MARIA DE LOURDES FIGUEIREDO DESENVOLVIMENTO DE PROTOCOLOS PARA PROPAGAÇÃO IN VITRO DE TRÊS ESPÉCIES DE BROMELIACEAE NATIVAS DO BRASIL

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1 MARIA DE LOURDES FIGUEIREDO DESENVOLVIMENTO DE PROTOCOLOS PARA PROPAGAÇÃO IN VITRO DE TRÊS ESPÉCIES DE BROMELIACEAE NATIVAS DO BRASIL Tese presentd à Universidde Federl de Viços, como prte ds exigêncis do Progrm de Pós- Grdução em Fitotecni pr obtenção do título de Mgister Scientie. VIÇOSA MINAS GERAIS BRASIL 2003

2 MARIA DE LOURDES FIGUEIREDO DESENVOLVIMENTO DE PROTOCOLOS PARA PROPAGAÇÃO IN VITRO DE TRÊS ESPÉCIES DE BROMELIACEAE NATIVAS DO BRASIL Tese presentd à Universidde Federl de Viços, como prte ds exigêncis do Progrm de Pós- Grdução em Fitotecni pr obtenção do título de Mgister Scientie. APROVADA: 22 de gosto de Prof. Affonso Henrique L. Zuin Prof. Milene Fri Vieir Prof. Cláudio Coelho de Pul (Conselheiro) Prof. José Antonio Sriv Grossi (Conselheiro) Prof. Sérgio Yoshimitsu Motoike (Orientdor)

3 Aos meus pis e irmãos DEDICO Ao meu compnheiro e migo Sidney OFEREÇO ii

4 AGRADECIMENTOS À Universidde Federl de Viços, pel oportunidde. Ao CNPq, pelo poio finnceiro. Ao professor e migo Sérgio Yoshimitsu Motoike, pel orientção, compreensão nos momentos mis difíceis e principlmente pel confinç. Aos professores José Mri, Fernndo Finger e Roberto Novis pelos conselhos e poio. Ao Professor Cláudio Coelho, pel doção do mteril botânico, pel bibliogrfi, pelo espço físico no bromeliário e pelo trblho em equipe. A Ênio, André, Fumico, Crlito, Devid e demis colegs do bromeliário. Aos(s) migos(s) Cenir, Auror, Virgíni, Gisel, Dorinh, Márcio, Alexndre, Ronldo, Edson e demis estgiários do Lbortório de Cultur de Céluls e Tecidos Vegetis do Deprtmento de Fitotecni. Aos Amigos dos Deprtmentos de Biologi Vegetl (Ntáli, Dnilo, Gilberto, Fábio, Adrino, Mercês, Mrreco, Ludiene, Silvâni, Aguinldo,, Wgner, etc.), Fitotecni (Mr, Vicente, Gerldo, Diolino, Lucino, Vlter, Hevilásio André, Júlio, etc.) e Solos (Gulter, Hermelind, Letúzi, etc). Aos compnheiros Tssino Mxwell e Smuel Ângelo por me colherem e pelo convívio frterno. A tods s pessos que, de lgum form, contribuírm pr conclusão deste trblho, o meu respeito e grtidão. iii

5 SUMÁRIO RESUMO... vii ABSTRACT... ix INTRODUÇÃO... 1 CAPÍTULO I... 5 REVISÃO DE LITERATURA Propgção nturl ds Bromeliáces Propgção in vitro de Bromeliáces Seleção e prepro d plnt mtriz Fse de estbelecimento Fse de multiplicção Fse de longmento e enrizmento Fse de climtizção Referêncis CAPÍTULO II PROPAGAÇÃO IN VITRO DE Acnthostchys strobilce (Schultes f.) Klotzsch Resumo Introdução Mteril e métodos Estbelecimento in vitro Multiplicção in vitro Alongmento e enrizmento in vitro iv

6 Aclimtizção Resultdos e discussão Estbelecimento in vitro Multiplicção in vitro Alongmento e enrizmento in vitro Aclimtizção Conclusões Protocolo Estbelecimento Multiplicção Alongmento e enrizmento Aclimtizção Referêncis CAPÍTULO III PROPAGAÇÃO IN VITRO DE Aechme bmbusoides L. B. Smith & Reitz Resumo Introdução Mteril e métodos Estbelecimento in vitro Multiplicção in vitro Alongmento e enrizmento in vitro Aclimtizção Resultdos e discussão Estbelecimento in vitro Multiplicção in vitro Alongmento e enrizmento in vitro Aclimtizção Conclusões Protocolo Estbelecimento Multiplicção Alongmento e enrizmento Aclimtizção v

7 Referêncis CAPÍTULO IV PROPAGAÇÃO IN VITRO DE Quesneli quesnelin (Brongnirt) L. B. Smith Resumo Introdução Mteril e métodos Estbelecimento in vitro Multiplicção in vitro Alongmento e enrizmento in vitro Aclimtizção Resultdos e discussão Estbelecimento in vitro Multiplicção in vitro Alongmento e enrizmento Aclimtizção Conclusões Protocolo Estbelecimento Multiplicção Alongmento e enrizmento Aclimtizção Referêncis CONCLUSÕES vi

8 RESUMO FIGUEIREDO, Mri de Lourdes, M. S., Universidde Federl de Viços, gosto de 2003, Desenvolvimento de protocolos pr propgção in vitro de três espécies de bromelicee ntivs do Brsil. Orientdor: Sérgio Yoshimitsu Motoike. Conselheiros: Cláudio Coelho de Pul, José Antonio Sriv Grossi e José Mri Moreir Dis. A destruição dos mbientes nturis ds bromeliáces, lid à colet indiscrimind, tem levdo muits espécies ntivs à extinção. No Estdo de Mins Geris já se encontrm listds 48 espécies meçds. Dinte disso form selecions três espécies ntivs deste Estdo (Acnthostchys strobilce, Aechme bmbusoides e Quesneli quesnelin) pr o desenvolvimento de protocolos de propgção in vitro. No lbortório, s sementes pssrm por um processo de desinfestção e form estbelecids in vitro. N fse de multiplicção in vitro, pr cd espécie foi feito um experimento, testndo-se cinco concentrções de BAP (0, 10, 20, 40 e 80 μm) e dus concentrções dos sis mineris de MS (50% e 100%). Avliou-se o número de brotções formds, ltur médi ds brotções e presenç de rízes ns brotções. Em seguid, s brotções form trnsferids pr meio de longmento e enrizmento. N fse de climtizção, s plântuls form submetids experimentos distintos. No cso de A. strobilce s plântuls tiverm s rízes removids e form seprds em três grupos: 1 (10 20 mm), 2 (30 40 mm) e 3 (50 60 mm). As plântuls de A. bmbusoides form seprds em dois grupos: 1 (20 40 mm) e 2 (cim de 4,1 60 mm). Testou-se como substrto xxim (Dicksoni sellowin) e gupé (Eichhorni crssipes) nesss dus espécies. Pr Q. quesnelin, selecionds com mm de ltur, testou-se xxim, gupé e mistur destes (1:1). Verificou-se que o trtmento de desinfestção ds sementes propiciou percentgem de contminção menor que 1%, pr s três espécies. O número de brotções formds, n etp de multiplicção, foi mior n concentrção estimd de 26,8 μm de BAP pr A. strobilce; 26,11 μm pr A. bmbusoides e 22,15 μm pr Q. quesnelin. No entnto, ltur médi ds brotções diminuiu vii

