LINFOMA DE GRANDES CÉLULAS ANAPLÁSICAS. José Carlos Morais Departamento de Patologia Faculdade de Medicina UFRJ
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1 LINFOMA DE GRANDES CÉLULAS ANAPLÁSICAS José Carlos Morais Departamento de Patologia Faculdade de Medicina UFRJ
2 LGCA da descoberta aos dias atuais Descoberto o antígeno Ki-1 (1982) Production of a monoclonal antibody specific for Hodgkin and Sternberg Reed cells of Hodgkin's disease and a subset of normal lymphoid cells Schwab et al, Nature 299, 65-67,1982. Descrito o linfoma Ki-1 (1985) The expression of the Hodgkin's disease associated antigen Ki-1 in reactive and neoplastic lymphoid tissue: evidence that Reed-Sternberg cells and histiocytic malignancies are derived from activated lymphoid cells. Stein H et al, Blood 1985;66: Descoberta a translocação (199) CD3-positive large cell lymphomas ('Ki-1 lymphoma') are associated with a chromosomal translocation involving 5q35. - t(2;5)(p23;q35). Mason DY et al. Br J Haematol. 199;74: Descoberto o ALK(1994) Fusion of a kinase gene, ALK, to a nucleolar protein gene, NPM, in non- Hodgkin's lymphoma. Morris SW, Science,1994;263:
3 Como consequência desta descoberta o LGCA foi dividido de acordo com a positividade da proteína ALK na classificação da OMS (28) Entidade definitiva Entidade provisória
4 1. Large Cell Lymphomas: Overall Survival.9.8 Anaplastic Large T-Cell.7 Survival Diffuse Large B-Cell Burkitt-like Peripheral T-Cell.1. Log Rank Test: p< Years Armitage et al, 1997
5 Progression Free Survival with EPOCH, NCI Series 1 * x o o o o oo 8 x x x * o oo o o o o * o Anaplastic Large Cell Lymphoma Percent 6 4 x x x x Large B-cell Lymphoma Peripheral T-cell Lymphoma (ALCL v. LBCL) P 2 =.82 o * 2 x x (PTL v. LBCL) P 2 < Years on Study
6 Savage 28 Failure-free Survival ALCL ALK+ vs. ALCL ALK - Proportion p=.15 5 y 6% vs 36% ALK + ALK Time Diagnosis CENSOR FAIL TOTAL MEDIAN Anaplastic large cell lymphoma, ALK Anaplastic large cell lymphoma, ALK
7
8 Savage 28 Failure-free Survival ALK neg ALCL vs PTCL-U Proportion p= Time Diagnosis CENSOR FAIL TOTAL MEDIAN ALCL ALK neg PTCL-U a.91
9 Linfoma Anaplásico de Grandes Células ALK + x ALK - ALK + ocorre em jovens ALK + tem melhor prognóstico que o ALK negativo LAGC ALK negativo mostra uma superposição com alguns Linfomas T periféricos, mas em geral mostra uma plateau na curva de sobrevida, em contraste com a maioria dos LTP. LAGC ALK negativo foi incluído na Classificação da OMS 28 como uma entidade distinta do ALK+ ou dos LTP, SOE. (provisória)
