ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH Cards Cards
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- Diego Ramires Ávila
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1 ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH Cards Cards GEL FORMULADO COM REAGENTES MONOCLONAIS DE ORIGEM MURINA OU HUMANA Prova directa ABO. Determinação dos Ag RH1 IVD Todos os produtos fabricados e comercializados pela empresa Bio-Rad são submetidos a um sistema de garantia de qualidade, desde a recepção das matérias primas até à comercialização dos produtos acabados. Cada lote de produto acabado é objecto de um controlo de qualidade, sendo comercializado apenas quando em conformidade com os critérios de aceitação. A documentação relativa à produção e ao controlo de cada lote é conservada pelo fabricante. 41
2 I - UTILIZAÇÃO E PRINCÍPIO DO TESTE Esta card é estritamente reservada a uso profissional em diagnóstico in vitro. Para prova directa ABO e a determinação dos antigénios RH1 (D), o teste combina os princípios de aglutinação e filtração em gel. A reacção é obtida e lida após centrifugação de microtubos especialmente concebidos, cheios de gel impregnado do reagente específico do antigénio eritrocitário a determinar. A suspensão de glóbulos vermelhos é depositada no poço de cada microtubo e imediatamente centrifugada. Os glóbulos vermelhos não aglutinados concentram-se no fundo do microtubo, enquanto que os aglutinados são retidos à altura do gel, consoante a sua dimensão. A posição no gel determina a intensidade da reacção II - CARACTERÍSTICAS DOS REAGENTES Os três primeiros microtubos da card ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1 contêm, cada um, um gel impregnado de um reagente monoclonal de origem murina, respectivamente de especificidade anti-abo1 (A), anti-abo2 (B) e anti-abo3 (AB). Estes anticorpos são produzidos a partir dos seguintes clones : anti-abo1 (A) : 15750F7 anti-abo2 (B) : X9 anti-abo3 (AB) : AB5-63A5A2/X9 O quarto microtubo contém um gel impregnado de um reagente monoclonal de origem humana e de especificidade anti-rh1(d). Este anticorpo monoclonal é uma IgM segregada pelo clone B9A4-B2A6A6A1A1. Este anti-rh1(d) não permite a detecção do fenotipo RH1 parcial, categoria VI (DVI). O quinto microtubo contém um gel impregnado de um outro reagente monoclonal de especificidade anti-rh1 (D); este reagente é uma mistura de anticorpos monoclonais humanos de classe IgM e IgG; a fracção IgM é segregada pelo clone T3D2F6 e a fracção IgG pelo clone MS26. A mistura destes 2 anticorpos apresenta um largo espectro de reconhecimento dos antigénios RH1 (D) incluindo as variantes RH1(D), entre elas o fenotipo parcial categoria VI (DVI) e a maior parte dos antigénios RHW1 (D fraco). O sexto microtubo corresponde ao controlo (Ctl). Estes reagentes contêm azida de sódio (< 0,1%) como conservante. O código do produto e o número de cards por embalagem são mencionados no rótulo da embalagem. 42
3 III - CONSERVAÇÃO - VALIDADE A data limite de utilização e as condições de armazenamento são indicados na embalagem. As cards devem ser conservadas à temperatura ambiente de +15 C a +25 C. As cards devem ser armazenadas verticalmente, ao abrigo de qualquer fonte de calor e num local com reduzida variabilidade de temperatura e higrométria. IV - ADVERTÊNCIAS E PRECAUÇÕES A fiabilidade dos resultados depende da execução correcta das seguintes Boas Práticas de Laboratório : Não utilizar reagentes que excedam o prazo de validade indicado no rótulo. Não utilizar cards que apresentem sinais de secagem, bolhas ou o selo de vedação danificado. Os reagentes presentes nos microtubos são diferentes, assim é essencial tomar precauções por forma a evitar contaminação entre os microtubos e, particularmente, durante a remoção da tira protectora de alumínio bem como durante as fases de distribuição de reagentes. Utilizar uma ponta de pipeta diferente para cada amostra. Verificar a precisão e o bom funcionamento das pipetas e outros equipamentos. Usar luvas e óculos de protecção durante a manipulação de reagentes e de amostras. Nunca pipetar directamente para a boca. Evitar derramamentos. Em caso de derramamento, lavar por meio de 12 Cl lixívia diluída a 1/10, e limpar com papel absorvente. O material utilizado para limpar deverá ser eliminado num recipiente para resíduos contaminados. Os consumíveis e outros produtos que tenham estado em contacto com amostras ou reagentes contendo material de origem humana, devem ser eliminados depois da sua descontaminação. As fichas de segurança podem ser adquiridas a pedido. V - COLHEITA E TRATAMENTO DAS AMOSTRAS O sangue deve ser assepticamente recolhido num tubo sem ou com anti-coagulante (EDTA, CPD). A análise deve ser realizada o mais brevemente possível após a colheita. As amostras que não puderem ser analisadas rapidamente deverão ser conservadas a uma temperatura entre +2 C e +8 C e submetidas a análise nas 48 horas seguintes. Em nenhum caso deverá ser visível hemólise. Não aquecer as amostras. 43
