CONTROLE Rh Monoclonal
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- Marta da Mota Lopes
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1 CONTROLE Rh Monoclonal PROTHEMO Produtos Hemoterápicos Ltda. Controle negativo das classificações Rh - Hr PARA TESTES EM LÂMINA OU TUBO Somente para Uso Diagnóstico IN VITRO Conservar entre: 2-8 C Não congelar Conservante: Azida de Sódio, 0,1% Responsável Técnico: Carla C.L.Abreu CRF:
2 PRINCÍPIO DO TESTE Os reagentes Prothemo Anti-D e Anti-CDE, empregados nas classificações do sistema Rh, possuem em sua formulação, aditivos macromoleculares que otimizam a reatividade dos mesmos nos testes em lâmina e tubo. Essas substâncias associadas ao meio protéico aumentam a possibilidade de reações falsas em função de anormalidades da amostra. Para se avaliar o efeito isolado do meio potencializado da amostra em análise, um teste controle deve ser realizado em paralelo, utilizando-se o Controle Rh Prothemo. O Controle Rh Prothemo possui formulação idêntica à dos reagentes Anti- D e Anti-CDE Prothemo, exceto no que se refere à presença dos anticorpos específicos presentes em cada um dos mesmos. O teste controle deve ser realizado em paralelo a todos os testes onde se utilizam os reagentes Anti-D e Anti-CDE Prothemo, para que sejam detectadas falsas reações positivas causadas por rouleaux, aglutininas frias ou autoanticorpos. Os resultados positivos obtidos com o uso dos reagentes Anti - Rh-Hr Prothemo, seja pelos testes em lâmina, em tubo ou nas fases de Antiglobulina Humana, são validados pela ausência de aglutinação no teste controle, onde se adiciona uma gota do Controle Rh no lugar dos reagentes Anti-Rh-Hr. DESCRIÇÃO DO PRODUTO O reagente contém: Cloreto de Sódio, Albumina Bovina, Tampão Fosfato, Potencializadores e Azida de Sódio a 0.1%. O produto deve ser usado como fornecido, sem adições ou diluições. O produto é fornecido em frascos de 10 ml, acompanhados de conta-gotas. Cada gota equivale a 50 µl. CONTROLE Rh (MONOCLONAL) PROTHEMO Código Embalagem mL x 10 ml
3 MATERIAIS NECESSÁRIOS NÃO FORNECIDOS Teste em lâmina: lâminas de vidro, pipetas Pasteur e salina isotônica. Teste em tubo: tubos de vidro (10 x 75 mm ou 12 x 75 mm), pipetas Pasteur, Banho-Maria a 37 C, centrífuga e salina isotônica. ARMAZENAMENTO E PRECAUÇÕES Conservar em geladeira entre 2 e 8 C. Não congelar ou expor o produto a temperaturas elevadas. Não utilizar após o vencimento. Não utilizar o produto se observar nítida turvação, o que pode indicar contaminação bacteriana ou deterioração do produto. Evitar a contaminação do reagente. Não reutilizar os frascos vazios. SOMENTE PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO. Os materiais de origem biológica devem ser considerados como se fossem potencialmente infectantes. Devem ser estabelecidos métodos adequados para o manuseio e descarte, equivalentes aos utilizados para as amostras de sangue. O não seguimento das instruções de uso pode resultar em diminuição da performance ótima do produto. COLETA DA AMOSTRA O sangue deve ser coletado por procedimento asséptico aprovado, com ou sem adição de anticoagulante. As hemácias obtidas de coágulo podem ser tipadas em até 5 dias após sangria. As amostras coletadas em EDTA ou Heparina devem ser tipadas em até 48 horas. Se a demora para a execução do teste for inevitável, hemácias de sangue coagulado e as colhidas em EDTA ou Heparina devem ser separadas do soro/plasma, lavadas e ressuspendidas em solução preservativa de glóbulos. Estocar a 2 a 8 C, por no máximo, 20 dias. O sangue coletado em anticoagulante ACD, CPD e CPDA-1 pode ser tipado até a data de expiração, se armazenado entre 2 e 8 C. O armazenamento prolongado de hemácias antes da execução do teste pode causar deterioração de antígenos e resultar em reações mais fracas. PROCEDIMENTO DO TESTE Teste em lâmina: 1 Preparar uma suspensão a 40% da hemácia a ser tipada no próprio soro, plasma ou solução salina à 0,9%.