10 Padrões morfológicos Clássico (8%) Linfo-histiocítico (1%) Células pequenas (5-1%) Tipo-Hodgkin (3%)
11 Célula grande Núcleo irregular Núcleo reniforme Citoplasma abundante Nucléolo(s) evidente(s) Donut s cell
12 Citoplasma vacuolado
13
14
15 ALK+
16 Padrão linfo-histiocítico Infiltrado, predominantemente, paracortical no pequeno aumento.
17 Padrão linfo-histiocítico No grande aumento, as células malignas encontram-se misturadas a uma população não neoplásica, com predomínio de histiócitos. As células malignas são raras e muito difíceis de serem detectados no HE
18 Padrão linfo-histiocítico A dupla coloração com o CD68 (marrom) and ALK1 (azul) confirma a pobreza das células malignas e a grande quantidade de histiócitos
19 Padrão linfo-histiocítico CD3 mostra que muitas células malignas variam em forma e tamanho e algumas exibem morfologia semelhante ao fibroblasto (fibroblast-like morphology)
20 Padrão linfo-histiocítico Caracteristicamente, as células neoplásicas formam grupamentos em torno dos vasos sanguíneos. Este padrão também é observado na variante de células pequenas. CD3
21 Padrão células pequenas População com predomínio de células pequens com núcleo irregular tendo de permeio escassas células diagnósticas com núcleo reniforme
22 Padrão células pequenas População monomórfica de células pequenas com citoplasma claro ( células em ovo frito )
23 Padrão células pequenas População com predomínio de células pequens com núcleo irregular tendo de permeio escassas células diagnósticas com núcleo reniforme
24 Padrão células pequenas A maioria das células neoplásicas são de distribuição perivascular, realçado pela marcação do CD3. Observar que as células grandes são fortemente positivas, enquanto as células médias e pequenas coram-se fracamente CD3
25 Padrão células pequenas
26 Padrão tipo-hodgkin
27 Padrão monomórfico
28 Células gigantes pleomórficas
29 Células em anel de sinete
30 Aspecto sarcomatoso ALK
31 CD3
32 ALK
33 EMA
34 CD43
35 TIA1
36 Granzima
37 CD3 EMA CD43 TIA1 Granzima ALK
38 Anormalidades Genéticas nos Linfomas ALK positivos Anomalia ALK Peso molecular Padrão marcação % Cromossomo t(2;5)(p23;q35) NPM 8 Nuclear, citoplasma 84 t(1;2)(q25;p23) TPM3 14 Citoplasma + intenso periferia 13 inv(2)(p23q35) ATIC 96 Citoplasma 1 t(2;3)(p23;q11) TFG 85, 97, 113 Citoplasma <1 t(2;17)(p23;q23) CLTC 25 Citoplasma granular <1 t(2; X)(p23;q11-12) MSN 125 Membrana <1 t(2;19)(p23;p13.1) TPM 495 Citoplasma <1 t(2;22)(p23;q11.2) MYH 922 Citoplasma <1 t(2;17)(p23;q25) ALO17 ND Citoplasma <1
39 Padrão de marcação do ALK (Anaplastic lymphoma kinase) Nuclear, nucleolar e citoplasmático difuso, Translocação t(2;5) (expressão da proteína híbrida NPM-ALK). Nuclear e nucleolar Variante anaplásica de células pequenas Citoplasma com intensificação periférica Translocação t(1;2) (expressão da proteína híbrida TPM3-ALK).
