UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE UNIDADE ACADÊMICA ESPECIALIZADA EM CIÊNCIAS AGRÁRIAS PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FLORESTAIS

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1 UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE UNIDADE ACADÊMICA ESPECIALIZADA EM CIÊNCIAS AGRÁRIAS PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS FLORESTAIS EFEITO DOS ESTRESSES DE SECA E CALOR SOBRE PLÂNTULAS DE PINHÃO- MANSO (Jtroph curcs L.) MESTRANDO: JOSÉ DENILSON DE PAULA ARAÚJO ORIENTADOR: PROFª. DRª. CRISTIANE ELIZABETH COSTA DE MACÊDO MACAÍBA/RN DEZEMBRO/2014

2 JOSÉ DENILSON DE PAULA ARAÚJO EFEITO DOS ESTRESSES DE SECA E CALOR SOBRE PLÂNTULAS DE PINHÃO- MANSO (Jtroph curcs L.) Dissertção de Mestrdo presentd o Progrm de Pós-Grdução em Ciêncis Florestis d Universidde Federl do Rio Grnde do Norte, como prte dos requisitos pr otenção do título de Mestre em Ciêncis Florestis. ORIENTADOR: PROFª. DRª. CRISTIANE ELIZABETH COSTA DE MACÊDO MACAÍBA/RN DEZEMBRO/2014

3 Divisão de Serviços Técnicos Ctlogção d Pulicção n Fonte. Unidde Acdêmic Especilizd em Ciêncis Agráris Cmpus Mcí Biliotec Setoril Professor Rodolfo Helinski Arújo, José Denilson de Pul. Efeito dos estresses de sec e clor sore Plântuls de pinhão mnso (jtroph curcs L.) / José Denilson de Pul Arújo. - Mcí, RN, f. Orientdor (): Prof. Dr. Cristine Elizeth Cost de Mcêdo. Dissertção (Mestrdo em Ciêncis Florestis). Universidde Federl do Rio Grnde do Norte. Unidde Acdêmic Especilizd em Ciêncis Agráris Cmpus Mcí. Progrm de Pós- Grdução em Ciêncis Florestis. 1. Sec Fisiológic - Dissertção. 2. Solutos Orgânicos - Dissertção. 3. Txs de Crescimento - Dissertção. I. Mcêdo, Cristine Elizeth Cost de. II. Universidde Federl do Rio Grnde do Norte. III. Unidde Acdêmic Especilizd em Ciêncis Agráris Cmpus Mcí. IV. Título. RN/UFRN/BSPRH CDU:

4 OFEREÇO Aos fmilires e migos, incondicionlmente.. DEDICO À Rimundo (in memorin).

5 AGRADECIMENTOS Agrdeço primeirmente o corpo docente deste Progrm de Pós-grdução em Ciêncis Florestis, por todo conhecimento comprtilhdo durnte o mestrdo e à Coordenção de Aperfeiçomento de Pessol de Nível Superior pel ols concedid. Em especil os professores Edurdo Voigt e Muro Pcheco, por me ensinr novs perspectivs de conhecimento. Tmém os professores Márcio Dis e Sidney Prxedes por tod tenção e suporte. Por tods s grndes colorções e uxílios, grdeço o professor Josemir Mi e o coleg Yuri Melo, pois estes contriuírm muito nos nortementos deste trlho. Por tod confinç depositd, grdeço à minh orientdor, professor Cristine Mcêdo. Agrdeço à Universidde de Hvn por tod prceri e concessão de sementes e os professores, Ros Rodés e Loiret Grcí, por tods s lições pssds enqunto estiverm no Brsil. Tmém os meus migos, que me derm todo poio ns hors de necessidde e tod compreensão qundo tive que me fzer usente. Agrdeço equipe do Lortório de Estudos em Biotecnologi Vegetl, prceiros de rotin diári, An Pul, Hudson Rfel, Dnilo Fldemir, Hnieri Alves, Pul Ortiz, José Demetrios, Cielley Dnts, Lisine Bezerr, Monique Cristin e Ciro Oliveir. Finlmente os migos de curso, Adn Lís, Bruno Rfel, Bruno Noronh e Virgini Cláudi. Sincermente, muito origdo.

6 SUMÁRIO LISTA DE FIGURAS... VII LISTA DE ABREVIATURAS... VIII 1. RESUMO ABSTRACT INTRODUÇÃO HIPÓTESE OBJETIVOS Ojetivo Gerl Ojetivos Específicos MATERIAL E MÉTODOS Condições de Germinção e Otenção ds Plântuls Aclimtção e Colet do Mteril Vegetl Indicdores de Estresse e Determinções Bioquímics Indicdores de Estresse Hídrico Determinções Bioquímics Proteíns Solúveis Totis (PST) Aminoácidos Livres Totis (AALT) Prolin Glicin Betín Açúcres Solúveis Totis (AST) e Amido Análises Esttístics RESULTADOS E DISCUSSÃO CONCLUSÕES REFERÊNCIAS ANEXOS... 36

7 VII LISTA DE FIGURAS Figur 1 - Tx de crescimento soluto (TCA). Mss fresc totl em g.di-1. Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey Figur 2 - Vlores ds txs de crescimento soluto do cule (TCAC) e ríz (TCAR) ds plnts de J. curcs, sumetids os estresses hídrico e térmico. Crescimento cm/di. Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Ddos não suportdos n esttístic. Exiidos como oservção complementr Figur 3 - Conteúdo reltivo de águ (CRA) de folhs e rízes, expresso em porcentgem. Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey Figur 4 - Dno de memrn (DM) de folhs e rízes, expresso em porcentgem. Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey Figur 5 - Concentrções de proteíns solúveis totis (PST) ns mostrs de folhs ( ) e rízes ( ). Mss sec (MS). Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey Figur 6 - Concentrções de minoácidos livres totis (AALT) ns mostrs de folhs ( ) e rízes ( ). Mss sec (MS). Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey Figur 7 - Concentrções de prolin (PRO) ns mostrs de folhs ( ) e rízes ( ). Mss sec (MS). Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey Figur 8 - Concentrções de glicin etín (GB) ns mostrs de folhs ( ) e rízes ( ). Mss sec (MS). Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey Figur 9 - Concentrções de çúcres solúveis totis (AST) ns mostrs de folhs ( ) e rízes ( ). Mss sec (MS). Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey Figur 10 - Concentrções de e mido ns mostrs de folhs ( ) e rízes ( ). Mss sec (MS). Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey

8 VIII LISTA DE ABREVIATURAS AALT Aminoácidos Livres Totis AST Açúcres Solúveis Totis BOD Biochemicl Oxygen Demnd Demnd Bioquímic de Oxigênio CRA Conteúdo Reltivo de Águ DM Dno de Memrn GB Glicin etín HSP Het Shock Proteins Proteíns de Proteção de Clor MF Mss Fresc MS Mss Sec MT Mss Túrgid PEG Polietilenoglicol PEG6000 PRO Prolin PST Proteíns Solúveis Totis TCA Tx de Crescimento Asoluto TCAC Tx de Crescimento Asoluto do Cule TCAR Tx de Crescimento Asoluto d Riz

