CRESCIMENTO MICELIAL E ESPORULAÇÃO DE RAMULARIA AREOLA EM DIFERENTES MEIOS DE CULTURA INTRODUÇÃO

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Clara Costa Figueiredo
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1 Págin 368 CRESCIMENTO MICELIAL E ESPORULAÇÃO DE RAMULARIA AREOLA EM DIFERENTES MEIOS DE CULTURA Julino Cesr d Silv 1 ; Wgner Bettiol 2 ; Rfel Glbieri 3. 1 UNESP - Botuctu; 2 Embrp Meio Ambiente; 3 Instituto Mto-grossense do Algodão. RESUMO A Mnc-de-Rmulri do lgodoeiro, cusd por Rmulri reol, nos últimos nos, pssou ocorrer mis cedo e cusr desfol premtur, implicndo n necessidde de plicções de fungicids. O objetivo do presente trlo foi vlir o efeito de diferentes meios de cultur no crescimento micelil e n esporulção de Rmulri reol isoldo IMA 244. Form vlidos os seguintes meios de cultur: V8, Extrto de mlte (EM), Btt-Dextrose-Ágr (BDA), Kircoff modificdo, Dextose-Pepton-Ágr, Meio de Arroz e Meio de Arroz modificdo. Pr vlir o crescimento micelil, no centro de cd plc, contendo meio de cultur, foi colocdo um disco de micélio do fungo. Após 7, 14, 21 e 28 dis de incubção (fotoperíodo de 12 e 25 ºC) form relizds vlições do crescimento micelil. Pr vlir esporulção, um suspensão de conídios foi distribuíd n superfície dos meios de cultur. Após 7 e 14 dis form relizds vlições d esporulção, utilizndo câmr de Neubuer. Rmulri reol, isoldo IMA 244, presentou o mior crescimento micelil em meio de cultur EM e V8; e mior esporulção em meio de cultur EM, os 7 dis de cultivo. Plvrs-cve: Rmulri reol; Algodoeiro; Meio de cultur; Crescimento micelil; INTRODUÇÃO cultur do lgodoeiro ocorrem diverss doençs, destcndo-se Mnc-de-Rmulári, cusd pelo fungo Rmulri reol. No Brsil, Mnc-de-Rmulári istoricmente sempre foi considerd um doenç secundári, que ocorri no finl do ciclo e uxiliv n desfol d plnt (CIA, 1977; CIA; SALGADO, 1997). Entretnto, prtir do no de 1998, com o incremento d áre cultivd, monocultivo e utilizção de cultivres suscetíveis à doenç, Mnc-de-Rmulári pssou ocorrer mis cedo e cusr desfol premtur, implicndo n necessidde de plicções de fungicids (SUASSUNA et l., 2006; CHITARRA, 2008). A doenç tem início, gerlmente, em lvours bem desenvolvids, em locis mis sombredos e úmidos. Em situções de lt severidde s lesões colescem, ocupndo quse todo o limbo folir, tornndo-se necrosds pós o período de esporulção do ptógeno (Erlinc e Wolf, 1932), cusndo defol premtur e redução d áre fotossintétic tiv d plnt, resultndo n redução do potencil produtivo e n qulidde d fibr (ZAMBIASI; BELOT, 2007).