40 Padrão de marcação do ALK (Anaplastic lymphoma kinase) Citoplasmática difusa Citoplasmática finamente granular Inv (2)(p23q35) (expressão da proteína híbrida ATIC-ALK). Translocação t(2;17) (expressão da proteína híbrida CLTC-ALK).
41
42 EMA ALK
43 LINFOMA DE GRANDES CÉLULAS ANAPLÁSICAS, ALK+? PEDIRIA OUTROS MARCADORES? QUAIS?
44 CD3 negativo CD3 negativo CD2 negativo CD79a negativo
45 CD138 +, IgA +, kappa ou lambda +
46 CD3 IgA CD79a Linfoma de grandes células ALK+ EMA ALK
47 Positivo também para a desmina Rabdomiossarcoma ALK
48 Tumor inflamatório miofibroblástico Este tumor usualmente expressa proteína TPM4-ALK
49 Linfoma de Grandes Células Anaplásicas, ALK- (categoria provisória) Morfologia: Idêntico ao LAGC ALK+ Grande células com abundante citoplasma, núcleo em forma de ferradura ( hallmark cells ) e crescimento coesivo Imunofenótipo: CD3+ forte e difuso Antígenos de células B negativos (Pax5-) ALK- CD3 Clínica: Adulto (med 6 anos) Prognóstico intermediário entre ALK+ and LTP, SOE Proportion p=.15 ALK + ALK Time
50
51 CD3 CD43 EMA ALK
52 HE 1% IHQ 3% Fraga et al. Bone marrow involvement in anaplastic large cell lymphoma. Immunohistochemical detection of minimal disease and its prognostic significance. Am J Clin Pathol 1995;13:82-89 CD3
53 MO Linfoma grandes células anaplásicas
54 Doenças linfoproliferativas de células T CD3 positivas primárias da pele Doenças que fazem parte do mesmo espectro e portanto podem apresentar uma sobreposição de achados histopatológicos e fenotípicos Borderline Papulose linfomatóide Linfoma de grandes células anaplásicas primário da pele. Lymphomatoid papulosis followed by Hodgkin's disease. Silva MM, Morais JC, Spector N, Maceira J, Sousa MA, Filgueira AL. Int J Dermatol. 1998;37(7):541-3
55 Doenças linfoproliferativas de células T CD3 positivas primárias da pele Linfoma de grandes células anaplásicas primário da pele
56 CD3 CD3 CD3 CD15
57 Positividade para o ALK nos 1 casos
58 EMA CD5 CD43 Perforina
59
60 278 casos 222 casos Nossa série
61 82%
62 1%
63 CLUSTERIN
64 Resumo dos achados da bibliografia em relação à positividade da clusterin Linfoma de Hodgkin Linfoma anaplásico de grandes células Estudos Total Positivo (%) Total Positivo (%) ALK + (%) ALK (%) Wellmann e cols (2) Saffer e cols (22) Lae e cols (22) - * - * Nascimento e cols (24) Gualco e cols (28) Rocha Filho, Morais e cols (29)
65 7% 2%
66 8% 56%
67 CD99