9 1. RESUMO Biocomustíveis são um foco de discussão, o que se trt de energis renováveis. Qunto esse ponto, tulmente discutisse utilizção de zons árids pr produção de iocomustíveis derivdos de espécies oleginoss resistentes às condições de ridez. Jtroph curcs L. tem sido indicd como um espécie potencil pr esse tipo de utilizção, pontd pel litertur como resistente em condições desfvoráveis: sec e slinidde. Todvi, pouco é descrito sore su resistênci lts temperturs e secs severs, principlmente sore sinergi de estresses comindos, cenário típico de regiões semiárids. Este trlho vis portnto vlir os efeitos d tempertur sore J. curcs em condições de sec. O estresse hídrico foi plicdo utilizndo dus concentrções de PEG6000 diluíds em solução hidropônic, induzindo potencil hídrico de -0,3 e -0,7 MP. Já o estresse térmico foi conduzido em câmr B.O.D. à 40ºC. Após plicção dos estresses, o mteril vegetl foi coletdo pr vlição dos indicdores de estresse como conteúdo reltivo de águ (CRA), dno de memrn (DM) e tx de crescimento soluto (TCA), lém ds determinções ioquímics de proteíns, minoácidos totis (AALT), prolin (PRO), glicin etín (GB), çúcres solúveis totis (AST) e mido. Os resultdos mostrrm que o CRA pouco se lter, em condições de estresse e DM foi menor so estresse térmico, provvelmente por contriuição sinérgic de solutos como proteíns e GB. Os solutos AALT, PRO e mido tiverm concentrções mis significtivs em folhs, enqunto que proteíns, GB e AST form mis significtivs ns rízes. AALT e PRO form os solutos com resposts mis significtivs em folhs, principlmente em sec sever so estresse térmico. GB teve umento ns concentrções tnto em folhs qunto em rízes, qundo em condições de estresse hídrico e térmico. Concentrções de mido mostrrm um redução, o que pode ser reflexo n redução d TCA ds plântuls. Os resultdos oservdos sugerem que J. curcs é cpz de suportr os efeitos do estresse hídrico, considerndo pouc lterção do CRA so s condições experimentds. No gerl s plântuls form mis sensíveis o estresse de clor. Todvi, qundo comindos os estresses, os resultdos presentrm um tendênci de umento em relção o estresse de clor isoldo. Plvrs-chve: Sec fisiológic; solutos orgânicos; tx de crescimento. 9

10 2. ABSTRACT Biofuels re focus of discussion when it comes to renewle energy. On this point, ctully discuss the use of rid zones for production of iofuels derived from oil plnt species resistnt to rid conditions. Jtroph curcs L. hs een indicted s potentil species for this ppliction, ecuse it resistnce to unfvorle conditions s: drought nd slinity. However, few studies hve een descried out its resistnce to high tempertures nd severe droughts, especilly on the synergy of comined stresses, typicl of semirid lnds. This study ims to evlute the temperture effects of J. curcs on dry conditions. Wter stress ws cused using two concentrtions of PEG6000 diluted in hydroponic solution, inducing wter potentils of -0.3 nd -0.7 MP, while the het stress ws conducted in growth chmer t 40ºC. After pplying the stress, the plnt mteril ws collected for evlution of stress indictors such s reltive wter content (RWC), memrne dmge (MD) nd solute growth rte (AGR), nd the iochemicl determintions of proteins, totl mino cids (TFAA), proline (PRO), glycine etine (GB), totl solule sugrs (TSA) nd strch. The results showed tht the RWC few chnges in stress conditions nd MD ws lower under het stress, proly due to the contriution of solutes such s protein nd GB. Solutes TFAA, PRO nd strch hd more significnt concentrtions in leves, while proteins, GB nd TSA were more significnt in the roots. TFAA nd PRO were solutes with more significnt responses on leves, minly in severe drought under het stress. GB hd n increse in the concentrtions oth in leves nd in roots, when under to drought nd het stress. Strch concentrtions ws reduced, which my e reflex the reduction of AGR of the seedlings. The dt suggest tht J. curcs is le to withstnd the effects of drought stress, considering fewer chnges of the CRA under the studied conditions. Overll the seedlings were more sensitive to het stress. However, when comined the oth drought nd het stresses, the results showed n incresing trend in reltion to just het stress. Keywords: Physiologicl drought; orgnic solutes; growth rte. 10

11 3. INTRODUÇÃO Atulmente, os iocomustíveis têm sido um grnde foco de discussão qundo o ssunto é energi renovável, principlmente qundo o tem envolve plvrs-chve como: quecimento glol, comustíveis fósseis, produção sustentável e energis lterntivs. Todvi, esss discussões sempre possuem divergêncis qundo é levd em considerção, entre outrs questões mientis, conversão de áres grícols produtors de limentos pr cultivos de plnts potenciis à produção do iodiesel (ACHTEN et l., 2012). O uso e ocupção do solo se tornm um dilem n gricultur, soretudo qundo é necessário definir prioriddes em respeito o que se deve (ou não) ser produzido. Porém, um potencil solução tem chegdo à esse dete: produção em regiões árids. Ests regiões são gerlmente vists como estéreis e improdutivs e estim-se que hoje, pelo menos 40% de tod porção continentl do plnet são regiões clssificds como árids, semiárids e hiperárids. Isso é mis do que todo mosico de culturs e terrs cultivds ou em mnejo, que corresponde 26% d superfície continentl (ACHTEN et l., 2012). Ddos como estes, enftizm o potencil ds terrs árids n relizção de plntios, desvindo tenção dos detes pr um nov usc: culturs de plnts tolerntes s condições mientis árids e semiárids; principlmente slinidde, sec e tempertur elevd. As condições mientis de sec e clor são os tipos mis comuns de estresses mientis, presentes ns regiões dos trópicos (LARCHER, 2000). Amos podem prejudicr cpcidde d plnt em relizr fotossíntese, e consequentemente, o desenvolvimento do vegetl (TAIZ e ZEIGER, 2013). O déficit hídrico pode provocr perd de turgor d célul vegetl e cusr su desidrtção, o que pode provocr dversiddes fisiológics, entre els: iniição d expnsão celulr, iniição fotossintétic, desestilizção de memrns e proteíns, e produção de espécies retivs o oxigênio (TAIZ e ZEIGER, 2013). Já o clor é mis dnoso, pois lém de potencilizr os dnos cusdos pelo déficit hídrico, provocm um dno o citoesqueleto e espécies de RNA, reduz eficiênci enzimátic e deslncemento metólico (MITTLER et l., 2012; TAIZ e ZEIGER, 2013). 11