9 com o umento d concentrção de BAP. A formção de rízes só foi observd n usênci de BAP, pr tods s espécies estudds. O meio MS com metde d concentrção dos sis foi eficiente n multiplicção, no longmento e no enrizmento de A. strobilce e Q. quesnelin. Pr A. bmbusoides melhores resultdos form conseguidos com o meio MS não modificdo. O gupé pode ser utilizdo como substrto pr climtizção ds três espécies, sendo que, pr Q. quesnelin, o gupé deve ser misturdo com rei n proporção 1:1. viii

10 ABSTRACT FIGUEIREDO, Mri de Lourdes, M. S., Universidde Federl de Viços, August, 2003, Development of protocols for in vitro propgtion of three species of bromelicee ntive from Brzil. Adviser: Sérgio Yoshimitsu Motoike. Committee Members: Cláudio Coelho de Pul, José Antonio Sriv Grossi nd José Mri Moreir Dis. The destruction of the hbitts of the bromelicee, together with the indiscriminte gthering, hs thretened mny ntive species to extinction level. Tody In the stte of Mins Geris 48 species re listed s endngered. Considering this, three species (Acnthostchys strobilce, Aechme bmbusoides nd Quesneli quesnelin) ntive to this stte were selected for the estblishment of in vitro propgtion protocols. In the lbortory, the seeds underwent disinfesttion process nd were estblished in vitro. In the in vitro multipliction phse n experiment ws crried out with ech one of the selected species for testing five BAP concentrtions (0, 10, 20, 40 e 80 μm) nd two concentrtions of minerl slts in the MS culture medium (50% e 100%). Evlutions were mde through the produced xillry shoots, considering their number, men height nd rooting. After these evlutions, the shoots were trnsferred to the elongtion nd rooting medium. In the cclimtiztion phse the plntlets underwent different experiments. In the cse of A. strobilce the plntlets hd their roots removed, then seprted in three groups: 1 (10 to 20 mm), 2 (30 to 40 mm) nd 3 (50 to 60 mm). The plntlets of A. bmbusoides were seprted in two groups: 1 (20 to 40 mm) nd 2 (41 to 60 mm). These two species were tested on two substrtes: xxim (Dicksoni sellowin) nd wterhycinth (Eichhorni crssipes). For the experiment with Q. quesnelin, the plntlets utilized hd 20 to 30 mm of height nd the substrtes tested were xxim, wter-hycinth nd mix of these (1:1). It ws verified tht the disinfesttion tretment of the seeds provided contmintion less thn 1%, in ll species. The numbers of xillry shoots produced in the multipliction phse were greter in the estimted concentrtions of BAP: 26,8 μm in A. strobilce; ix

11 26,11 μm in A. bmbusoides nd 22,15 μm in Q. quesnelin. However, the men height of xillry shoots decresed with incresing BAP concentrtion. In ll species rooting occurred only in the bsence of BAP. The MS medium with hlf of the slt concentrtions ws efficient in the multipliction, elongtions nd rooting of A. strobilce nd Q. quesnelin. For A. bmbusoides the best results were obtined with the unmodified MS medium. The wter-hycinth my be utilized s substrte in the cclimtiztion of the three species, but in the cse of Q. quesnelin this substrte must be mixed with snd in n 1:1 proportion. x

12 INTRODUÇÃO A fmíli Bromelicee pertence à clsse Monocotiledonee e está subdividid em três subfmílis: Bromelioidee, Pitcrnioidee e Tillndsiodee (Smith e Downs, 1974). No Brsil podem ser encontrdos mis de 73% dos gêneros de Bromelicee ctlogdos té o momento e mis d metde ds espécies já clssificds (Pul e Silv, 2001). Em todos os ecossistems brsileiros são encontrds espécies dest fmíli, que possuem diferentes hábitos de crescimento: rupícols, sxícols, terrestres e epífits, sendo Mt Atlântic o ecossistem com mior diversidde de bromélis, com vários gêneros endêmicos (Leme e Mrigo, 1993). Entretnto, destruição dos hbitts, lid à colet indiscrimind desss espécies, tem levdo muits espécies ntivs à extinção. Atulmente, um totl de 15 espécies são citds n List Oficil de Espécies d Flor Brsileir Ameçd de Extinção (IBAMA, 1992), sendo que região Sudeste, mis degrdds de todo o pís, é o centro de diversidde d Subfmíli Bromelioidee (Leme e Mrigo, 1993), que present mior número de gêneros (Luther, 2000). Em Mins Geris, se listm 48 espécies d fmíli em risco de extinção (Mendonç e Lins, 2000). N Zon d Mt Mineir, espécie Acnthostchys strobilce (Schultes f.) Klotzsch ocorre exclusivmente como epífit, em grndes árvores, loclizds gerlmente n bifurcção dos troncos, sob luz difus. O desmtmento dests grndes árvores levou um redução drástic n 1

13 populção dest espécie de tl form que rrmente é encontrd nos frgmentos florestis ind existentes nest região (Pul, 2003). A espécie Aechme bmbusoides L. B. Smith & Reitz ocorre no Vle do Príb, nos estdos do Rio de Jneiro e Mins Geris, onde se loclizvm em árvores isolds e remnescentes d Florest Atlântic Sub-cducifóli, que recobri totlmente região (Pul, 2003). Est espécie encontr-se n list ds espécies meçds de extinção d flor de Mins Geris (Mendonç e Lins, 2000), não ocorrendo em nenhum áre de unidde de conservção, tornndo-se mis susceptível o processo de extinção, em decorrênci do corte de árvores pr mplição de pstgens e principlmente, devido s queimds no período seco (Pul, 2003). A espécie Quesneli quesnelin (Brongnirt) L. B. Smith, pesr de ind não estr n list ds espécies meçds de extinção, é um plnt cujs populções ntivs vêm sofrendo grnde pressão degrdtiv, por ocorrerem em áre de grnde ção ntrópic. No Rio de Jneiro est espécie ocorre, preferencilmente, n região litorâne, em áres de Resting, onde o ecossistem encontr-se severmente degrddo e com os frgmentos d vegetção restnte sendo lvo d especulção imobiliári (Smith e Downs, 1979). O desenvolvimento de pesquiss visndo conservção ds espécies em seus hbitts, bem como o desenvolvimento de tecnologi de produção desss espécies, evitndo seu extrtivismo, é fundmentl pr conservção ds Bromelicee no Brsil. Dinte disso UPCB (Unidde de Pesquis e Conservção de Bromelicee) vem estimulndo pesquiss com espécies d subfmíli Bromelioidee, ocorrente n região Sudeste. Dentre ests espécies, form selecionds s três espécies citds, de ocorrênci em diferentes áres d região de Mins Geris, pr o desenvolvimento deste trblho de propgção in vitro. Est técnic de propgção pode ser empregd com eficiênci n preservção d Bromelicee. No entnto, miori ds pesquiss publicds com espécies dest fmíli refere-se o bcxi (Mthews e Rngn, 1979; Cote et l., 1991; Almeid et l., 1997; Guerr et l., 1999; Prxedes et l., 2000). Dest form, o objetivo deste trblho foi desenvolver protocolos pr propgção in vitro de A. strobilce, A. bmbusoides e Q. quesnelin, 2