68 ESTUDO COMPARATIVO MORFOLÓGICO E IMUNO-HISTOQUÍMICO ENTRE LINFOMA DE HODGKIN CLÁSSICO E LINFOMA ANAPLÁSICO DE GRANDES CÉLULAS Ariovaldo Rocha Filho, Cristiane Milito, Irene Biasoli, Nelson Spector e José Carlos Morais IMUNO- HISTOQUÍMICA ALK + 16 casos (%) LAGC ALK 37 casos (%) p Localização nodal 12 (75) 28 (76),73 Idade (mediana) 18 anos 48 anos Idade (< 3 anos) 13 (81) 8 (22) Sexo masculino 7 (44) 24 (65),152 Anti-CD3 3 (19) 12 (32),6 Anti-CD2 - Anti-CD15 1 (3),5 LMP1 1 (6) 3 (8),9 Pax5 - Anti-Clusterin Fascina EMA 14 (88) 15 (41) 75% 14 (88) 35% 19 (51) 13 (81) 4 (11),7,2 Anti-CD99 12 (75) 13 (35),1 Anti-p63 1 (6) 11 (3),7 Anti-CD45 9 (56) 18 (49),4 Anti CD (94) 24 (65),164
69 6% 1%
70 5% 1%
71 IMUNO- HISTOQUÍMICA DIAGNÓSTICO MORFOLÓGICO LHEN 222 casos (%)* LAGC 54 casos (%)* LHEN X LAGC (p) Anti-CD3 7 (4) 15 (28) Anti-CD2 11 (5),3 Anti-CD (74) 1 (2) LMP1 6 (26) 4 (7),3 ALK-1 16 (3) Anti-Clusterin 5 (3) 3 (59) 97% Anti CD-117 Fascina 1 (1) 194 (97) 4 (76) 33 (62) 62% Anti-CD45 8 (4) 27 (5) Anti-CD99 5 (2) 25 (46) EMA 17 (33) Pax5 96 (51) Anti-p63 1 (5) 12 (23)
72 44% x %
73 P63
74 IMUNO- HISTOQUÍMICA DIAGNÓSTICO MORFOLÓGICO LHEN 222 casos (%)* LAGC 54 casos (%)* LHEN X LAGC (p) Anti-CD3 7 (4) 15 (28) Anti-CD2 11 (5),3 Anti-CD (74) 1 (2) LMP1 6 (26) 4 (7),3 ALK-1 16 (3) Anti-Clusterin 5 (3) 3 (59) Anti CD (1) 4 (76) Fascina 194 (97) 33 (62) Anti-CD45 8 (4) 27 (5) Anti-CD99 5 (2) 25 (46) EMA Pax5 5% x 23% 17 (33) 96 (51) Anti-p63 1 (5) 12 (23)
75 Expression of the c-kit receptor in human lymphomas is restricted to Hodgkin's disease and CD3+ anaplastic large cell lymphomas. Pinto A, Gloghini A, Gattei V, Aldinucci D, Zagonel V, Carbone A. Blood Feb 1;83(3):
76 ESTUDO COMPARATIVO MORFOLÓGICO E IMUNO-HISTOQUÍMICO ENTRE LINFOMA DE HODGKIN CLÁSSICO E LINFOMA ANAPLÁSICO DE GRANDES CÉLULAS Ariovaldo Rocha Filho, Cristiane Milito, Irene Biasoli, Nelson Spector e José Carlos Morais IMUNO- HISTOQUÍMICA ALK + 16 casos (%) LAGC ALK 37 casos (%) p Localização nodal 12 (75) 28 (76),73 Idade (mediana) 18 anos 48 anos Idade (< 3 anos) 13 (81) 8 (22) Sexo masculino 7 (44) 24 (65),152 Anti-CD3 3 (19) 12 (32),6 Anti-CD2 - Anti-CD15 1 (3),5 LMP1 1 (6) 3 (8),9 Pax5 - Anti-Clusterin 14 (88) 15 (41),7 Fascina 14 (88) 19 (51),2 EMA 13 (81) 4 (11) Anti-CD99 Anti-p63 Anti-CD45 Anti CD (75) 13 (35) 94% 1 (6) 65% 11 (3) 9 (56) 18 (49) 15 (94) 24 (65),1,7,4,164
77 IMUNO- HISTOQUÍMICA DIAGNÓSTICO MORFOLÓGICO LHEN 222 casos (%)* LAGC 54 casos (%)* LHEN X LAGC (p) Anti-CD3 7 (4) 15 (28) Anti-CD2 11 (5),3 Anti-CD (74) 1 (2) LMP1 6 (26) 4 (7),3 ALK-1 Anti-Clusterin 5 (3) 16 (3) 1% x 76% 3 (59) Anti CD (1) 4 (76) Fascina 194 (97) 33 (62) Anti-CD45 8 (4) 27 (5) Anti-CD99 5 (2) 25 (46) EMA 17 (33) Pax5 96 (51) Anti-p63 1 (5) 12 (23)
78
79 Resumo dos achados da bibliografia em relação a positividade do vírus EBV no Linfoma Anaplásico de Grandes Células AUTOR, ANO NÚMERO DE CASOS CASOS POSITIVOS TÉCNICA OBSERVAÇÕES Hersbst, % LMP1 e EBER Kanavaros, % LMP1 Hamilton-Dutoit, % LMP1 Lopategui, % EBER D Amore, % EBER Nakamura, % LMP1 Negativos para o EBER Agarwal, 22 2% 17% EBER LMP1 Tan, % EBER Relacionado ao ALK e ao gene IGH Herling, Brousset, Nakagawa, % -36% Kasai, Boulland, Benharroch, Suzuki, 2 8