12 Qunto espécies potenciis pr produção em condições de semiárido, Jtroph curcs L. tem lcnçdo destque ns pesquiss o redor do mundo (GTZ, 2009), principlmente no Oriente Médio, Chin e Áfric (BAUR et l., 2007). J. curcs é um espécie ntiv do México e região d Améric Centrl. Sus sementes são ltmente viáveis produção do iodiesel com um proporção médi de 250g de óleo/ kg de semente (ACHTEN et l., 2012). J. curcs possui um om desenvolvimento em regiões tropicis secs, equtoriis úmids, locis semiáridos e um considerável resistênci longos períodos de estigem (BARBOZA Jr., 2011), podendo ser considerd um plnt tolernte o estresse hídrico (DÍAZ-LÓPES et l., 2012). Além disso, su utilizção em áres degrds, não compete com cultivres de produção limentíci (AL- BUSAIDI et l., 2012). Contudo, J. curcs mostrou melhores desempenhos de cultivo em condições úmids (BARBOZA Jr., 2011) e é considerd por muitos como um potencil espécie pr segund gerção de plnts viáveis produção do iocomustível, principlmente, devido s sus crcterístics de resistênci s condições mientis semiárids (NAHAR e OZORES-HAMPTON, 2011), emor tenh presentdo resultdos ditos instisftórios em cultivos no semiárido indino (RAO et l., 2012). Pr todo o sucesso dpttivo de um vegetl às condições de estresse, há um complex e importnte respost fisiológic. N condição de estresse hídrico, há o justmento osmótico, que de cordo com Tiz e Zeiger (2013), é um respost celulr que permite plnt mnter sus funções fisiológics so condições de déficit hídrico. Durnte esse justmento, plnt ument considervelmente concentrção de solutos orgânicos (çúcres, ácidos orgânicos e minoácidos) e íons inorgânicos (principlmente K + ). Entre os solutos orgânicos, destcm-se prolin e glicin etín (ASHRAF e FOODLAD, 2007), que têm sido pontdos como significtivos n respost d J. curcs contr estresses ióticos, em estudos relizdos (slinidde, sec e tempertur) por Silv et l. (2009, 2010, 2010, 2012). Além do justmento osmótico, outrs resposts tmém estão envolvids no umento d tolerânci d plnt, como climtção e mudnç d expressão gênic durnte o estresse osmótico e produção de HSP ( het shock proteins ou proteíns de proteção o clor) em csos de estresse de clor (LARCHER, 2000; TAIZ e ZEIGER, 2013). 12

13 Em virtude dos ftos expostos e do pouco conhecimento que se tem sore J. curcs, este trlho usc oservr sus resposts fisiológics os estresses ióticos déficit hídrico e clor, com o intuito de compreender os mecnismos que viilizm cpcidde dess espécie em suportr ou não tis condições. 4. HIPÓTESE H1 Os estresses de sec e clor, tundo de form isold e/ou comind, interferem (ou não) nos indicdores fisiológicos de justmento osmótico, vlidos em J. curcs L. 5. OBJETIVOS 5.1 Ojetivo Gerl Compreender e identificr mecnismos que tum no justmentos osmótico de J. curcs L. em condições de sec e clor, isoldos e comindos. 5.2 Ojetivos Específicos Avlir o crescimento d plnt com se n perd de águ durnte o tempo de estresse. Mensurr quntidde de osmólitos relciondos o justmento osmótico (proteíns totis, minoácidos totis, prolin, glicin etín, çúcres totis e mido), presentes ns plântuls sumetids os estresses isoldos e comindos. 13

14 6. MATERIAL E MÉTODOS Este trlho foi relizdo no Lortório Estudos em Biotecnologi Vegetl, loclizdo no Deprtmento de Biologi Celulr e Genétic, no Centro de Biociêncis d Universidde Federl do Rio Grnde do Norte. O experimento foi conduzido em qutro etps: (i) seleção ds sementes e germinção. (ii) Trnsferênci ds plântuls pr vsos de hidroponi; climtção ds plântuls; plicção dos trtmentos ns plântuls climtds (sec e sec 40ºC); oservção dos efeitos do estresse. (iii) Colet do mteril vegetl pr nálises em lortório. (iv) Análises ioquímics ds mostrs e interpretção dos resultdos. 6.1 Condições de Germinção e Otenção ds Plântuls As sementes de J. curcs form desinfetds com hipoclorito de sódio 2% por 3 minutos e depois escrificds mnulmente. N escrificção s sementes form pressionds com o dedo polegr contr superfície d ncd, querndo os tegumentos, que form retirdos. Os emriões form seleciondos pr germinção e semedos em folhs de ppel tolh (tipo Germitest ), umedecids com águ destild em proporção de 1,5 vezes mss sec do ppel. Os emriões form distriuídos linermente sore dus folhs de ppel tolh e em seguid coertos por um terceir folh. Após isso, ests form enrolds no sentido de distriuição do semeio, formndo um rolo com dez emriões. Após semedos, os rolos form envelopdos em scos plásticos desinfestdos com álcool etílico 70% (v/v) e incudos em câmr de crescimento so condições controlds (25ºC) por três dis no escuro e qutro dis em fotoperíodo de 12 hors. Com sete dis completos, os emriões germindos form trnsplntdos pr vsos de hidroponi (um por vso), com cpcidde pr 870 ml, preenchidos com solução estoque de Hoglnd e Arnon (1950) mei-forç e trnsportdos pr cs de vegetção. 14

15 6.2 Aclimtção e Colet do Mteril Vegetl Após um período de climtção de 30 dis, form plicdos os trtmentos de estresse, identificdos como controle (C), sec moderd (P1), sec sever (P2), controle 40ºC (CT), sec moderd 40ºC (P1T) e sec sever 40ºC (P2T). Durnte o período de execução do experimento, s condições d cs de vegetção form registrds, com tempertur médi de 32ºC durnte o di, 26ºC durnte noite e Umidde reltiv do r em torno de 50%. O estresse hídrico foi plicdo utilizndo diferentes concentrções do polímero polietilenoglicol (PEG6000), induzindo potenciis hídricos de -0,3 e -0,7 MP (moderdo e severo respectivmente), mos clculdos de cordo com o proposto por Villel et l. (1991). Qunto o estresse de clor, este foi conduzido em câmr incudor tipo B.O.D. (demnd ioquímic de oxigênio) com fotoperíodo de 12 hors, sendo dirimente 12 hors 40 C e s demis em tempertur médi de 26 C, simulndo respectivmente di e noite. O tempo totl dos estresses, desde plicção té o momento d colet, foi de 96 hors. Depois de finlizdo o estresse, foi relizd colet ds mostrs vegetis (folhs e rízes) pr vlição dos indicdores de estresse e determinções ioquímics. 15