14 subsidindo projetos de reintrodução, bem como su produção em escl comercil. Referêncis Almeid, W. A. B. de.; Mtos, A. P. de.; Souz, A. d S.: Effects of benzilminopurine (BAP) on in vitro prolifertion of pinepple (Anns comosus (L.) Merr.). In: Mrtin-Prével, P.; Hugon, R. (eds) Proceedings of the second interntionl pinepple symposium, Trois-Ilets, Mrtinic, 1995, Act Horticulture, Cote, F.; Domergue, R.; Folliot, M.; Bouffin, J.; Mrie, F.: Micropropgtion in vitro de l'nns. Fruits numéro spécil Anns: Guerr, M. P.; Vesco, L. L. de.; Pescdor, R.; Schuelter, A. R.; Nodri, R. O.: Estbelecimento de um protocolo regenertivo pr micropropgção do bcxizeiro. Pesquis Agropecuári Brsileir 34: IBAMA: List oficil de espécies d flor brsileir meçds de extinsão. Portri Nº 37-N in 3 de bril de Leme, E. M. C.; Mrigo, L. C.: Bromelids in the Brzilin wilderness. Mrigo Comunicção Visul, Rio de Jneiro. 183p Luther, H. E.: An lphbeticl list of bromelid binomils. Bromelid Society Interntionl, Srosot, Florid. 120p Mthews, V. H.; Rngn, T. S.: Multiple plntlets in lterl bud nd lef explnts in vitro cultures of pinepple. Scienti Horticulture 11: Mendonç, M. P.; Lins, L. V.: List vermelh ds espécies meçds de extinção d flor de Mins Geris. Fundção Biodiversits, Fundção Zoobotânic de Belo Horizonte, Belo Horizonte. 157p Pul, C. C. de. Comunicção pessol. Deprtmento de biologi vegetl Universidde Federl de Viços. Viços, MG Pul, C. C. de.; Silv, H. M. P. d.: Cultivo prático de bromélis. Editor UFV, Viços. 73p Prxedes, S. C.; Silv Jr, A. F.; Figueirêdo, F. L.; Figueiredo, M. L.; Câmr, F. A. A.; Oliveir, O. F.: Efeito do ANA e do AIA no estiolmento in vitro do bcxi cv. Pérol Congresso Brsileiro de Fruticultur, Fortlez, 2000, Embrp / Sociedde Brsileir de Fruticultur,

15 Smith, L. B.; Downs, R. J.: Flor Neotropic. Pitcirnioidee (Bromelicee). Collier-Mcmilln Publishers, Nov Iorque p Smith, L. B.; Downs, R. J.: Flor Neotropic. Bromelioidee (Bromelicee). The New York Botnicl Grden, Nov Iorque p

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17 REVISÃO DE LITERATURA 1. Propgção nturl ds Bromeliáces A propgção ds bromeliáces pode ocorrer tnto pel vi seminífer ou sexud, qunto pel propgção vegettiv nturl, prtir de brotções xilres. A multiplicção de bromélis por vi seminífer, tem desvntgem d grnde vribilidde genétic, o que impossibilit mnutenção nos descendentes ds crcterístics genétics de um mtriz híbrid ou vriedde seleciond. De cordo com Vn Dijck et l. (1988), este método de propgção possui inconveniênci de ser lento. Pelo processo vegettivo, s brotções surgem gerlmente durnte ou pós florção, e o tingirem proximdmente um terço do tmnho d plnt mãe, poderão ser usds como muds (Pul e Silv, 2001). Este método é o mis utilizdo pr fins comerciis, porém tem s desvntgens do número limitdo de brotções emitids (Red e Szendrák, 1998) e d disseminção de doençs (Guerr et l., 1999). A vntgem d propgção por brotções reside no fto de se selecionr clones com crcterístics gronomicmente desejáveis. O mercdo tem vlorizdo introdução de novos clones e este tem sido um ftor de concorrênci entre os produtores de bromélis (Pul e Silv, 2001). 2. Propgção in vitro de Bromeliáces As técnics de cultivo in vitro podem ser plicds tnto pr propgção sexud, como pr ssexud. N propgção sexud, o uso de sementes permite obtenção de mior número de plnts, que em termos 6

18 ecológicos pode ser utilizdo n preservção de espécies meçds (Zornig, 1996). N propgção vegettiv, cultur in vitro pode propicir obtenção de muds uniformes, de lt qulidde e livres de doençs, lém de permitir multiplicção rápid e geneticmente confiável de novos cultivres e híbridos (Cote et l., 1991; Tombolto et l., 1998; Guerr et l., 1999). No entnto, flt protocolo dequdo pr cd espécie (Tombolto e Cost, 1998). A propgção in vitro ds bromeliáces é constituíd de cinco etps distints: seleção e preprção d plnt mtriz, estbelecimento, multiplicção, longmento e enrizmento e climtizção (Zornig, 1996). Cd etp tem seus próprios problems e prticulriddes que vrim de cordo com espécie e té mesmo entre vrieddes (George, 1993) e, dependendo d espécie, nem sempre tods ests etps são necessáris (Grttpgli e Mchdo, 1998; Tombolto e Cost, 1998). Cote et l. (1991) considerrm pens três etps no cultivo in vitro de bcxi: fse de cultur inicil, fse de multiplicção e fse de crescimento Seleção e prepro d plnt mtriz A seleção de determindo tecido vegetl pr ser utilizdo como explnte depende do objetivo d pesquis. As mtrizes de bromeliáces selecionds, segundo Zornig (1996), devem permnecer por dois três meses sob cuiddos de higiene e trtmentos regultórios com fungicid e, ou ntibióticos, em cs de vegetção Fse de estbelecimento A fse de estbelecimento consiste n introdução in vitro do explnte proveniente de mbientes nturis. Os explntes de bromélis podem ser sementes (Grossi, 2000; Koh e Dvies Jr., 2001) ou tecidos (Hosoki e Ashir, 1980; Koh e Dvies Jr., 1997), que são desinfestdos com substâncis de ção germicid. As substâncis mis comuns são o etnol e os compostos bse de cloro crescidos, lgums vezes, de esplhnte desivo pr melhorr o contto deste com os tecidos. (Grttpgli e Mchdo, 1998). Crneiro et l. (1999) desinfestrm sementes de Neoregeli cruent com etnol 70% e 7