4 2 Colocar em uma lâmina uma gota do reagente Anti-Rh ou Anti-Hr. Em uma segunda lâmina colocar uma gota do Controle Rh Prothemo (controle negativo). O emprego de aglutinoscópio (37 a 40 C), embora não obrigatório, facilita a observação de reações fracas pelo efeito de iluminação e contraste. O aquecimento excessivo da lâmina pode ser evitado ligando-se o aparelho apenas ao efetuar a leitura. 3 A cada uma das lâminas adicionar 2 gotas da suspensão de glóbulos. 4 Misturar a suspensão com o reagente em uma área de 2x3 cm. 5 Promover a mistura através de movimentos oscilantes da lâmina e examinar a presença ou não de aglutinação macroscópica. Não observar a lâmina por mais de 2 minutos. Não interpretar secagem periférica como aglutinação. Teste em tubo: 1 Preparar uma suspensão a 5% da hemácia a ser tipada em solução salina à 0,9%. 2 Colocar uma gota do Controle Rh PROTHEMO (controle negativo) em um tubo devidamente identificado. Em um segundo tubo, colocar uma gota do reagente Anti-Rh ou Anti-Hr. 3 A cada tubo acrescentar uma gota da suspensão de glóbulos.misturar bem o conteúdo. 4 Centrifugar* os tubos. 5 Ressuspender delicadamente o botão de hemácias e examinar a presença ou não de aglutinação. Anotar o resultado 6 Se negativo, incubar os dois tubos por 15 minutos a 30 minutos a 37 C. 7 Repetir os itens 4 e 5. 8 Caso a leitura permaneça negativa ou duvidosa, proceder à pesquisa para formas fracas do antígeno em estudo. Técnica para pesquisa das formas fracas do antígeno 9 Lavar imediatamente as hemácias com resultado negativo (ou duvidoso) por 3 vezes com solução salina à 0,9%. Remover completamente a solução salina à 0,9% após a última lavagem. 10 A cada tubo adicionar 2 gotas do Soro Anti-IgG Prothemo. Misturar bem. 11 Centrifugar* os tubos. 12 Ressuspender delicadamente o botão de hemácias e observar a presença ou não de aglutinação.
5 *Centrifugação sugerida: 15 segundos a 3400 rpm A força centrífuga aplicada deve ser a mínima necessária para se obter um sobrenadante claro e um botão nitidamente delineado que possa ser ressuspendido facilmente. As centrífugas devem ser calibradas individualmente para se obter o tempo e velocidade ótimos de centrifugação. INTERPRETAÇÃO DO RESULTADO NEGATIVO: a ausência de aglutinação no teste controle valida os resultados positivos obtidos nos testes onde se adicionam os reagentes Anti-Rh ou Anti-Hr. POSITIVO: a presença de aglutinação no teste controle invalida os resultados positivos obtidos nos testes onde são utilizados os reagentes Anti-Rh ou Anti-Hr. Anti-Rh ou Controle Conclusão Anti-Hr Rh - - Ausência do antígeno testado + - Presença do antígeno testado + + Não conclusivo. Vide observações. Observações: 1. Ocorrendo aglutinação com o Controle Rh PROTHEMO, o resultado obtido com o soro classificador não será válido. 2. O resultado falso-positivo poderá ser conseqüência de autoanticorpos, aglutininas frias ou rouleaux. 3. O exame deverá ser repetido utilizando-se um soro salino, seguindo a instrução do mesmo. 4. Caso a reação falso-positiva ocorra na fase de Antiglobulina Humana, provavelmente será conseqüência da presença de anticorpos previamente ligados às hemácias. O teste de Antiglobulina Direto dará positivo. Em se tratando de sangue de doador, o mesmo não deverá ser utilizado para transfusão.
6 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1 - Walker Rh, ed. Technical Manual. 11th Edition. Bethesda: AABB, Race R.R and Sanger R. Blood Groups in Man, 6th Edition Oxford Blackwell Scientific Publishers, Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine. 7th Edition. Oxford Blackwell Scientific, Guidelines for the Blood Transfusion Service H.M.S.O. GARANTIA Este produto é garantido por Prothemo Produtos Hemoterápicos Ltda durante o prazo de validade indicado no rótulo se conservado e utilizado segundo as instruções recomendadas. PROTHEMO PRODUTOS HEMOTERÁPICOS LTDA. C.N.P.J: / Rua Augusto Ferreira de Morais, Socorro CEP: São Paulo - SP - Brasil Atendimento ao Consumidor: Fones: (0xx11) / (0xx11) sac.prothemo@uol.com.br Data da revisão: 15/04/2013 Versão: 002/ 13
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