16 6.3 Indicdores de Estresse e Determinções Bioquímics Indicdores de Estresse Hídrico Form medids mss totl ds plântuls, comprimento d prte ére e comprimento ds rízes pr vlir tx de crescimento soluto, segundo Brieri Jr. et l., (2007) e Silv et l., (2000), ds plântuls sumetids o estresse, clculdos pels equções: TCA = [M 2 M 1] / [T 2 T 1] TCA (Cule e Riz) = [C 2 C 1] / [T 2 T 1]. Tmém form coletds mostrs de folhs e rízes pr estimr conteúdo reltivo de águ (CRA) e dno de memrn (DM), clculdos segundo s referêncis de Slvick (1979) e Lutts et l., (1996). Pr os cálculos, usrm-se s equções: CRA (%) = [MF MS] / [MT MS] * 100 DM (%) = [L1/L2] * 100. O cálculo do CRA foi relizdo trvés d mss vegetl, coletd e pesd pr determinção d mss fresc (MF). Em seguid s mesms, form trnsferids pr 100 ml de águ destild por seis hors 25ºC. Após isso, mss foi coletd, sec com tolh de ppel e pesds pr otenção d mss túrgid (MT). Finlmente, pr otenção d mss sec (MS), s mostrs vegetis form trnsferids pr estuf 75ºC por 72 hors e pós isso, pesds mis um vez. Pr o cálculo do DM, s L1 e L2 correspondem respectivmente primeir e segund leitur de condutividde elétric, relizds prtir de mostrs de folhs e rízes coletds e imerss em frscos contendo 100 ml de águ destild. Sendo L1 relizd 16 hors pós colet do mteril e L2 feit pós s mostrs serem sumetids o nho-mri por um hor 100ºC. Ams s leiturs são relizds qundo s mostrs estão em tempertur miente de 25 ºC. 16

17 6.3.2 Determinções Bioquímics A mss vegetl restnte foi rmzend em freezer à -80ºC e posteriormente utilizd pr relizção ds determinções ioquímics: proteíns (BRADFORD, 1976), minoácidos livres totis (PEOPLES et l., 1989), prolin (BATES et l., 1973), glicin etín (GRIEVE e GRATTAN, 1983), Açúcres e Amido (DUBOIS et l., 1956). Relizds utilizndo extrtos de mss fresc pr proteíns e mss sec pr minoácidos, prolin, glicin etín, çúcres totis e mido Proteíns Solúveis Totis (PST) A determinção do conteúdo de proteíns totis foi relizd pelo método de Brdford (1976), que sei-se n mudnç d colorção do qundo lig-se proteín. O extrto protéico diluído foi trnsferido pr tuos de ensio, em seguid foi diciondo 2 ml do regente de Brdford (Coomssie rilint lue G-250). Após leve gitção, os tuos form incudos 25 C por 15 minutos e então foi relizd leitur d reção 595 nm em espectrofotômetro. A concentrção de proteíns solúveis totis foi otid pel comprção ds leiturs otids ns mostrs, com s otids em curv pdrão onde proteín utilizd foi Alumin sérvic ovin. A concentrção de proteíns solúveis foi express em mmol de PST. kg -1 mss sec Aminoácidos Livres Totis (AALT) A concentrção de AALT foi determind segundo o método descrito por Peoples et l., (1989) com lgums modificções. Os extrtos form colocdos em tuos de ensio crescids de águ destild. Em seguid form diciondos solução de tmpão citrto, com ph = 5,0, 200 mm e 250 μl de regente de ninhidrin. Os tuos form hermeticmente fechdos, gitdos em vortex e colocdos em nho-mri 100ºC por 15 minutos. A reção d solução foi interrompid imeditmente com nho de gelo. Por fim, form diciondos à solução de etnol 50% (v/v). Após um nov gitção em vortex, os tuos permnecerm por 20 minutos em tempertur miente pr relizção d leitur em espectrofotômetro 570 nm de sorânci. 17

18 As concentrções de minoácidos totis form determinds com se em curv pdrão e justd prtir de concentrções crescentes de um mistur pdronizd de L-Glutmin. Os resultdos form expressos em mmol AALT. kg -1 de mss sec Prolin A concentrção de prolin foi determind segundo metodologi descrit por Btes (1973) com modificções. Os extrtos ds mostrs form distriuídos em tudos de ensio e form diciondos 1 ml do regente de ninhidrin ácid. Os tuos form hermeticmente fechdos, gitdos em vortex e trnsferidos pr nho-mri 100 C por um hor. Após isso reção foi interrompid imeditmente com nho de gelo. Em seguid, form diciondos à solução 2 ml de tolueno e gitdos vigorosmente por 20 segundos. Após estilizção, dus fses form estelecids n solução, sendo fse quos superior formd pelo tolueno e o cromóforo de colorção vermelhd. Est foi retird e sumetid à leitur em espectrofotômetro 520 nm. As concentrções de prolin form determinds com se em um curv pdrão otid prtir de L-prolin, com seus resultdos expressos em mmol prolin. kg -1 de mss sec Glicin Betín A concentrção de glicin etín foi determind segundo método descrito por Grieve e Grttn (1983) com lgums modificções. Os extrtos ds mostrs form distriuídos em eppendorfs e form diciondos 250 μl de ácido sulfúrico 2N. Os eppendorfs form deixdos em nho de gelo (0 4 ºC) por um hor. Em seguid form diciondos 200 μl de KI-I2 geldo, e deixdos em repouso por 16 hors 0ºC. Após esse períoido, os eppendorfs são centrifugdos rpm por 15 minutos 4ºC e o sorendnte é descrtdo. Nest é feit dus lvgens do precipitdo utilizndo 2 ml d ácido sulfúrico, centrifugdos por 10 minutos ( rpm 4ºC). Após s lvgens o precipitdo foi dissolvido em 1,2-dicloroetno gitndo vigorosmente. Após dus hors de descnso, foi relizd leitur ds mostrs em espectrofotômetro 365 nm. 18

19 As concentrções de glicin etín form determinds com se em um curv pdrão otid prtir de glicin etín, com seus resultdos expressos em mmol prolin. kg -1 de mss sec Açúcres Solúveis Totis (AST) e Amido A concentrção de AST e Amido form determind pelo método de fenolsulfúrico descrito por Duois et l., (1956). As mostr form trnsferids pr tuos de ensio convencionis, completds com águ destild, crescido de fenol 5% (m/v) e gitdos vigorosmente. Pr inicir reção, foi diciondo de um únic vez e no centro do tuo ácido sulfúrico concentrdo. A homogeneizção, em gitdor vortex, foi relizd logo pós dição do ácido pr usr o clor d reção exotérmic d hidrólise ácid pr um melhor homogeneizção. Em seguid os tuos permnecerm por 20 min em tempertur miente pr leitur em espectrofotômetro 490 nm. As concentrções de AST form determinds com se n curv pdrão justd prtir de concentrções crescentes de um solução estoque de D-glicose, com seus resultdos expressos em mmol. kg -1 de mss sec. 19

