos de teste. a presença de fibrina (imagem de um fundo celular compacto na base de um microtubo, acompanhada de uma fina faixa rosada no cimo do gel, correspondente aos glóbulos vermelhos retidos pelos resíduos de fibrina). contaminação entre os microtubos. uma degradação da actividade enzimática da bromelina ou da papaína para as técnicas enzimáticas (incumprimento das instruções de conservação). utilização de outro procedimento para além do descrito em seguida. Sob licença da DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Suíça 62
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12 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2007 Fax.: Code:
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