80 LMP1
81 Correlação dos achados imuno-histoquímicos com o diagnóstico morfológico. IMUNO- HISTOQUÍMICA DIAGNÓSTICO MORFOLÓGICO LHEN 222 casos (%)* LAGC 54 casos (%)* LHEN X LAGC (p) Anti-CD3 7 (4) 15 (28) Anti-CD2 Anti-CD15 11 (5) 164 (74) 26% x 7% 1 (2),3 LMP1 6 (26) 4 (7),3 ALK-1 16 (3) Anti-Clusterin 5 (3) 3 (59) Anti CD (1) 4 (76) Fascina 194 (97) 33 (62) Anti-CD45 8 (4) 27 (5) Anti-CD99 5 (2) 25 (46) EMA 17 (33) Pax5 96 (51) Anti-p63 1 (5) 12 (23)
82 ESTUDO IMUNO-HISTOQUÍMICO DE 54 CASOS DE LINFOMA DE GRANDES CÉLULAS ANAPLÁSICAS Anti-CD2 Pax5 Anti-CD15 LMP1 Anti-p63 Anti-CD3 ALK-1 EMA Anti-CD99 Anti-CD45 Anti-Clusterin Fascina Anti CD (2%) 4 (7%) 12 (23%) 15 (28%) 16 (3%) 17 (33%) 25 (46%) 27 (5%) 3 (59%) 33 (62%) 4 (76%)
83 Correlação dos achados imuno-histoquímicos com o diagnóstico morfológico. IMUNO- HISTOQUÍMICA DIAGNÓSTICO MORFOLÓGICO LHEN 222 casos (%)* LAGC 54 casos (%)* LHEN X LAGC (p) Anti-CD2 11 (5),3 Pax5 96 (51) Anti-CD (74) 1 (2) LMP1 6 (26) 4 (7),3 Fascina 194 (97) 33 (62) ALK-1 16 (3) EMA 17 (33) Anti-CD3 7 (4) 15 (28) Anti-Clusterin 5 (3) 3 (59) Anti CD (1) 4 (76) Anti-CD45 8 (4) 27 (5) Anti-CD99 5 (2) 25 (46) Anti-p63 1 (5) 12 (23)
84 CD15
85 CD2
86 Correlação dos achados imuno-histoquímicos com o diagnóstico morfológico. IMUNO- HISTOQUÍMICA DIAGNÓSTICO MORFOLÓGICO LHEN 222 casos (%)* LAGC 54 casos (%)* LHEN X LAGC (p) Anti-CD2 11 (5),3 Pax5 96 (51) Anti-CD (74) 1 (2) LMP1 6 (26) 4 (7),3 Fascina 194 (97) 33 (62) ALK-1 16 (3) EMA 17 (33) Anti-CD3 7 (4) 15 (28) Anti-Clusterin 5 (3) 3 (59) Anti CD (1) 4 (76) Anti-CD45 8 (4) 27 (5) Anti-CD99 5 (2) 25 (46) Anti-p63 1 (5) 12 (23)
87 EMA
88 ESTUDO COMPARATIVO MORFOLÓGICO E IMUNO-HISTOQUÍMICO ENTRE LINFOMA DE HODGKIN CLÁSSICO E LINFOMA ANAPLÁSICO DE GRANDES CÉLULAS 31 casos Ariovaldo Rocha Filho, Cristiane Milito, Denize Azambuja e José Carlos Morais Hodgkin (222 casos) Anaplásico (53 casos) Zona Cinzenta (35 casos) Hodgkin x Anaplásico (p) CD3 7 (3%) 15 (28%) 1 (3%) <,1 CD117 1 (.5%) 4 (74%) 7 (21%) <,1 CD99 5 (2%) 25 (46%) 6 (18%) <,1 FASCINA 184 (87%) 33 (61%) 3 (88%),17 LMP-1 6 (27%) 4 (7%) 11 (32%),8 CLUSTERIN 5 (2%) 3 (56%) 6 (18%) <,1 CD45 8 (4%) 27 (5%) 8 (23%) <,1 EMA 17 (31%) 1 (3%) <,1 P63 1 (4%) 12 (22%) 1 (3%) <,1
89 ESTUDO COMPARATIVO MORFOLÓGICO E IMUNO-HISTOQUÍMICO ENTRE LINFOMA DE HODGKIN CLÁSSICO E LINFOMA ANAPLÁSICO DE GRANDES CÉLULAS 31 casos Ariovaldo Rocha Filho, Cristiane Milito, Denize Azambuja e José Carlos Morais Hodgkin (222 casos) Anaplásico (53 casos) Zona Cinzenta (35 casos) Hodgkin x Anaplásico (p) CD3 7 (3%) 15 (28%) 1 (3%) <,1 CD117 1 (.5%) 4 (74%) 7 (21%) <,1 CD99 5 (2%) 25 (46%) 6 (18%) <,1 FASCINA 184 (87%) 33 (61%) 3 (88%),17 LMP-1 6 (27%) 4 (7%) 11 (32%),8 CLUSTERIN 5 (2%) 3 (56%) 6 (18%) <,1 CD45 8 (4%) 27 (5%) 8 (23%) <,1 EMA 17 (31%) 1 (3%) <,1 P63 1 (4%) 12 (22%) 1 (3%) <,1