20 6.4 Análises Esttístics Pr os testes esttísticos, foi utilizdo o softwre Assistt selecionndo o método ANOVA seguindo teste de Tukey com nível significânci de p < 0,05. O delinemento experimentl foi inteirmente csulizdo, com dois trtmentos testemunh (um ssocido à tempertur de 40ºC) e qutro trtmentos de sec (dois ssocidos à tempertur de 40ºC), lém de dus prtes d plnt nlisds (folhs e rízes). Cd um dos seis trtmentos continh qutro repetições totlizndo 48 mostrs. 20

21 TCA (g. di -1 ) 7. RESULTADOS E DISCUSSÃO As plântuls trtds com polietilenoglicol presentrm um crescimento menor do que os controles. Tl efeito foi mis centudo ns plântuls sumetids sec sever so estresse de clor. Tnto tx de crescimento soluto d mss fresc totl (TCA) ds plântuls (Figur 1) qunto do comprimento do cule (TCAC), tiverm txs de crescimento negtivs nos trtmentos induzidos com sec, qundo comprds os trtmentos controle e controle so estresse de clor (Figur 2). A tx de crescimento ds rízes (TCAR) teve um crescimento em todos os trtmentos (exceto em sec sever), com s txs mis elevds nos trtmentos com sec moderd e sec sever so estresse de clor. A redução n TCA de mss fresc totl ds plântuls, deu-se provvelmente devido sec induzid pelo polímero, já que este lter o potencil osmótico d solução, dificultndo entrd de águ n plnt e consequentemente reduzindo o conteúdo de águ ns céluls (MICHAEL e KAUFMANN, 1973; TAIZ e ZEIGER, 2013), efeito que se reflete n redução d TCAC nos trtmentos so estresse. Semelhnte o oservdo por Mes et l., (2009), em J. curcs so diferentes intensiddes de estresse hídrico, o resultdo tmém foi redução d mss fresc totl ds plântuls em tods s condições de sec. 0,400 0,200 0,000-0,200 C P1 P2 CT P1T P2T -0,400-0,600-0,800 c Figur 1: Tx de crescimento soluto (TCA). Mss fresc totl em g.di -1. Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey. 21

22 TCAC (cm / di ) TCAR (cm / di ) 0,100 0,250 0,050 0,000-0,050-0,100 C P1 P2 CT P1T P2T 0,200 0,150 0,100-0,150 0,050-0,200-0,250 0,000 C P1 P2 CT P1T P2T Figur 2: Vlores ds txs de crescimento soluto do cule (TCAC) e ríz (TCAR) ds plântuls de J. curcs, sumetids os estresses hídrico e de clor. Crescimento cm/di. Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Ddos não suportdos n esttístic. Exiidos como oservção complementr. Qunto intensificção dess redução d TCA ns plântuls so estresse de clor, provvelmente foi provocd pel perd de águ trvés d prte ére d plnt, já que plnt tende perder mis águ por evpotrnspirção n medid em que tempertur ument (LARCHER, 2000). Além disso, tecidos vegetis em crescimento são prejudicdos pelo clor, pois são mis sensíveis temperturs elevds. Qundo em hidrtdos estes tecidos podem utilizr o esfrimento evportivo pr mnter um tempertur suportável, porém qundo em déficit hídrico esse mecnismo não seri eficiente (TAIZ e ZEIGER, 2013). Em um estudo relizdo por Silv et l., (2012), tmém foi oservdo um perd de iomss em J. curcs so o estresse de clor, semelhnte o visto neste trlho. Al-Busidi et l., (2012), estudou os efeitos d sec e clor sore J. curcs, e oservou que tempertur é o principl iniidor do crescimento de plnt. Principlmente de plnts jovens. O estresse hídrico induziu um redução no conteúdo reltivo de águ ns folhs em sec sever so estresse de clor (60% em relção o controle). Ns rízes redução foi significtiv pens no controle so estresse de clor (Figur 3), porém, pouc vrição entre os trtmentos sugere que ess diferenç em rízes não é iologicmente representtiv. 22

23 CRA Folhs ( % ) CRA Rízes ( % ) C P1 P2 CT P1T P2T Figur 3: Conteúdo reltivo de águ (CRA) de folhs e rízes, expresso em porcentgem. Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey. 0 C P1 P2 CT P1T P2T Qundo so déficit hídrico, s céluls do tecido folir sofrem um redução n cpcidde de expnsão e consequentemente redução d cpcidde de turgescênci e esses efeitos podem ser potencilizdos pelo clor (TAIZ e ZEIGER, 2013). O indictivo disso seri o menor CRA ns folhs so condição de estresse de sec e clor. No cso ds rízes, há possiilidde que s rízes não sofrm o efeito de mos os estresses, já que ests encontrm-se imerss em solução quos com tempertur diferente d sentid pels folhs. Qunto o vzmento de eletrólitos, indicdor indireto relciondo os dnos ns memrns celulres, este foi mior em folhs so estresse de clor e rízes so estresse hídrico (Figur 4). Ns folhs, os trtmentos sem plicção do estresse de clor tiverm os menores dnos de memrn (proximdmente 11%), enqunto que o mior dno foi oservdo no trtmento controle so estresse de clor (60,78%). Já nos trtmentos sec moderd e sever so estresse de clor, o dno de memrn foi de 46,58% e 34,15%, respectivmente. Esse é um possível indictivo que os tecidos folires são mis susceptíveis s injúris provocds pelo clor, principlmente qundo estes tecidos são os mis expostos os seus efeitos. 23

24 DM Folhs ( % ) DM Rízes ( % ) e e d c c c c 0 C P1 P2 CT P1T P2T Figur 4: Dno de memrn (DM) de folhs e rízes, expresso em porcentgem. Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey. 0 C P1 P2 CT P1T P2T Ns rízes, o dno foi mior nos trtmentos controle, sec moderd e sever (em torno de 40%) e menor nos trtmentos sumetidos o estresse de clor (em torno de 25%). De um ponto de vist fisiológico, um possível justifictiv pr os menores dnos de memrns ns rízes, em trtmentos so o estresse de clor, é que o ditivo térmico pode estimulr produção de proteíns protetors e ests podem, de lgum, form contriuir contr o dno provocdo pel sec, tundo em conjunto com outros solutos (SILVA et l., 2009; 2010). Neste experimento, os miores índices de proteíns, glicin etín e çúcres são oservdos em rízes (Figurs 5, 8 e 9). Esse pode ser possivelmente o motivo pelo qul os trtmentos so sec terim um dno mior do que os trtmentos so estresse de clor. A concentrção de proteíns, em folhs, reduziu em torno de 52% nos trtmentos so estresse de clor, qundo comprdo o trtmento controle (Figur 5). Já em rízes, qundo comprdos o controle, houve um umento n concentrção de proteíns n sec moderd (49% mis) e um redução de 52% no trtmento controle so estresse de clor. Nos demis trtmentos não houve diferenç significtiv. 24