4 VI - TÉCNICAS Material fornecido Cards ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1 Outros materiais necessários mas não fornecidos Meio de suspensão de glóbulos vermelhos ScanLiss 100 ml ScanLiss 500 ml ScanSol 100 ml ScanSol 500 ml IH QC : Controlo serológico de grupo sanguíneo IH QC 4 x 6 ml Centrifugadora : ScanGel Centrifuge Pipetas automáticas ou semi-automáticas Pontas de pipeta Tubos descartáveis Recipiente para resíduos de risco biológico Lixívia Luvas de látex Papel absorvente Óculos de protecção Controlos Testemunhos positivo e negativo : glóbulos vermelhos comprovadamente positivos e negativos para o antigénio estudado, testados simultaneamente com os glóbulos vermelhos da amostra a analisar, para validar a actividade própria do reagente. IH QC : Controlo serológico de grupo sanguíneo. Procedimento O procedimento deve ser estritamente seguido. Todos os reagentes devem ser equilibrados à temperatura ambiente antes da utilização. Por centrifugação separar o soro ou o plasma dos glóbulos vermelhos da amostra a analisar. VI.1 - Suspensão em ScanLiss a) Preparação extemporânea de uma suspensão de glóbulos vermelhos 1% em ScanLiss Distribuir 1 ml de ScanLiss num tubo descartável identificado. Adicionar 10 μl de fundo globular. Misturar. A suspensão de glóbulos vermelhos está pronta a ser utilizada. 44
5 b) Técnica 1. Identificar a card pelo nome ou número de amostra correspondente. Retirar cuidadosamente a lingueta de alumínio dos cards para evitar contaminações entre cavidades. Ressuspender as hemácias antes da sua utilização. 2. Distribuir 50 μl de suspensão globular no poço de cada microtubo da card. 3. Centrifugar 10 minutos. 4. Ler as reacções. VI.2 - Suspensão em ScanSol a) Preparação extemporânea de uma suspensão de glóbulos vermelhos 5% em ScanSol Distribuir 0,5 ml de ScanSol num tubo descartável identificado. Adicionar 25 μl de fundo globular. Misturar. A suspensão de glóbulos vermelhos está pronta a ser utilizada. b) Técnica 1. Identificar a card pelo nome ou número de amostra correspondente. Retirar cuidadosamente a lingueta de alumínio dos cards para evitar contaminações entre cavidades. Ressuspender as hemácias antes da sua utilização. 2. Distribuir 10 μl de suspensão globular no poço de cada microtubo da card. 3. Centrifugar imediatamente 10 minutos na ScanGel Centrifuge. A diferença entre o fim da distribuição e o início da centrifugação não deve exceder 10 minutos. 4. Ler as reacções. VII - RESULTADOS E INTERPRETAÇÃO A presença de aglutinados à superfície ou dispersos no gel corresponde a um resultado positivo, indicador da presença do antigénio eritrocitário correspondente. Um fundo de glóbulos vermelhos concentrados na base do microtubo corresponde a um resultado negativo, indicador de que o antigénio eritrocitário correspondente não foi detectado. Uma reacção positiva em um dos microtubos só pode ser validada se o microtubo Ctl for negativo. Se o microtubo Ctl apresentar uma reacção positiva : Lavar os glóbulos vermelhos em solução salina isotónica (NaCl 0,9%). Repetir o procedimento, tal como descrito em VI.1 ou VI.2. 45
6 Se o microtubo Ctl continuar a apresentar uma reacção positiva, as reacções obtidas com a card ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1 não podem ser interpretadas. Repetir então o teste com a card ScanGel Monoclonal ABO/RH. Se o microtubo Ctl for negativo, a interpretação para cada um dos outros microtubos é a seguinte : Resultado positivo Resultado positivo fraco Resultado negativo a Os resultados são válidos unicamente se os controlos positivo e negativo fornecerem os resultados esperados. a) Interpretação dos microtubos ABO1(A), ABO2 (B) e ABO3(AB) Um grupo ABO completo comporta 2 testes complementares : o teste globular realizado com os reagentes anti-abo1(a), anti-abo2(b) e anti-abo3(ab), e o teste sérico realizado com os glóbulos vermelhos de teste A1, B, e eventualmente A2 e O. Os perfis das reacções esperadas com os reagentes anti-abo1(a), anti-abo2 (B), anti-abo3(ab) e os glóbulos vermelhos de teste A1, A2, B, O, bem como as respectivas interpretações, são apresentados no quadro seguinte : GRUPOS TESTE SÉRICO : GLÓBULOS TESTE GLOBULAR : REAGENTES VERMELHOS TESTE Anti-ABO1 (A) Anti-ABO2 (B) Anti-ABO3 (AB) A1 A2 B O A B AB O O teste globular e o teste sérico devem ser concordantes. Qualquer divergência entre os testes globular e sérico deve ser resolvida antes de se confirmar um resultado do grupo ABO. Sempre que se observe uma divergência entre os testes globular e sérico, dever-se-á proceder a testes complementares com os controlos apropriados. b) Interpretação do microtubo RH1 (D) Um resultado positivo em, pelo menos, um dos microtubos RH1(D) indica a presença do antigénio RH1(D) à superfície dos glóbulos vermelhos testados. 46