19 hipoclorito de sódio 5% mis 0,01% de Tween-80, por 30 minutos. Koh e Dvies Jr. (2001) utilizrm 10% de Clorox por 10 minutos pr desinfestr cápsuls de Tillndsi fscicult. N desinfestção de gems de bcxi, Cote et l. (1991), recomendrm usr hipoclorito de sódio com 6% de cloro tivo por 20 minutos e Guerr et l. (1999), utilizrm álcool 70% por um minuto, seguido por hipoclorito de sódio 2% por 15 minutos. Hosoki e Ashir (1980) utilizrm hipoclorito de sódio com 1% de cloro tivo por 10 minutos, pr desinfestr gems lteris de qutro espécies de bromeliáces Fse de multiplicção O principl objetivo d fse de multiplicção é produzir o mior número de plnts possível, no menor espço de tempo (Grttpgli e Mchdo, 1998). Atulmente, não é possível indicr um meio de cultivo idel pr cd espécie (Tombolto e Cost, 1998). N miori dos trblhos in vitro com bromeliáces foi utilizd formulção desenvolvid por Murshigue e Skoog, em 1962 (Cote et l., 1991; Tombolto et l., 1998; Crneiro et l., 1999; Guerr et l., 1999). N fse de multiplicção, s citocinins são utilizds, freqüentemente, junto com uxins, pr estimulr divisão celulr e controlr morfogênese (George, 1993; Tiz e Zeiger, 2002). Qundo dicionds o meio de cultivo, s citocinins quebrm dominânci picl e induzem proliferção de gems xilres (Grttpgli e Mchdo, 1998). As citocinins nturis não são muito utilizds em lbortórios comerciis, devido o seu custo, e entre s sintétics, 6-benzilminopurin (BAP) é mis utilizd (George, 1993). O BAP, isoldmente ou juntmente com uxins, diciondo o meio de cultivo, tem sido eficz pr promover multiplicção em diverss espécies de bromeliáces, sendo que s concentrções são específics pr cd vegetl (Tglicozzo, 1998), podendo vrir dentro d própri espécie (Almeid et l., 1997). Alts concentrções de BAP inibiu o processo de brotção em bcxi (Kiss et l., 1995). Pr bcxi, Cote et l. (1991) recomendrm usr 2,2 μm de BAP no meio de cultivo. No entnto, Oliveir et l. (1996) observrm mior número de brotos pr cultivr sky qundo utilizrm 4,44 μm de BAP. Pr os cultivres Peroler e Primver, o mior número de brotções foi obtido com 8

20 combinção de 2,7 μm de ácido nftlenocético (ANA) e 4,4 μm de BAP (Guerr et l., 1999). Pr cultivr smooth cyenne, Arújo et l. (1996) obtiverm mior número de brotos n usênci d uxin ANA e com 13,32 μm de BAP. Pr Neoregeli croline, Tombolto et l. (1998) recomendm 10,74 μm de ANA mis 8,88 μm de BAP. Entretnto, pr N. cruent melhores resultdos form obtidos com 22 μm de BAP e 2,5 μm de ANA (Crneiro et l., 1999). Vários ftores podem estr relciondos com quntidde requerid de reguldor de crescimento exógeno, tis como, genétic, tipo e idde fisiológic dos explntes, condições mbientis de cultivo e composição minerl do meio de cultivo (George, 1993; Grttpgli e Mchdo, 1998). O estdo físico do meio tmbém tem influênci sobre multiplicção de prtes éres. Meios sólidos ou semi-sólidos são mis comuns em cultivo in vitro (Grttpgli e Mchdo, 1998) porém, pr o bcxi, o meio líquido é mis eficiente (Mthews e Rngn, 1979; Guerr et l., 1999) Fse de longmento e enrizmento O objetivo dest etp é promover o longmento ds céluls e formção de rízes dventícis ns brotções provenientes d multiplicção. De cordo com Grttpgli e Mchdo (1998), tipos e concentrções de uxins são s vriáveis que, em gerl, mis influencirm o enrizmento. Neste cso, s prtes éres em rápido crescimento são fontes de intens produção de uxin, qul é trnslocd pr bse, estimulndo rizogênese. O meio MS sólido, sem reguldor de crescimento é indicdo pr o bcxi (Cote et l., 1991) e Neoregeli croline (Tombolto et l., 1998). No entnto, Cbrl et l. (1983) recomendrm o meio líquido sem reguldor de crescimento pr o enrizmento de bcxi, que possibilitou o crescimento mis rápido dos explntes. Porém, o cultivo em meio líquido requer lgum form de erção, mntendo s culturs em gitção ou empregndo pontes de ppel filtro pr o suporte ds prtes éres (Grttpgli e Mchdo, 1998). De modo gerl, qundo relção citocin/uxin é fvorável à uxin pode hver indução de rízes, cso contrário, há um estímulo d formção de 9

21 prte ére (Hinojos, 2000). Guerr et l. (1999) dicionrm o meio MS líquido, pr bcxi, 2,7 μm de ANA e 4,4 μm de BAP. O enrizmento in vitro pode tmbém ser estimuldo pel modificção d concentrção dos sis nutrientes d formulção básic utilizd. Diluições de 1/2, 1/3 e 1/4 d concentrção slin do meio MS são, freqüentemente, utilizdos nest fse, dependendo d espécie (Hsegw, 1980; Vlles e Boxus, 1987; Zornig, 1996). De cordo com Grttpgli e Mchdo (1998), o enrizmento é um etp que pode ser relizd in vitro ou ex vitro. No enrizmento in vitro, s rízes são formds em condições sséptics e plnt complet é trnsplntd pr recipientes contendo substrto proprido. Em condições ex vitro, todo o processo de enrizmento se dá em substrto. A opção por um dos sistems depende, fundmentlmente, d qulidde ds prtes éres obtids n multiplicção, d espécie e genótipo em questão, lém d disponibilidde de infr estrutur dequd de cs de vegetção, câmr de nevoeiro ou teldo Fse de climtizção O termo climtizção é definido como dptção climátic de um orgnismo, especilmente um plnt, que é trnsferido pr um novo mbiente, sendo todo este processo relizdo rtificilmente (Cost, 1998). A etp de climtizção, n propgção in vitro, consiste n trnsferênci d plântul d condição de lbortório, onde el é heterotrófic, pr o mbiente nturl, qundo plântul torn-se utotrófic. Est pssgem é bstnte crític e represent, em lguns csos, um ftor limitnte do processo de propgção in vitro (Grttpgli e Mchdo, 1998). Cost (1998) citou que est fse é muito delicd porque represent um estresse pr plântul e pelo perigo de infecções por fungos e bctéris. Neste sentido, escolh do substrto é um ftor relevnte neste processo. O substrto deve possuir, como crcterístics físics, bo retenção de umidde e bo drengem (Grttpgli e Mchdo, 1998; Pul e Silv, 2001). Pr o bcxi, testes com misturs de substrtos, tis como solo + xxim + turf e solo + xxim + rei + húmus, têm comportmento semelhnte qunto 10

22 o índice de sobrevivênci ds plnts (Futh et l., 1994). Apesr de existirem diversos substrtos pr o cultivo de bromélis, o xxim é considerdo o melhor de todos (Pul e Silv, 2001). O xxim é extrído d espécie Dicksoni sellowin (Pr.) Hook, tmbém conhecid populrmente por smmbiçu, smmbiçu-imperil e fetorborescente. A D. sellowin é um plnt com cule ereto, fibroso e espesso, possui 2 4 metros de ltur e tem crescimento muito lento. Do seu cule são retirdos os vsos de xxim e, ind o xxim em pedços, fibr ou pó é utilizdo como substrto pr o cultivo de diverss plnts (Lorenzi e Souz, 1999). No entnto, D. sellowin está em processo de extinção devido à colet indiscrimind (IBAMA, 1992; Demttê e Grzino, 2000; Stncto et l., 2000). Um possível lterntiv pr substituir o xxim, no cultivo de bromeliáces, é o gupé, Eichhorni crssipes (Mrt.) Solms, um plnt quátic constituíd de 95% de águ (Pádu, 2003) e cujs rízes podem medir té um metro (Jrdim de Flores, 2003). Est plnt multiplic-se rpidmente, podendo duplicr-se em dus semns. Em função dests crcterístics, o gupé pode prejudicr nvegbilidde dos rios, cusr problems em repress e dnificr s turbins de usins hidroelétrics (Fermino et l., 2000; Greco, 2003). Dependendo do locl no qul foi coletdo, o gupé seco pode ser usdo como fertiliznte e dubo pr solos (Pádu, 2003). De cordo com Fermino et l., (2000) o gupé seco pós triturção, presentou crcterístics físics e químic proprids pr ser proveitdo como um econômico substrto pr plnts hortícols. N UPCB (Unidde de Pesquis e Conservção d Bromelicee) o gupé, seco e dividido mnulmente em pedços, é utilizdo n composição de mis de 90% dos substrtos utilizdos ns bromélis. Referêncis Almeid, W. A. B. de.; Mtos, A. P. de.; Souz, A. d S.: Effects of benzilminopurine (BAP) on in vitro prolifertion of pinepple (Anns comosus (L.) Merr.). In: Mrtin-Prével, P.; Hugon, R. (eds) Proceedings of the second interntionl pinepple symposium, Trois-Ilets, Mrtinic, 1995, Act Horticulture,