25 mmol PST. kg -1 MS mmol PST. kg -1 MS 6,00 4,50 3,00 1,50 12,00 9,00 6,00 3,00 c 0,00 C P1 P2 CT P1T P2T 0,00 C P1 P2 CT P1T P2T Figur 5: Concentrções de proteíns solúveis totis (PST) ns mostrs de folhs ( ) e rízes ( ). Mss sec (MS). Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey. As concentrções de minoácidos totis, em folh, presentrm um umento nos trtmentos de sec sever e sec sever so estresse de clor, respectivmente 158% e 253% mis que o controle. Já ns rízes, houve um umento em sec sever so estresse de clor, proximdmente 57% mis que o trtmento controle (Figur 6). A tendênci oservd é que concentrção de proteíns em folh tende reduzir com severidde do estresse, principlmente so clor. Qundo oservd concentrção de minoácidos, tendênci é o umento desses solutos so s condições de sec e sec com ditivo térmico. Ess relção entre redução de proteíns e umento de minoácidos, foi oservd em J. curcs so condições de estresse slino (SILVA et l., 2009), sugerindo que minoácidos terim um ppel importnte pr o justmento osmótico em folhs de J. curcs sumetids ou não o estresse. Possivelmente, este mesmo efeito ocorre qundo plnt está so estresse de clor, lém de que quntidde de proteíns pode ser reduzid drsticmente so lt tempertur (SILVA et l., 2010), principlmente por desnturção proteic. 25

26 mmol PRO. kg -1 MS mmol PRO. kg -1 MS mmol AA. kg -1 MS mmol AA. kg -1 MS 40,00 20,00 30,00 20,00 10,00 c c c c 15,00 10,00 5,00 c c c 0,00 C P1 P2 CT P1T P2T 0,00 C P1 P2 CT P1T P2T Figur 6: Concentrções de minoácidos livres totis (AALT) ns mostrs de folhs( ) e rízes( ). Mss sec (MS). Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey. Qunto o oservdo ns rízes, neste trlho, concentrção de minoácidos é metde d oservd ns folh. Ess concentrção mis ix em relção s folhs e pouc vrição entre os demis trtmentos, sugere que os minoácidos não sejm tão tuntes ns tecidos rdiculres ou este sej mis um indictivo que s rízes não sentirm tnto s condições de estresse testds, qunto s folhs. Sore prolin, form oservds miores quntiddes em folhs do que em rízes (Figur 7). Em folhs, os estresses hídrico e de clor, provocrm o umento ds concentrções do soluto em sec moderd e sec sever so estresse de clor, com um umento em torno de 110% mis que o controle. Ns rízes, foi oservd mesm tendênci de umento, sendo os trtmentos sec moderd e sever so estresse de clor com 47% e 73% mis que o controle. 0,020 0,010 0,015 0,010 0,005 c c c 0,008 0,005 0,002 c c c c 0,000 C P1 P2 CT P1T P2T 0,000 C P1 P2 CT P1T P2T Figur 7: Concentrções de prolin (PRO) ns mostrs de folhs( ) e rízes( ). Mss sec (MS). Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey. 26

27 mmol GB. kg -1 MS mmol GB. kg -1 MS Os conteúdos de prolin tendem umentr nos tecidos de folh e riz qundo plântuls é sumetid estresses ióticos. Esse umento pode ser considerdo consequente o umento de minoácidos, resposts dos tecidos d plnt em climtção os estresses, ou ind prolin estri relciond o justmento osmótico d plnt e proteção de estruturs celulres contr dnos oxidtivos (SILVA et l., 2009; 2010). Por outro ldo, Silv et l., (2009, 2010, 2012), considerrm este umento insuficiente, nos tecidos de J. curcs, pr firmr que este soluto tue no justmento osmótico e por tnto, prolin estri possivelmente relciond respost de climtção d plnt s lterções metólics provocds pelo estresse de clor (principlmente em tecidos folires) ou um respost de tolerânci sec (SILVA et l., 2012). Sore s concentrções de glicin etín, um mior quntidde foi oservd ns rízes. Em folhs, mos os trtmentos sec sever e sec moderd so estresse de clor, mostrm um umento em torno de 200% mis em relção o controle. Já em condição de sec sever so estresse de clor, esse umento é de sete vezes mis (Figur 8). Ns rízes, qundo comprdo os trtmentos controle e controle so estresse de clor, houve um umento n concentrção do soluto em todos os trtmentos, em torno de vinte vezes mis que os controles. 2,00 1,50 4,00 3,00 1,00 0,50 0,00 c c c C P1 P2 CT P1T P2T 2,00 1,00 0,00 c C P1 P2 CT P1T P2T c Figur 8: Concentrções de glicin etín (GB) ns mostrs de folhs( ) e rízes( ). Mss sec (MS). Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey. Nestes resultdos, oserv-se um tendênci no umento d glicin etín qundo ns condições de sec e estresse comindos. Qundo em condição de estresse de clor isoldo, tnto em folhs qunto em rízes, concentrção do soluto é semelhnte o controle. Isso sugere que glicin etín está relciond um respost o estresse 27

28 mmol AST. kg -1 MS mmol AST. kg -1 MS hídrico (ASHRAF e FOODLAD, 2007). Aind, em lts temperturs umento nos conteúdos de glicin etín, sugere que este soluto teri um ppel importnte n tolerânci o estresse térmico, provvelmente no uxílio contr dnos oxidtivos (WAHID et l., 2007) ocsiondos pel formção de espécies retivs o oxigênio (TAIZ e ZEIGER 2013). Pr Silv et l., (2009), este soluto pode tur como uxilir no justmento osmótico no citosol e proteção de estruturs d memrn celulr. Aind, Silv et l., (2010) evidenci prticipção d glicin etín no justmento osmótico dos tecidos folires e rdiculres em J. curcs so estresse hídrico, lém d provável prticipção deste soluto comptível como um osmoprotetor no citoplsm e de orgnels (cloroplstos). As concentrções de çúcres totis form miores em rízes do quê em folhs. Ns folhs, houve um redução em torno de 41% nos trtmentos sec moderd e controle so estresse de clor, qundo comprdos o controle. Qunto os demis trtmentos não houve vrição (Figur 9). Ns rízes, os trtmentos sec sever e sec moderd so estresse de clor, tiverm um redução de 41% e 30%, respectivmente, em comprção o controle e demis trtmentos, onde não houve vrição. 100,00 75,00 50,00 cd c d c 280,00 210,00 140,00 c c 25,00 70,00 0,00 C P1 P2 CT P1T P2T 0,00 C P1 P2 CT P1T P2T Figur 9: Concentrções de çúcres solúveis totis (AST) ns mostrs de folhs( ) e rízes( ). Mss sec (MS). Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey. Concentrções de mido form miores em folhs do quê ns rízes. Amos os estresses hídrico e clor, provocrm um redução ds quntiddes de mido nos trtmentos sec sever, controle so estresse de clor e sec sever so estresse de clor, em torno de 38% menos que o trtmento controle (Figur 10). Já ns rízes, 28