90 ALGORITMO PARA DEFINIÇÃO DOS LINFOMAS DE ZONA CINZENTA MORFOLÓGICO CD3+ CD2+, Pax5+, ALK- CD2-, Pax5-, ALK+ CD2-, Pax5-, ALK-
91 ALGORITMO PARA DEFINIÇÃO DOS LINFOMAS DE ZONA CINZENTA MORFOLÓGICO CD3+ CD2+, Pax5+, ALK- CD2-, Pax5-, ALK+ CD2-, Pax5-, ALK- LINFOMA DE HODGKIN LINFOMA ANAPLÁSICO DE GRANDES CÉLULAS
92 ALGORITMO PARA DEFINIÇÃO DOS LINFOMAS DE ZONA CINZENTA MORFOLÓGICO CD3+ CD2+, Pax5+, ALK- CD2-, Pax5-, ALK+ CD2-, Pax5-, ALK- CD15+/EMA- CD15-/EMA- CD15-/EMA+ LINFOMA DE HODGKIN LINFOMA ANAPLÁSICO DE GRANDES CÉLULAS
93 ALGORITMO PARA DEFINIÇÃO DOS LINFOMAS DE ZONA CINZENTA MORFOLÓGICO CD3+ CD2+, Pax5+, ALK- CD2-, Pax5-, ALK+ CD2-, Pax5-, ALK- CD15+/EMA- CD15-/EMA- CD15-/EMA+ LINFOMA DE HODGKIN LINFOMA ANAPLÁSICO DE GRANDES CÉLULAS
94 ALGORITMO PARA DEFINIÇÃO DOS LINFOMAS DE ZONA CINZENTA MORFOLÓGICO CD3+ CD2+, Pax5+, ALK- CD2-, Pax5-, ALK+ CD2-, Pax5-, ALK- CD15+/EMA- CD15-/EMA- CD15-/EMA+ EBV + EBV - LINFOMA DE HODGKIN LINFOMA ANAPLÁSICO DE GRANDES CÉLULAS
95 ALGORITMO PARA DEFINIÇÃO DOS LINFOMAS DE ZONA CINZENTA MORFOLÓGICO CD3+ CD2+, Pax5+, ALK- CD2-, Pax5-, ALK+ CD2-, Pax5-, ALK- CD15+/EMA- CD15-/EMA- CD15-/EMA+ EBV + EBV - CD45-, CD99-, CD117-, clusterin -, p63- CD45+, CD99+, CD117+, clusterin+, p63+ LINFOMA DE HODGKIN LINFOMA DE ZONA CINZENTA LINFOMA ANAPLÁSICO DE GRANDES CÉLULAS
96 IMUNO- HISTOQUÍMICA ALK + 16 casos (%) LAGC ALK 37 casos (%) p Localização nodal 12 (75) 28 (76),73 Idade (mediana) 18 anos 48 anos Idade (< 3 anos) 13 (81) 8 (22) Sexo masculino 7 (44) 24 (65),152
97 IMUNO- HISTOQUÍMICA ALK + 16 casos (%) LAGC ALK 37 casos (%) p Localização nodal 12 (75) 28 (76),73 Idade (mediana) 18 anos 48 anos Idade (< 3 anos) 13 (81) 8 (22) Sexo masculino 7 (44) 24 (65),152 Anti-CD3 3 (19) 12 (32),6 Anti-CD2 - Anti-CD15 1 (3),5 LMP1 1 (6) 3 (8),9 Pax5 -
98 IMUNO- HISTOQUÍMICA ALK + 16 casos (%) LAGC ALK 37 casos (%) p Localização nodal 12 (75) 28 (76),73 Idade (mediana) 18 anos 48 anos Idade (< 3 anos) 13 (81) 8 (22) Sexo masculino 7 (44) 24 (65),152 Anti-CD3 3 (19) 12 (32),6 Anti-CD2 - Anti-CD15 1 (3),5 LMP1 1 (6) 3 (8),9 Pax5 - Anti-Clusterin 14 (88) 15 (41),7 Fascina 14 (88) 19 (51),2 EMA 13 (81) 4 (11) Anti-CD99 12 (75) 13 (35),1 Anti-p63 1 (6) 11 (3),7 Anti-CD45 9 (56) 18 (49),4 Anti CD (94) 24 (65),164
99 Dicas Forma clássica diagnóstico fácil CD3+ com CD2- ALK passou a ser mandatório Cuidado com os padrões que podem passar despercebidos CD3 de rotina Diagnóstico entre LGCA ALK- com Linfoma de Hodgkin pode ser muito difícil ampliar o painel
100 Obrigado! José Carlos Morais Departamento de Patologia Faculdade de Medicina UFRJ
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