23 Arújo, R. F.; Siqueir, D. L.; Couto, F. A. D. A.; Slomão, L. C. C.: Proliferção de brotos de bcxi, in vitro, em concentrções de benzilminopurin (BAP) e ácido nftlenocético (ANA) Congresso Brsileiro de Fruticultur, 14 - Reunião Intermericn de Horticultur Tropicl, 42 - Simpósio Interncionl de Mirtáces, Curitib, 1996, Sociedde Brsileir de Fruticultur, Cbrl, J. R. S.; Cunh, G. A. P.; Rodrigues, E. M.: Propgção do bcxi "in vitro", 2p. Embrp, Cruz ds Alms Crneiro, L. A.; Arújo, R. F. G.; Brito, G. J. M.; Fonsec, M. H. P. B.; Cost, A.; Crocromo, O. J.; Mnsur, E.: In vitro regenertion from lef explnts of Neoregeli cruent (R. Grhm) L. B. Smith, n endemic bromelid from Estern Brzil. Plnt Cell, Tissue nd Orgn Culture 55: Cost, A. M. M.: Fisiologi d climtção. In: Tombolto, A. F. C.; Cost, A. M. M. (eds) Micropropgção de plnts ornmentis, p Instituto Agronômico, Cmpins Cote, F.; Domergue, R.; Folliot, M.; Bouffin, J.; Mrie, F.: Micropropgtion in vitro de l'nns. Fruits numéro spécil Anns: Demttê, M. E. S. P.; Grzino, T. T.: Growth of Dendrobium nobile Lindl. s relted with nutrient concentrtion in the growing medi, 2000, Act Horticulture. Futh, A.; Tofol, M.; Silv, A. L.; Mrschin, M.: Aclimtção de muds de bcxi (Anns comosus (L.) Merril) resistentes à fusriose, cultivds in vitro. Revist Brsileir de Fruticultur 16: Fermino, M. H.; Kämpf, A. N.; Trentin, A. L.: Crcterizção físic e químic de mteriis lterntivos pr composição de substrtos pr plnts.: 2. Agupé, Eichhorni crssipes (Mrt) Solms. In: Kämpf, A. N.; Fermino, M. H. (eds) 1 o. Encontro Ncionl Sobre Substrto pr Plnts, p , Porto Alegre, 1999, Genesis, George, E. F.: Plnt propgtion by tissue culture, Prt 1: The technology. Exegetics Limited, Edington. 574p Grttpgli, D.; Mchdo, M. A.: Micropropgção. In: Torres, A. C.; Clds, L. S.; Buso, J. A. (eds) Cultur de tecidos e trnsformção genétic de plnts, p Embrp, Brsíli Grossi, F.: Aspectos d nutrição nitrogend in vitro e tividde d redutse de nitrto em um espécie de broméli Centro de Energi Nucler n Agricultur, Tese de Doutordo. 116p. Universidde de São Pulo, Pircicb Guerr, M. P.; Vesco, L. L. dl.; Pescdor, R.; Schuelter, A. R.;Nodri, R. O.: Estbelecimento de m protocolo regenertivo pr micropropgção do 12

24 bcxizeiro. Pesquis Agropecuári Brsileir 34: Hsegw, P. M.: Fctors ffecting shoot nd root initition from cultured rose shoot tips. Journl of the Americn Society for Horticulturl Science 105: Hinojos, G. F.: Auxins. In: Cid, L. P. B. (ed) Introdução os hormônios vegetis, p Embrp, Brsíli Hosoki, T.; Ashir, T.: In vitro propgtion of bromelids in liquid culture. HortScience 15: IBAMA: List oficil de espécies d flor brsileir meçds de extinsão. Portri Nº 37-N in 3 de bril de Jrdim de Flores: Agupé, o "vegetl-águ" in 4 de junho de Kiss, E.; Kiss, J.; Gyuli, G.; Heszky, L. E.: A novel method for rpid micropropgtion of pinepple. HortScience 30: Koh, Y. C.; Dvies Jr., F. T.: Micropropgtion of Cryptnthus with lef explnts with ttched interclry meristems excised from greenhouse stock plnts. Scienti Horticulture 70: Koh, Y. C.; Dvies Jr., F. T.: Mutgenesis nd in vitro culture of Tillndsi fscicult Swrtz vr. fscicult (Bromelicee). Scienti Horticulture 87: Lorenzi, H.; Souz, H. M. de.: Plnts ornmentis no Brsil. Instituto Plntrum, Nov Odes. 1120p Mthews, V. H.; Rngn, T. S.: Multiple plntlets in lterl bud nd lef explnts in vitro cultures of pinepple. Scienti Horticulture 11: Oliveir, P. D. de.; Psqul, M.; Kwmur, M. I.; Myer, M. D. B.; Piv, R.: Efeito do BAP, thidizuron e sulfto de denin n propgção in vitro de bcxi. Congresso Brsileiro de Fruticultur, 14 - Reunião Intermericn de Horticultur Tropicl, 42 - Simpósio Interncionl de Mirtáces, Curitib, 1996, Sociedde Brsileir de Fruticultur, Pul, C. C. de.: Cultivo de bromélis. Aprend Fácil, Viços. 140p Pul, C. C. de.; Silv, H. M. P. d.: Cultivo prático de bromélis. Editor UFV, Viços. 73p Pádu, H. B. de.: Agupé - plnt quátic no controle e remoção de nutrientes e outros compostos em piscultur e pesqueiro in 4 de junho de 13