29 mmol Amido. kg -1 MS mmol Amido. kg -1 MS não houve vrição d concentrção entre os trtmentos controle, enqunto que nos trtmentos com ção dos estresses hídrico e hídrico so estresse de clor, houve um redução de 40% menos em relção os controles. 10,00 7,50 5,00 8,00 6,00 4,00 2,50 2,00 0,00 C P1 P2 CT P1T P2T 0,00 C P1 P2 CT P1T P2T Figur 10: Concentrções de e mido ns mostrs de folhs( ) e rízes( ). Mss sec (MS). Vlores representm médis ds réplics em cd trtmentos. Letrs diferentes indicm diferenç significtiv entre os trtmentos 5% segundo teste de Tukey. Açúcres totis são considerdos os solutos que mis contriuem pr o justmento osmótico d plnt (SILVA et l., 2009; PRISCO e FILHO, 2010; TAIZ e ZEIGER, 2013) enqunto que o cúmulo de mido está relciondo diretmente com plnts so estresse iótico, ssim como su redução é relciond com redução d tx fotossintétic, ssimilção de crono e crescimento d plnt (SILVA et l., 2010; TAIZ e ZEIGER, 2013). Contudo, pouc concentrção de çúcres totis ns folhs em comprção com s rízes, sugere que possivelmente os tecidos rdiculres possuem um justmento osmótico mis efetivo do que tecidos folires ou por outro ldo, s rízes não tenhm sentido tnto o efeito dos estresses qunto s folhs, já que s concentrções entre os trtmentos quse não diferem d condição controle. Qunto o mido, s concentrções tnto em folhs qunto em rízes, chegm ser muito menores qundo comprds os çúcres totis. Ess ixs concentrções podem ser possivelmente, tnto um reflexo d redução d tx de ssimilção e crescimento d plnt ou um hidrólise do mido induzid principlmente pelo estresse hídrico (SILVA et l., 2010; 2012; TAIZ e ZEIGER, 2013). 29

30 Tendo em vist respost d J. curcs à sinergi dos estresses, s lterções mis significtivs são oservds qundo comprdos o controle à sec sever so estresse de clor. No miente nturl, estresses gerlmente não ocorrem isoldos e sim em conjunto, por isso é possível que diferentes estresses, plicdos o mesmo tempo, podem estimulr resposts d plnt que fvoreç ou prejudique respost dpttiv como um todo (LARCHER, 2000). Se-se que J. curcs é um plnt dptd s condições típics do semiárido, e os resultdos significtivos ns condições mis severs de estresse, reforçm os estudos sore est espécie qunto mecnismos eficientes de resistênci sec (MAES et l., 2009; DÍAS-LÓPEZ et l., 2012; FINI et l., 2012; H. SAPETA et l., 2012). J. curcs ind é um espécie róre com poucs informções relcionds desempenhos de cultivos, principlmente qundo comprd cultivos de outrs espécies já domesticds ou estudos so condições de estresses comindos. Este trlho julg ter lcnçdo seu ojetivo qunto oservção de efeitos dos estresses hídrico e clor. Porém, sugere que mis testes relcionndo diferentes estresses ióticos, ind sejm necessários, relizdos fim de compreender como os estresses comindos podem tur sore J. curcs e que outrs resposts el pode presentr so ests condições. 30

31 8. CONCLUSÕES Os resultdos otidos nesse trlho sugerem que J. curcs é um espécie cpz de suportr os efeitos do estresse hídrico, considerndo que so s condições testds o conteúdo reltivo de águ ds plântuls foi pouco lterdo. No gerl qunto o estresse de clor s plântuls se mostrrm mis susceptíveis, considerndo que o conteúdo de solutos orgânicos qundo ness condição tende diminuir. Todvi, qundo comindos os estresses hídrico e clor, os resultdos presentrm um tendênci de umento em relção o estresse de clor isoldo. Sendo n miori ds vezes, sec sever so estresse de clor o trtmento com mior concentrção de soluto. 31

32 9. REFERÊNCIAS AL-BUSAIDI, A., AHMED, M., CHIKARA, J.. The impct of het nd wter stress conditions on the growth of the iofuel plnt Jtroph curcs. Interntionl Journl of Environmentl Studies, v. 69:2, ACHTEN, W. M. J., TRABUCCO, A., MAES, W. H., VERCHOT, L. V., AERTS, R. MATHIJS, E., VANTOMME, P., SINGH, V. P., MUYS, B.. Glol greenhouse gs implictions of lnd conversion to iofuel crop cultivtion in rid nd semi-rid lnds lessons lerned from Jtroph. Journl of Arid Environments. In Press, Corrected Proof, ug/2012. ASHRAF, M. e FOODLAD, M.R.. Roles of glycine etine nd proline in improving plnt iotic stress resistnce. Environmentl nd Experimentl Botny v. 59: BARBOZA Jr., C. R. A. Desenvolvimento de muds de pinhão mnso (Jtroph curcs L.) em tuetes e sumetids diferentes níveis de déficit hídrico. Tese de doutordo. ESALQ, Pircic, SP BATES, L. S., WALDREN, R. P., TEARE, I.D.. Rpid determintion of free proline in wter-stress studies. Short communiction. Plnt n Soil. v. 39: BAUR, H., MEADU, V., VAN NOORDWIJK, M., SWALLOW, B.. Biofuel from Jtroph curcs: opportunities, chllenges nd development perspectives. World Agroforestry Centre BARBIERI JUNIOR, D., BRAGA, L. F., ROQUE, C. G., SOUSA, M. P.. Análise de crescimento de Hymene courril L. so efeito d inoculção micorrizic e dução fosftd. Revist de Ciêncis Agro-Amientis, Alt Florest, v. 5, n.1, p.1-15,