2 Págin 369 Devido importânci econômic d Mnc-de-Rmulri do lgodoeiro, torn-se necessário conecer o desenvolvimento de Rmulri reol em meio de cultur. Menten e Mrques (1979) verificrm que o isoldo de Rmulri tulsnei presentou ótimo crescimento micelil em bttdextrose-extrto de levedur-ágr (BDLA). A melor esporulção foi verificd em Btt-Dextrose- Ágr (BDA), qundo o fungo foi cultivdo 25 C, independente do regime de luz. O objetivo do presente trlo foi vlir o efeito de diferentes meios de cultur no crescimento micelil e n esporulção de Rmulri reol. METODOLOGIA O isoldo IMA 244 foi obtido de plnts de lgodoeiro, loclizds no Município de Montividíu, GO. Pr multiplicção, 100 µl de um suspensão de conídios (10 6 conídios ml -1 ) do fungo foi trnsferid pr o meio de cultur V8 e incubdo por sete dis, sob luz contínu e tempertur de 25 C. Após sete dis foi obtid um suspensão de conídios pr relizção dos estudos. Form vlidos os seguintes meios de cultur: V8 100 ml de V8, CCO3 2 g, ágr 20 g e águ 1000 ml. Extrto de mlte (EM) Extrto de mlte 20 g, ágr 20 g e águ 1000 ml. ml. Btt-dextrose-ágr (BDA) 18 g de BDA d Neogen Corportion, Lnsing, Micign e 1000 Kircoff modificdo (KMM) dextrose 30 g, sprgin 0,5 g, sulfto de potássio 1,0 g, sulfto de mgnésio 0,5 g, ágr 20 g e águ 1000 ml. Dextrose-pepton-ágr (DPA) dextrose 10 g, pepton 2 g, KH2PO4 0,5 g, MgSO4.7H2O 0,5 g, ágr 20 g e águ 1000 ml. Meio de Arroz (MA) Arroz triturdo 15 g, pepton 20 g, ágr 20 g, águ 1000 ml. Meio de Arroz modificdo (MAM) - Arroz triturdo 15 g, ágr 20 g, águ 1000 ml. Produção de conídios de Rmulri reol isoldo IMA 244. Em plcs de Petri de9 cm de diâmetro, contendo colônis fúngics, form diciondos 2000 µl de águ destild utoclvd e com o uxílio de um lç de Driglsi foi relizd rspgem d

3 Págin 370 superfície do meio de cultur, visndo liberção dos conídios. A suspensão de conídios foi justd pr 10 6 conídios ml -1, com o uxílio de um câmr de Neubuer. Pr vlir esporulção nos diferentes meios de cultur, em cd plc de Petri form diciondos 100 µl d suspensão de conídios, sendo logo em seguid, distruibuíd sobre superfície do meio de cultur com o uxílio de um lç de Driglsi. Ess metodologi foi propost por Nemec (1969, 1971). O fungo foi incubdo por 14 dis à tempertur de 25 C, sob condição de luz contínu. As vlições form relizds os 7 e 14 dis de cultivo. Pr determinr esporulção foi utilizdo o método de diluição serid e contgem em câmr de Neubuer. O delinmento experimentl foi o inteirmente csulizdo, sendo utilizds cinco repetições/trtmento. Crescimento micelil de Rmulri reol isoldo IMA 244 Em meio de cultur V8, contendo colônis fúngics em pleno desenvolvimento, form obtidos discos de 1 cm de diâmetro com uxílio de furdor de rol. No centro de cd plc de Petri de9 cm de diâmetro, contendo os meios de cultur, foi diciondo um disco com s estruturs do ptógeno. O fungo foi incubdo por 28 dis à tempertur de 25 C, sob condição de luz contínu. As vlições form relizds os 7, 14, 21 e 28 dis de cultivo. Pr determinr o crescimento micelil foi mensurdo o diâmetro d colôni com o uxílio de um régu. O delinmento experimentl foi inteirmente csulizdo, sendo utilizds 10 repetições/trtmento. RESULTADOS E DISCUSSÃO O mior crescimento micelil de Rmulri reol isoldo IMA 244 foi obtido em meio de cultur Extrto de Mlte (2%) e V8, seguido de BDA, qundo comprdos com os demis trtmentos (Figur 1). Segundo Crous (2009), o meio de cultur Extrto de Mlte 2% é recomenddo pr relizção de estudos morfológicos de fungos do gênero Mycosperell, pois s crcterístics d colôni e morfologi de scosporos são gerlmente consistentes in vitro. Tmbém Menten e Mrques (1979) verificrm que o isoldo de Rmulri tulsnei presentou o mior crescimento micelil em BDLA. Utilizndo trnsferênci de um suspensão de esporos, nos estudos pr vlir esporulção do fungo, o isoldo IMA 244 presentou melor esporulção no meio de cultur Extrto de mlte (2%) os sete dis de cultivo (Figur 2). Menten e Mrques (1979) verificrm que o isoldo de Rmulri tulsnei presentou melor esporulção em meio de cultur BDA, pós 16 dis de incubção qundo cultivdo à 25 C, independente do regime de luz.