25 2003. Red, P. E.; Szendrák, E.: Micropropgtion nd biotechnology of tropicl nd subtropicl ornmentls. In: Drew, R. A. (ed) Interntionl Symposium of Biotechnology of Tropicl & Subtropicl Species, 1998, Act Horticulture, Stncto, G. C.; Abreu, M. F.; Berton, R.; Kerbuy, G. B.: Cultivo de plnts de dendrobium nobile cv. Gilblnk (Orchidcee) em substrtos contendo xxim ou csc de conífers. In: Kämpf, A. N.; Fermino, M. H. (eds) 1 o. Encontro Ncionl Sobre Substrto pr Plnts, p , Porto Alegre, 1999, Genesis, Tglicozzo, G. M. D.: Fitormônios e seus efeitos biológicos in vivo e in vitro. In: Tombolto, A. F. C.; Cost, A. M. M. (eds) Micropropgção de plnts ornmentis, p Instituto Agronômico, Cmpins Tiz, L.; Zeiger, E.: Plnt Physiology. Sinuer Assocites, Sunderlnd. 690p Tombolto, A. F. C.; Cost, A. M. M.: Micropropgção em plnts ornmentis. In: Tombolto, A. F. C.; Cost, A. M. M. (eds) Micropropgção de plnts ornmentis, p Instituto Agronômico, Cmpins Tombolto, A. F. C.; Tkebyshi, S. S. G.; Cost, A. M. M.; Quirino, E. A.: Broméli (Neoregeli croline). In: Tombolto, A. F. C.; Cost, A. M. M. (eds) Micropropgção de plnts ornmentis, p Instituto Agronômico, Cmpins Vlles, M.; Boxus, P.: Micropropgtion of severl Ros hybrid L. cultivrs. Act Horticulture 212: Vn Dijck, R.; Proft, M. de; Greef, J. de: Role of ethylene nd cytokinins in the initition of lterl shoot growth in bromelids. Plnt Physiology 86: Zornig, R. K.: Micropropgção de bromélis. Broméli 3:

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27 PROPAGAÇÃO IN VITRO DE Acnthostchys strobilce (Schultes f.) Klotzsch Resumo O objetivo deste estudo foi estbelecer um protocolo pr propgção in vitro de Acnthostchys strobilce. N etp de multiplicção testou-se o efeito de 0, 10, 20, 40 e 80 μm de BAP e dus concentrções dos sis mineris de Murshige e Skoog (1962) (50 e 100%), com 100% de nutrientes orgânicos. N etp de climtizção s plântuls de A. strobilce, sem rízes, form seprds em três grupos: 1 (10 20 mm), 2 (30 40 mm) e 3 (50 60 mm). Como substrto testou-se xxim e gupé. Observou-se que o número de brotções formds foi mior n concentrção estimd de 26,8 μm BAP (60,7 brotções por plântul). No entnto, ltur médi ds brotções diminuiu com o umento d concentrção de BAP. N usênci de BAP foi observdo formção de rízes, sendo que n presenç de BAP formção de rízes foi inibid. Não houve diferenç significtiv pr s crcterístics vlids, entre s dus concentrções do meio MS. Foi possível climtizr plântuls de A. strobilce com ltur prtir de 10 mm e sem rízes. O gupé demonstrou ser um bom substrto pr climtizção dest espécie, com percentgem de sobrevivênci superior 85%. 16

28 2.1. Introdução Dentre s bromeliáces ornmentis, Acnthostchys strobilce (Schultes f.) Klotzsch se crcteriz por presentr folhs fsciculds o longo do cule sem formr roset nem cistern, inflorescênci colorid com flores grupds, ssemelhndo-se um estróbilo e bgs grndes, de colorção lrnj vermelho intenso (Reitz, 1983). A. strobilce é, preferencilmente, epífit e rrmente rupícol ou sxícol. Est espécie present grnde distribuição no Brsil. N Zon d Mt de Mins Geris, ocorre exclusivmente como epífit em grndes árvores, desenvolvendo-se, gerlmente, em bifurcções de troncos. O extrtivismo dests grndes árvores levou um redução drástic n populção dest espécie, sendo hoje encontrd quse que somente nos frgmentos florestis ind existentes nquele estdo. A bix produção de sementes, com dispersão restrit pels ves, dificult o seu restbelecimento nturl nos remnescentes florestis. A propgção vegettiv é pouco eficiente. Após florção, plnt produz de dois três brotos, por no, que surgem n bse d mesm (Pul, 2003). Dess form, o estbelecimento de um protocolo pr propgção in vitro dest espécie é mneir mis eficiente de disponibilizr muds pr futurs reintroduções ou mesmo pr o cultivo comercil, sendo este protocolo o objetivo deste trblho Mteril e métodos O cultivo in vitro foi conduzido no Lbortório de Cultur de Céluls e Tecidos Vegetis do Deprtmento de Fitotecni, d Universidde Federl de Viços (UFV), e etp de climtizção foi relizd n Unidde de Pesquis e Conservção de Bromelicee (UPCB), do Deprtmento de Biologi Vegetl d UFV. 17

29 Estbelecimento in vitro As sementes de Acnthostchys strobilce (Schultes f.) Klotzsch 1, obtids de espécimes cultivdos n UPCB, form desinfestds trvés d imersão em álcool 70% (v/v) por um minuto, lvds com águ deionizd estéril e em seguid imerss em solução de hipoclorito de sódio (2,0 2,5% de cloro tivo) e 0,01% de Tween 20, por 15 minutos. Em tods s etps, s sementes form mntids sob gitção. Após o trtmento de desinfestção, s sementes form enxguds, por três vezes, com águ deionizd estéril. Em seguid form inoculds em meio de cultivo. Este foi composto dos 50% de sis mineris e 100% de compostos orgânicos do meio de MS (Murshige e Skoog, 1962). O ph do meio foi justdo pr 5,70 ± 0,01 e gelificdo com 8,0 g L -1 de ágr (Grupo Químic). Utilizou-se 10 ml de meio em tubos de ensio (25 mm x 150 mm) que form utoclvdos C e 1,5 tm por 20 minutos. Após inoculção, os explntes form incubdos à tempertur de 27 ± 2 ºC, fotoperíodo de 16 hors e irrdiânci de 40 μmol m -2 s -1, fornecid por lâmpds fluorescentes (Osrm, luz do di, 40 W) Multiplicção in vitro N fse de multiplicção in vitro, form testds cinco concentrções de BAP (0, 10, 20, 40 e 80 μm) e dus concentrções dos sis de MS (50% e 100%), em um experimento ftoril (5 x 2). O delinemento dotdo foi o de blocos completos csulizdos (DBC), com seis repetições. Cd bloco foi constituído de plântuls previmente estbelecids in vitro, de tmnho uniforme (mínimo de 20 mm) e sem rízes. Todos os meios de cultivo continhm os componentes orgânicos completos do meio MS e o ph justdo pr 5,70 ± 0,01, ntes d esterilizção à C e 1,5 tm por 20 minutos. Form utilizdos recipientes de 350 ml, contendo 15 ml de meio de cultur, onde foi colocd um plântul. O cultivo foi conduzido em meio líquido estcionário, ns condições mbientis mencionds nteriormente, por um 1 A identificção do mteril pr o recente trblho fundmentou-se n nálise d morfologi vegettiv e florl de espécimes cultivds n Unidde de Pesquiss e Conservção de Bromelicee (UPCB) - UFV, bem como n nálise de exsict (VIC nº ), no Herbário do Deprtmento de Biologi Vegetl (Herbário VIC). 18