33 BRADFORD, M.M. A rpid nd sensitive for the quntittion of microgrm quntitites of protein utilizing the principle of protein-dye inding. Anlyticl Biochemistry, v. 72, p , DÍAS-LÓPEZ, L., GIMENO,V., SIMÓN, I., MARTÍNEZ, V., RODRÍGUEZ- ORTEGA, W.M., GARCÍA-SÁNCHEZ, F.. Jtroph curcs seedlings show wter conservtion strtegy under drought conditions sed on decresing lef growth nd stomtl conductnce. Agriculturl Wter Mngement, v. 105: DUBOIS, M., GILLES, K.A., HAMILTON, J.K., REBERS, P.A., SMITH, F.. Colorimetric method for determintion of sugrs nd relted Sustnces. Anl. Chem. v. 28, FINI, A., BELLASIO, C., POLLASTRI, S., TATTINI, M., FERRINI. F.. Wter reltions, growth, nd lef gs exchnge s ffected y wter stress in Jtroph curcs. Journl of Arid Environments. v GESELLSCHAFT FÜR TECHNISCHE ZUSAMMENARBEIT - GTZ. Jtroph Relity Check: field ssessment of the gronomic nd economic viility of Jtroph nd other oilseed crops in Keny. Sustinle Mngement of Resources in Agriculture, Germn Technicl Coopertion. Est Afric, Niroi Disponível em: Acesso em: 24 mi GRIEVE, C.M., GRATTAN, S.R.. Rpid ssy for determintion of wter-solule quternry mmonium-compounds. Plnt Soil. v. 70: H. SAPETA, J., COSTA, M., LOURENÇO, T., MAROCO, J., VAN DER LINDE, P., OLIVEIRA, M.. Drought stress response in Jtroph curcs: Growth nd physiology. Environmentl nd Experimentl Botny. v.85: HOAGLAND, D. R.; ARNON, D. I. The wter culture method for growing plnts without soil. Clif. Agr. Exp. STA. Cir, 347., LARCHER, W. Ecofisiologi vegetl. RiM. São Crlos, SP

34 LUTTS, S., KINET, J. M., BOUHARMONT, J. NCl induced senescence on leves of rice (Oriz stiv L.) cultivrs differing in slinity resistnce. Ann. Bot. v. 78: MITTLER, R., FINKA, A., GOLOUBINOFF, P. How do plnts feel the het? Biochemicl Sciences, v. 37: MAES, W. H.; ACHTEN, W. M. J.; RUBENS, B.; RAES, D.; SAMSON, R.; MUYS, B.. Plnt wter reltionships nd growth strtegies of Jtroph curcs L. seedlings under different levels of drought stress. Journl of Arid Environments, v. 73, MICHAEL, B. E. e KAUFMANN, M. R.. The Osmotic Potentil of Polyethylene Glycol Plnt Physiol. v.51, NAHAR, K. & OZORES-HAMPTON, M. Jtroph: n Alterntive Sustitute to Fossil Fuel. Horticulturl Sciences Deprtment, Florid Coopertive Extension Service, Institute of Food nd Agriculturl Sciences, University of Florid. Out/2011. Disponível em: Acesso em: 24 r PEOPLES, M.B.; FAIZAH, A.W.; REAKASEM, B.E.; HERRIDGE, D.F. Methods for evluting nitrogen fixtion y nodulted legumes in the field. Cnerr: Austrlin Centre for Interntionl Agriculturl Reserch PRISCO, J. T. e FILHO, E. G.. Fisiologi e ioquimic do estresse slino em plnts. Mnejo d slinidde n gricultur: Estudos ásicos e plicdos. INCTSl. Fortlez RAO, A. V. R. K., WANI, S. P., SINGH, P., SRINIVAS, K., RAO, CH. S.. Wter requirement nd use y Jtroph curcs in semi-rid tropicl loction. Biomss nd ioenergy, v. 39, SILVA, C. L., BELTERÃO, N. E. M., NETO, M. S. A.. Análise do Crescimento de Comuniddes Vegetis. MAA, Emrp. Cmpin Grnde, PB. Circ. tec

35 SILVA, E. N., SILVEIRA, J. A. G., RODRIGUES, C. R. F., LIMA, C. S., VIÉGAS, R. A.. Contriuição de solutos orgânicos e inorgânicos no justmento osmótico de pinhão mnso sumetido à slinidde. Pesq. gropec. rs., Brsíli, v. 44, n.5, SILVA, E. N., FERREIRA-SILVA, S. L., VIÉGAS, R. A., SILVEIRA, J. A. G.. The role of orgnic nd inorgnic solutes in the osmotic djustment of drought-stressed Jtroph curcs plnts. Environmentl nd Experimentl Botny, v.69, n.3, my/ SILVA, E. N., RIBEIRO, R. V., FERREIRA-SILVA, S. L., VIÉGAS, R. A., SILVEIRA, J. A. G.. Comprtive effects of slinity nd wter stress on photosynthesis, wter reltions nd growth of Jtroph curcs plnts. Journl of Arid Environments, v. 74, n.10, jun/ SILVA, E. N., VIEIRA, S. A., RIBEIRO, R. V., PONTE, L. F. A., FERREIRA-SILVA, S. L., SILVEIRA, J. A. G.. Contrsting Physiologicl Responses of Jtroph curcs Plnts to Single nd Comined Stresses of Slinity nd Het. J. Plnt Growth Regul SLAVICK, B. Methods of studying plnt wter reltions. New York, Springer- Verlng TAIZ, L. e ZEIGER, E. Fisiologi vegetl. 5ª ed. Artmed. Porto Alegre WAHID, A., GELANI, S. ASHRAF, M., FOODLAD, M.R.. Het tolernce in plnts: An overview. Environmentl nd Experimentl Botny. v. 61: VILLELA, F.A.; DONI FILHO, L.; SIQUEIRA, E.L.. Tel de potencil osmótico em função d concentrção de polietileno glicol 6000 e d tempertur. Pesquis Agropecuári Brsileir, Brsíli, v. 26, n.11/

36 10. ANEXOS Mp ds áres glois clssificds como terrs árids, totlizndo 41,3% d superfície terrestre. Em destque mis escuro s regiões semiárids com proximdmente 16% desse totl (Imgem dptd de Atchen et l., 2012.). 36

37 Principis efeitos dos estresses de déficit hídrico e clor sore s plnts, de cordo com Mittler et l., (2012) e Tiz e Zeiger, (2013). A imgem relcion como mos os estresses podem potencilizr os efeitos um do outro, fetndo tnto o crescimento d plnt qunto s estruturs celulres e metolismo, num cdei que lev formção de espécies retivs de oxigênio (ROS). 37

38 Pnorm gerl dos resultdos oservdos n Jtroph curcs, so s condições experimentis deste trlho. D esquerd pr direit, s coluns indicm os resultdos oservdos ns condições de déficit hídrico (sec), estresse térmico (clor) e mos estresses comindos (S+C). Acim d linh pontilhd, estão indicdos os resultdos ds folhs, enqunto que ixo são os resultdos de rízes. Crescimento d prte áre foi reduzido enqunto que o crescimento ds rízes umentou. Brrs prlels indicm pouc ou nenhum lterção nos resultdos, sets pr cim indicm umento e sets pr ixo indicm diminuição. Sets com contorno indicm que nquel condição houve miores concentrção do soluto orgânico. 38