4 Págin 371 CONCLUSÃO - Extrto de Mlte 2% e V8 proporcionrm o mior crescimento micelil de Rmulri reol os 28 dis de cultivo. de incubção. - Extrto de Mlte 2% proporcionou mior esporulção de Rmulri reol os sete dis REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CIA, E. Ocorrênci e conecimento ds doençs de lgodoeiro nul Gossypium irsutum L. no Brsil. Summ Pytoptologic, v. 3. p , CIA, E.; SALGADO, C. L. Doençs do lgodoeiro. In: KIMATI, H.; AMORIM, L.; BERGAMIN FILHO, A.; CAMARGO, L. E. A.; REZENDE, J. A. M. (Org.). Mnul de Fitoptologi: doençs de plnts cultivds. São Pulo: Ceres, v. 2, p CHITARRA, L. G. Identificção e controle ds principis doençs do lgodoeiro. 2. ed. Embrp Algodão: Cmpin Grnde, p. CROUS, P. W. Txonomy nd pylogeny of te genus Mycosperell nd its nmorps. Fungl Diversity, v. 38, p. 1-24, EHRLICH, J.; WOLF, F. A. Areolte mildew of cotton. Pytoptology, v. 22. p , MENTEN, J. O. M.; MARQUES. Influênci do inóculo, meio de cultur e regime de luz no desenvolvimento micelil e esporulção de Micosperell frgrie (Tul.) Lind. (Rmulri tulsnei Scc.). Fitoptologi Brsileir, v. 4, p , NEMEC, S. Determintion of lef spot rces in Soutern Illinois strwberry plntings. Plnt. Dis. Rep., v. 53, p , NEMEC, S. Studies on resistnce of strwberry vrieties nd selections to Mycosperell frgrie in Soutern Illinois. Plnt Dis. Rep., v. 5 p , SUASSUNA, N. D.; COUTINHO, W. M.; FERREIRA, A. C. B. Mnejo d mnc de Rmulri em lgodoeiro. Cmpin Grnde: Embrp Algodão, p. (Embrp Algodão.Comunicdo Técnico 272). ZAMBIASE, T. C.; BELOT, J. L. Mnul de identificção de doençs do lgodoeiro. Cscvel, PR: Coodetec, p.

5 Esporulção (conídios ml -1 ) d d c bc c c Crescimento micelil (cm) j i i ij i g fg ef def bcde cd c 8º Congresso Brsileiro de Algodão & I Cotton Expo 2011, São Pulo, SP 2011 Págin dis 14 dis 21 dis 28 dis 1,60 1,40 1,20 1,00 0,80 0,60 0,40 0,20 0,00 V8 EM 2% BDA KMM DPA MAM MA Trtmentos Figur 1. Efeito do meio de cultur no crescimento micelil (cm) de Rmulri reol isoldo IMA 244 os 7, 14 e 21 dis de incubção. Meios de cultur: V8, BDA = btt-dextrose-ágr, KMM = Kircoff modificdo DPA = Dextrose-pepton-ágr, MAM = Meio de Arroz modificdo e MA = Meio de Arroz. 1,E+09 7 dis 14 dis 1,E+08 1,E+07 1,E+06 1,E+05 1,E+04 V8 EM 2% BDA KMM DPA MAM MA Trtmentos Figur 2. Efeito do meio de cultur n esporulção (conídios ml -1 ) de Rmulri reol isoldo IMA 244 os 7 e 14 dis de incubção. Meios de cultur: V8, BDA = btt-dextrose-ágr, KMM = Kircoff modificdo, DPA = Dextrose-pepton-ágr, MAM = Meio de Arroz modificdo e MA = Meio de Arroz.

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