7 Um resultado negativo em um dos microtubos anti-rh1(d) e positivo no outro pode indicar um antigénio RHW1 (D fraco). Um resultado negativo no primeiro microtubo anti-rh1(d) e positivo no segundo pode indicar um fenotipo RH1 parcial, categoria VI (DVI). Se for necessária a detecção de todos os antigénios RHW1 (D fraco), as amostras comprovadas como negativas devem ser confirmadas utilizando o reagente ScanGel Monoclonal Anti-RH1(D)/RHW1 associado à card ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C 3 d. VIII - DESEMPENHOS a) Desempenhos específicos dos reagentes anti-abo1(a), anti-abo2(b) e anti-abo3(ab) Os desempenhos dos reagentes anti-abo1(a), anti-abo2(b) e anti-abo3(ab) da card ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1 foram avaliados em painéis de 1641 amostras globais (1150 dadores, 332 doentes e 159 recém-nascidos) completado por um painel de amostras especiais (antigénios fracos ou variante). Cada resultado foi comparado com o obtido através da técnica placa, tubo, microplaca ou filtração por gel. As 1641 amostras revelaram resultados conformes com os esperados. Foi testado um painel de 17 amostras especiais (Ax, B3, AxB, Bh, CisAB, A3B, ABf). Todas foram detectadas com uma reactividade de 1+ a 3+. Os antigénios B adquiridos testados não foram detectados com o anti-abo2 (B) da card ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1. Os reagentes anti-abo1(a), anti-abo2(b) e anti-abo3(ab) da card ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1 apresentam boa reprodutibilidade tanto intra como inter--ensaio. b) Desempenhos específicos dos reagentes anti-rh1(d) Os desempenhos do reagente anti-rh1(d), clone B9A4, foram avaliados em painéis de 1641 amostras globais (1150 dadores, 332 doentes e 159 recém-nascidos) completado por um painel de 24 amostras especiais (Ag fracas, variantes e fenotipos especiais). Cada resultado foi comparado com o obtido através da técnica placa, tubo, microplaca ou filtração por gel. As 1641 amostras revelaram resultados conformes com os esperados. Foram detectados 94% dos antigénios RHW1 (D fraco) testados. Foram detectadas todas as variantes e fenotipos especiais, à excepção de uma amostra de fenotipo RH1 parcial, categoria VI (DVI). Os desempenhos do reagente anti-rh1(d), clone T3D2F6 e MS26, foram avaliados em painéis de 1707amostras globais (1549 dadores, 122 doentes e 36 recém-nascidos) completado por um painel de 41 antigénios RHW1 (D fracos) e 5 variantes. Cada resultado foi comparado com o obtido através da técnica placa, tubo, microplaca ou filtração por gel. 47
8 As 1707 amostras revelaram resultados conformes com os esperados. Foram detectados 93% dos antigénios RHW1 (D fraco) testados. Foram detectadas todas as variantes dos antigénios RH1 (18 amostras, das quais 8 fenotipos RH1 parciais, categoria VI (DVI) ). Os reagentes anti-rh1 (D) da card ScanGel Monoclonal ABO/RH1/RH1 apresentam boa reprodutibilidade tanto intra como inter-ensaio. LIMITAÇÕES A obtenção de resultados anómalos pode ser provocada por : uma contaminação bacteriana ou química do soro, do plasma, dos glóbulos vermelhos ou do material. uma medicação ou um estado patológico do doente, fornecendo uma reacção cruzada. a utilização de um meio de suspensão de glóbulos vermelhos diferente do preconizado. uma concentração de glóbulos vermelhos diferente da preconizada. a presença de fibrina (imagem de um fundo celular compacto na base de um microtubo, acompanhada de uma fina faixa rosada no cimo do gel, correspondente aos glóbulos vermelhos retidos pelos resíduos de fibrina). contaminação entre os microtubos. utilização de outro procedimento para além do acima descrito. Sob licença da DIAMED SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Suíça 48
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10 Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Tél.: /2008 Fax.: Code:
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