30 período de sete semns, qundo form submetidos à vlição. As crcterístics observds form o número de brotções por plântul, ltur médi ds brotções e presenç de rízes ns brotções Alongmento e enrizmento in vitro A etp de longmento e enrizmento foi conduzid no mesmo tipo de recipiente d fse nterior, contendo 15 ml de meio líquido, em condição estcionári. O meio de cultivo foi composto de 50% de sis e 100% de compostos orgânicos de MS. O ph do meio, esterilizção e s condições de incubção form como s descrits ns etps nteriores Aclimtizção A etp de climtizção foi relizd no período de bril junho de Form selecionds plântuls de A. strobilce, removids s rízes, e seprds em três grupos: 1 (10 20 mm), 2 (30 40 mm) e 3 (50 60 mm). Ests form plntds em bndejs de isopor com céluls de 50 ml. Testou-se xxim (Dicksoni sellowin (Pr.) Hook) e gupé (Eichhorni crssipes (Mrt.) Solms) seco e desfido mão, proveniente d lgo do Setor de Eqüideocultur d UFV. O experimento foi montdo em um ftoril 3 x 2, em DBC, com cinco repetições e 12 plântuls por prcel. Quinze dis pós o plntio, s plântuls form pulverizds com benlte (2 g L -1 ). Aos 29 dis form dubds com Osmocote (0,03 g por célul) e pssrm receber dubção folir semnlmente (2 g L -1 Peters ). Aos 60 dis form vlids percentgem de sobrevivênci, o número de rízes por plnt e mtéri sec por plnt. Os ddos form submetidos à nálise de vriânci e s médis ds crcterístics justds à regressão ou comprds pelo teste de Tukey 5% de probbilidde. 19

31 2.3. Resultdos e discussão Estbelecimento in vitro O trtmento de desinfestção ds sementes proporcionou um percentgem de contminção menor que 1%. A germinção ds sementes ocorreu com proximdmente 15 dis d incubção. O tempo de exposição e concentrção ds soluções desinfestntes não prejudicrm vibilidde ds sementes, que possuím um tegumento rígido, crcterístic ds espécies d subfmíli Bromelioidee (Smith e Dws, 1979). Est metodologi tmbém foi eficiente n desinfestção de sementes de Aechme bmbusoides (Cpítulo III) e Quesneli quesnelin (Cpítulo IV). Qundo s sementes estão protegids por seus tecidos tegumentres, concentrção e o tempo de exposição o hipocloríto de sódio podem ser miores (Grttpgli e Mchdo, 1998). Pr ssepsi de gems de Neoregeli croline, Tombolto et l. (1998) recomendrm usr hipoclorito de cálcio 1,5%, por 10 minutos. A loclizção do explnte n plnt e o mbiente em que s plnts mtrizes form mntids e seu bom specto fitossnitário podem ter contribuído tmbém pr bix percentgem de contminção. Além disso s sementes utilizds neste experimento form extríds de frutos intctos, nos quis s sementes se encontrvm protegids por um mucilgem Multiplicção in vitro O número de brotções formds foi mior n concentrção estimd de 26,8 μm de BAP (60,7 brotções por plântul). Em concentrções superiores est, o BAP mostrou-se inibitório o processo de brotção (Figur 1A). O efeito ntgônico de dosgens elevds de BAP tmbém tem sido observdo n brotção de gems de bcxi (Anns comosus) (Kiss et l., 1995). A ltur médi ds brotções diminuiu com o umento d concentrção de BAP (Figur 1B). Provvelmente, dição crescente de BAP o meio de cultivo diminuiu relção uxin/citocinin ds plântuls in vitro, inibindo o longmento ds brotções (Tiz e Zeiger, 2002). Outros ftores, como competição por nutrientes e espço, tmbém podem ter fetdo ltur ds brotções. 20

32 70 A 60 B Número de brotções Altur ds brotções (mm) BAP ( (μm) BAP ( (μm) Figur 1: Estimtiv do efeito do BAP no número de brotções (A) e n ltur médi ds brotções (B) de Acnthostchys strobilce. (A: Ŷ = 5, , **X + 21,15971**X 0,5, R 2 = 0,94; B: Ŷ -1 = 0, ** + 0, **X 0,5, R 2 = 0,99). N usênci de BAP observou-se formção de rízes, sendo que n presenç deste fitoreguldor formção de rízes foi inibid (ddos não presentdos). O efeito inibitório do BAP n formção de rízes in vitro é bstnte conhecido, sendo tribuído à bix relção uxin/citocinin (Fosket, 1994). Neste experimento não se observou efeito significtivo ds diferentes concentrções do meio MS, pr s crcterístics vlids, indicndo que metde d concentrção dos sis do MS é suficiente pr permitir bom desenvolvimento ds brotções (Figurs 2). Número de brotções A 50% 100% Altur ds brotções (mm) B 50% 100% Figur 2: Efeito d concentrção de sis de MS no número de brotções (A) e n ltur ds brotções (B) de Acnthostchys strobilce. Médis seguids pel mesm letr, não diferem significtivmente pelo teste F (P 0,05). 21

33 Alongmento e enrizmento in vitro Após sete semns de incubção, observou-se que o processo de longmento e de enrizmento ds brotções não er sincronizdo. O surgimento de novs brotções er comum durnte est fse do cultivo, o que, provvelmente, deve estr relciondo o efeito residul do BAP. A flt de sincronizção pode ter ocorrido tmbém devido à grnde vribilidde genétic ds plântuls empregds neste trblho, um vez que ests form obtids de sementes. Um prátic comum n produção de muds in vitro é seprção e seleção de brotções de tmnho dequdo pr climtizção, recultivndo-se s demis té tingirem o tmnho requerido Aclimtizção N climtizção obteve-se mior percentgem de sobrevivênci qundo s muds form climtizds no xxim (Figur 3A). Pr o número de rízes por plnt, qundo s muds form climtizds em xxim, este tmbém foi significtivmente superior o gupé (Figur 4A). Já pr mtéri sec não houve diferenç entre os dois substrtos (Figur 5A). 2,5 A b 2,5 B Rízes por plnt 2,0 1,5 1,0 0,5 Rízes por plnt 2,0 1,5 1,0 0,5 - Xxim Agupé Figur 3: Efeito do substrto (A) e d ltur ds plântuls (B) (1= mm, 2= mm e 3= mm) n percentgem de sobrevivênci de plântuls de Acnthostchys strobilce. Médis seguids por letr diferente diferem significtivmente pelo teste F (P 0,01; A) e teste de Tukey (P 0,05; B). 22

34 100 A b 100 B Sobrevivênci (%) Sobrevivênci (%) Xxim Agupé Figur 4: Efeito do substrto (A) e d ltur ds plântuls (B) (1= mm, 2= mm e 3= mm) no número de rízes emitids por plnt, durnte climtizção de plnts de Acnthostchys strobilce. Médis seguids por letr diferente, diferem significtivmente pelo teste F (P 0,05; A) e teste de Tukey (P 0,05; B). A B Mtéri sec (mg) Mtéri sec (mg) b b - Xxim Agupé Figur 5: Efeito do substrto (A) e d ltur ds plântuls (B) (1= mm, 2= mm e 3= mm) n mtéri sec por plnt de Acnthostchys strobilce. Médis seguids pel mesm letr não diferem significtivmente pelo teste F (P 0,05; A) e teste de Tukey (P 0,05; B). Apesr de percentgem de sobrevivênci e o número de rízes emitids por plnt terem sido esttisticmente superior no xxim, o gupé demonstrou ser um bom substrto pr climtizção dest espécie, um vez que percentgem de sobrevivênci foi superior 85%. Contudo, há necessidde de se estudr melhor form de preprção deste substrto, incluindo su esterilizção e mistur com outros componentes, o que 23

