ANTI CDE (Anti Rho, rh e rh ) (Humano)
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1 ANTI CDE (Anti Rho, rh e rh ) (Humano) PROTHEMO Produtos Hemoterápicos Ltda. REAGENTE para classificação do fator Rh PARA TESTES EM LÂMINA OU TUBO SOMENTE PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO Conservar entre: 2º e 8ºC Não congelar Conservante: Azida de Sódio 0,1 % Responsável Técnico: Janaina Martins CRF:
2 PRINCÍPIO DO TESTE Os anticorpos presentes no reagente causam aglutinação direta macroscópica das hemácias portadoras dos antígenos Rho (D), rh (C) e rh (E). O Soro Anti-CDE deve ser usado em todos os doadores anteriormente tipados e negativos para o antígeno Rho (D). Para fins transfusionais, somente deverão ser considerados Rh negativos os sangues de doadores que não possuam os antígenos Rho (D), rh ( C ) e rh (E). O resultado positivo obtido com o uso do reagente Anti-CDE, seja pelo teste em lâmina, ou tubo é validado pela realização de um controle negativo do teste, onde se adiciona 1( uma) gota do reagente Controle Rh no lugar do reagente Anti-CDE. O reagente Controle Rh PROTHEMO possui formulação idêntica à do reagente Anti-CDE exceto no que se refere à presença dos anticorpos, possibilitando a detecção de reações falso-positivas causadas por rouleaux, aglutininas frias ou autoanticorpos. DESCRIÇÃO DO PRODUTO O reagente é preparado utilizando-se anticorpos Anti-D, Anti-C e Anti-E reativos em lâmina e tubo, fornecendo um teste específico para a identificação dos respectivos antígenos e de suas variantes nas hemácias humanas. O diluente dos reagentes contém: Cloreto de Sódio, Albumina Bovina, Tampão Fosfato, Potencializadores e Azida de Sódio a 0,1% como conservante. Os reagentes foram otimizados para serem usados como fornecidos sem adições ou diluições. O produto é fornecido em frascos de 10 ml, acompanhados de conta-gotas. Cada gota equivale a 50 l. ANTI-CDE PROTHEMO Código Embalagem Cód ml Cód x 10 ml MATERIAIS NECESSÁRIOS NÃO FORNECIDOS - Teste em Lâmina: lâminas de vidro, pipetas Pasteur e solução salina 0,9%. - Teste em Tubo: tubos de vidro (10x75mm ou 12x75mm), pipetas Pasteur, Banho-Maria a 37ºC, centrifuga e solução salina 0,9%.
3 Outros: Controle Rh PROTHEMO e Soro Anti-IgG PROTHEMO ARMAZENAMENTO E PRECAUÇÕES Conservar em geladeira entre 2º e 8ºC. Não congelar ou expor o produto a temperaturas elevadas. Não utilizar após o vencimento ou se observar nítida turvação, o que pode indicar contaminação bacteriana ou deterioração do produto. Evitar a contaminação do reagente. Não reutilizar os frascos vazios. SOMENTE PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO Os materiais de origem biológica devem ser considerados como se fossem potencialmente infectantes. Devem ser estabelecidos métodos adequados para o manuseio e descarte equivalentes aos utilizados para as amostras de sangue. O não seguimento das instruções de uso pode resultar em diminuição da performance ótima do produto. COLETA DA AMOSTRA O sangue deve ser coletado por procedimento asséptico aprovado, com ou sem adição de anticoagulante. As hemácias obtidas de coágulo podem ser tipadas em até 5 dias após sangria e as amostras coletadas em EDTA ou Heparina devem ser tipadas em até 48 horas. Se a demora para a execução do teste for inevitável, hemácias de sangue coagulado e as colhidas em EDTA ou Heparina devem ser separadas do soro/plasma, lavadas e ressuspendidas em solução preservativa de glóbulos. Estocar a 2ºa 8ºC, por no máximo, 20 dias. O sangue coletado em anticoagulante ACD, CPD e CPDA-1 pode ser tipado até a data de expiração, se armazenado entre 2º e 8ºC. O armazenamento prolongado de hemácias antes da execução do teste pode causar deterioração de antígenos e resultar em reações mais fracas. PROCEDIMENTO DO TESTE TESTE EM LÂMINA 1. Preparar uma suspensão a 40% da hemácia a ser tipada no próprio soro, plasma ou em solução salina à 0,9%. 2. Colocar em uma lâmina uma gota de reagente Anti-CDE Prothemo. Em uma segunda lâmina, colocar uma gota do Controle Rh PROTHEMO. O emprego de aglutinoscópio, embora não obrigatório, facilita a observação de reações fracas pelo efeito de iluminação e contraste. O aquecimento excessivo da lâmina pode ser evitado ligando-se o aparelho apenas ao efetuar a leitura (20º a 35º C). 3. A cada uma das lâminas adicionar 2 gotas da suspensão de glóbulos.
4 4. Misturar a suspensão com o reagente em uma área de 2x3cm. 5. Promover a mistura através de movimentos oscilantes da lâmina e examinar a presença ou não de aglutinação macroscópica. Não observar a lâmina por mais de 2 minutos. Não interpretar secagem periférica como aglutinação. 6. Se o resultado do teste for negativo (ou duvidoso), executar os procedimentos descritos para o teste em tubo. TESTE EM TUBO 1. Preparar uma suspensão a 5% da hemácia a ser tipada em solução salina à 0,9%. 2. Colocar uma gota do reagente Anti-CDE PROTHEMO em um tubo, devidamente identificado. Em um segundo tubo (controle negativo) colocar uma gota do Controle Rh PROTHEMO. 3. A cada tubo acrescentar uma gota da suspensão de glóbulos. Misturar bem o conteúdo. 4. Centrifugar* os tubos. 5. Ressuspender delicadamente o botão de hemácias e examinar a presença ou não de aglutinação. Anotar o resultado. Se o teste for negativo ou duvidoso: 7. Incubar os tubos em Banho-Maria a 37º C por 15 a 30 minutos. 8. Repetir os passos 4 e Caso a leitura permaneça negativa ou duvidosa, prosseguir para a fase de antiglobulina humana. 10. Lavar imediatamente as hemácias com resultado negativo (ou duvidoso) por 3 vezes com solução salina 0,9%. Remover completamente a solução salina 0,9% após a última lavagem. 11. A cada tubo adicionar 2 gotas de Soro Anti-IgG Prothemo. Misturar bem. 12. Centrifugar* os tubos. 13. Ressuspender delicadamente o botão de hemácias e observar a presença ou não de aglutinação. * Centrifugação sugerida: 15 segundos a rpm. A força centrifuga aplicada deve ser a mínima necessária para se obter um sobrenadante claro e um botão nitidamente delineado que possa ser ressuspendido facilmente. As centrifugas devem ser calibradas individualmente para se obter o tempo e velocidade ótimos de centrifugação.
5 INTERPRETAÇÃO DO RESULTADO POSITIVO: Excluindo-se as limitações do teste, a aglutinação dos glóbulos pelo reagente indica a presença do antígeno D e/ou C e/ou E. NEGATIVO: Excluindo-se as limitações do teste, a ausência de aglutinação no teste indica ausência dos antígenos correspondentes. Controle Rh Negativo Controle Rh Positivo Teste em Pesquisa de D U Antígenos Lâmina/Tubo D e/ou C e/ou E + Não testado Presente Teste prejudicado. Resolver utilizando hemácias lavadas, Teste de Coombs Direto, Soro Anti-D, Anti-C e Anti-E salinos, etc... LIMITAÇÕES DO TESTE As hemácias com teste de antiglobulina direto positivo terão a pesquisa prejudicada. Tratando-se de sangue de doador, o mesmo não deverá ser utilizado para fins transfusionais. FALSO-POSITIVO: podem ocorrer em hemácias com teste de Antiglobulina Direto positivo ou decorrente de rouleaux, autoanticorpos e aglutininas frias. FALSO-NEGATIVO ou reações fracas podem ocorrer com glóbulos submetidos à estocagem prolongada ou condições inapropriadas. As variáveis relativas ao procedimento técnico, tais como: técnica, suspensões muito concentradas ou diluídas, centrifugação ou incubação inadequadas, salina contaminada ou vidraria suja podem causar falsas reações positivas ou negativas. O reagente foi otimizado para as técnicas descritas. Outros procedimentos devem ser validados pelo usuário. CONTROLES 1. A reação positiva obtida com o reagente Anti-CDE só é válida quando a reação com o reagente Controle Rh é negativa. O uso
6 rotineiro de hemácias lavadas reduz a incidência de reações falsopositivas 2. É importante que a reatividade e especificidade do reagente sejam confirmadas a cada dia de uso utilizando-se os controles positivos para C,D, E e um controle negativo (células rr). DESEMPENHO Cada lote produzido é analisado segundo os métodos adotados pelo FDA, assegurando potência, especificidade, reatividade e avidez iguais ou superiores aos Padrões de Referência Internacionais. A especificidade do produto é determinada através da inclusão de um painel de hemácias, representando os antígenos com freqüência igual ou superior a 1% na população. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1-Walker Rh, ed. Technical Manual. 11 th Edition. Bethesda: AABB, Race R.R and Sanger R. Blood Groups in Man, 6 th Edition Oxford Blackwell Scientific Publishers, Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine. 7 th Edition. Oxford Blackwell Scientific, Guidelines for the Blood Transfusion Service H.M.S.O. GARANTIA Este produto é garantido por Prothemo Produtos Hemoterápicos Ltda durante o prazo de validade indicado no rótulo se conservado e utilizado segundo as instruções recomendadas. PROTHEMO PRODUTOS HEMOTERÁPICOS LTDA. CNPJ / Rua Augusto Ferreira de Morais, Socorro - CEP: São Paulo - SP - BRASIL Atendimento ao consumidor: Fone (11) e FAX (11) Data da edição: Maio/2009
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