35 poderi umentr performnce do gupé como substrto de climtizção de muds produzids in vitro de A. strobilce. As plântuls do grupo 3, como já er esperdo por ter ltur inicil mior, presentrm mior mtéri sec do que s dos grupos 1 e 2 (Figur 5B), entretnto, ltur inicil ds plântuls não influenciou formção de rízes (Figur 4B), nem tx de sobrevivênci (Figur 3B). Dest form, é possível climtizr plântuls de A. strobilce com ltur prtir de 10 mm e sem rízes. Estes resultdos contrstm com os estudos de Zornig (1996) e Cost (1998) nos quis firmm que, pr climtizção, s plântuls devem presentr sistem rdiculr e prte ére proporcionis fim de grntir mior tx de sobrevivênci. Entretnto, devido dificuldde de mnuseio ds plântuls com menor ltur, deve-se vlir economicmente os custos de mnutenção em lbortório e de mão-de-obr cpcitd pr climtizção Neste processo, plântuls com menor ltur exigem mior hbilidde no mnuseio Conclusões O número de plântuls formds foi mior n concentrção estimd de 26,8 μm BAP (60,7 brotções por plântul). No entnto, ltur médi ds brotções diminuiu com o umento d concentrção de BAP. N usênci de BAP, observou-se formção de rízes, sendo que n presenç de BAP formção de rízes foi inibid. Não houve diferenç significtiv pr s crcterístics vlids, entre s dus concentrções do meio MS. N climtizção, foi possível climtizr plântuls de A. strobilce com ltur prtir de 10 mm e sem rízes. O gupé demonstrou ser um bom substrto pr climtizção dest espécie, com percentgem de sobrevivênci superior 85%. 24

36 2.5. Protocolo Estbelecimento O estbelecimento in vitro de espécimes de A. strobilce pode ser feito prtir de sementes obtids de frutos mduros. As sementes devem ser desinfestds em álcool 70% (v/v) por um minuto; lvds com águ deionizd estéril e trtds em hipoclorito de sódio (2,0 2,5% de cloro tivo) + 0,01% de Tween 20 por 15 minutos. Após o trtmento, lvr por três vezes com águ deionizd estéril sempre sob gitção. A inoculção ds sementes deve ser feit em meio de cultivo gelificdo, contendo o meio MS modificdo (50% de sis mineris e 100% de compostos orgânicos) (Murshige e Skoog, 1962). O ph do meio de cultivo deve ser justdo pr 5,70 ± 0,01 e utoclvdo C e 1,5 tm por 20 minutos. O mbiente de incubção deve presentr tempertur de 27 ± 2 ºC, fotoperíodo de 16 hors e irrdiânci de 40 μmol m -2 s 1 fornecid por lâmpds fluorescentes (luz do di, 40 W) Multiplicção Qundo s plântuls tingirem tmnho mínimo de 20 mm, trnsferir pr o meio de cultivo líquido, contendo 50% dos sis mineris de MS e 26,8 μm de BAP, por um período de sete semns. O ph do meio de cultivo, utoclvgem e o mbiente de incubção devem ser como descritos n etp de estbelecimento Alongmento e enrizmento Após o período de incubção em meio de multiplicção, trnsferir s brotções, sem dividi-ls, pr o meio contendo MS modificdo, n form líquid. O ph do meio de cultivo, utoclvgem e o mbiente de incubção devem ser como descritos n etp de estbelecimento. 25

37 Aclimtizção Considerndo-se fcilidde de mnuseio, qundo s brotções tingirem mm de ltur, seprá-ls e plntá-ls em bndejs coletivs contendo gupé seco e desfido, sob condições de teldo (50% de sombr). A irrigção deve ser feit pr mnter o substrto úmido, porém nunc enchrcdo. Recomend-se plicr dubção folir intervlos semnis, com formulção de (N P K), n proporção de 2 g L Desinfestção Inoculção Germinção Multiplicção 2-3 Semns 7-8 Semns 6 Aclimtizção 5 Alongmento e Enrizmento 2-3 Meses 1-2 Meses Figur 6: Esquem ilustrtivo do protocolo pr propgção in vitro de Figur 6: Esquem ilustrtivo do protocolo pr propgção in vitro de Acnthostchys strobilce. Acnthostchys strobilcee. 26

38 Referêncis Cost, A. M. M.: Fisiologi d climtção. In: Tombolto, A. F. C.; Cost, A. M. M. (eds) Micropropgção de plnts ornmentis, p Instituto Agronômico, Cmpins Fosket, D. E.: Plnt growth nd development: moleculr pproch. Acdemic Press, Sn Diego Grttpgli, D.; Mchdo, M. A.: Micropropgção. In: Torres, A. C.; Clds, L. S.; Buso, J. A. (eds) Cultur de tecidos e trnsformção genétic de plnts, p Embrp, Brsíli Pul, C. C. de. Comunicção pessol. Deprtmento de biologi vegetl Universidde Federl de Viços. Viços, MG Kiss, E.; Kiss, J.; Gyuli, G.; Heszky, L. E.: A novel method for rpid micropropgtion of pinepple. HortScience 30: Murshige, T.; Skoog, F.: A revised medium for rpid growth nd biossys with tbcco tissue cultures. Physiologi Plntrum 15: Reitz, R.: Bromeliáces e mlári-broméli endêmic. Herbário "Brbos Rodrigues", Itjí. 808p Smith, L. B.; Downs, R. J.: Flor Neotropic. Bromelioidee (Bromelicee). The New York Botnicl Grden, Nov Iorque p Tiz, L.; Zeiger, E.: Plnt Physiology. Sinuer Assocites, Sunderlnd. 690p Tombolto, A. F. C.; Tkebyshi, S. S. G.; Cost, A. M. M.; Quirino, E. A.: Broméli (Neoregeli croline). In: Tombolto, A. F. C.; Cost, A. M. M. (eds) Micropropgção de plnts ornmentis, p Instituto Agronômico, Cmpins Zornig, R. K.: Micropropgção de bromélis. Broméli 3:

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40 PROPAGAÇÃO IN VITRO DE Aechme bmbusoides L. B. Smith & Reitz Resumo No presente trblho definiu-se um protocolo pr propgção in vitro de Aechme bmbusoides. Testou-se BAP ns concentrções de 0, 10, 20, 40 e 80 μm e dus concentrções dos sis mineris de MS (50 e 100%), n etp de multiplicção. N climtizção, s plântuls de A. bmbusoides, sem rízes, form seprds em dois grupos: 1 (plântuls de mm) e 2 (plântuls de mm). Estimou-se que concentrção de 26,11 μm foi mis eficiente pr multiplicção, promovendo em médi 18,39 brotções. A concentrção de 100% de sis de MS propiciou mior número de brotções. N usênci de BAP, ltur ds brotções foi mior no meio MS com 100% d concentrção de sis. Não houve formção de rízes nos meios que continhm BAP. É possível climtizr plântuls de A. bmbusoides com ltur prtir de 40 mm e sem rízes. O gupé pode ser utilizdo como substrto lterntivo pr o xxim, n climtizção dest espécie Introdução O gênero Aechme Ruiz & Pvon, pertencente subfmíli Bromeliodee, é o mior d fmíli Bromelicee, com 231 espécies e 55 vrieddes (Luther, 2000). Por possuírem forms esculturis, são muito utilizds em projetos pisgísticos (Melo, 1996). 29