Ms. Romeu Moreira dos Santos

Transcrição

1 Ms. Romeu Moreira dos Santos IMUNOVIR

2 INTRODUÇÃO Termo utilizado para designar testes sorológicos realizados em meio gelificado, no qual os reagentes só se misturam por difusão Difusão simples em uma dimensão Oudin Difusão dupla em duas dimensões Ouchterlony. Questions & feedback? me More PowerPoint resources and downloads available at. 2

3 INTRODUÇÃO Dupla difusão em gel de ágar Reação de precipitação entre o Ag e o Ac específico em meio gelificado, onde ambos os reagentes se difundem um contra o outro, formando uma linha ou arco de precipitação na área de reação Essa técnica permite avaliar com relativa facilidade os "componentes antigênicos" encontrados em misturas complexas Questions & feedback? me dave@ More PowerPoint resources and downloads available at. 3

4 INTRODUÇÃO Permite também revelar se duas ou mais substâncias são imunologicamente idênticas ou independentes Essa prova geralmente é feita sobre lâminas de microscopia ou placas de Petri, revestida com uma camada de gel de ágar de 0,6 a 1,5% em solução fisiológica ou tamponada Questions & feedback? me dave@ More PowerPoint resources and downloads available at. 4

5 40 µl soro ou antígeno 4,5 ml GEL 1% LÂMINA 24 X 76 mm ORIFÍCIO NO GEL 5 mm Diâmetro Questions & feedback? me dave@ More PowerPoint resources and downloads available at. 5

6 40 µl antígeno 40 µl soro Questions & feedback? me More PowerPoint resources and downloads available at. 6

7 40 µl antígeno 40 µl soro Questions & feedback? me More PowerPoint resources and downloads available at. 7

8 40 µl antígeno 40 µl soro Antígeno e Anticorpo encontrando-se em proporções ótimas Questions & feedback? me dave@ More PowerPoint resources and downloads available at. 8

9 INTRODUÇÃO TESTE DE LIGAÇÃO SECUNDÁRIA Nem todo anticorpo que reagiu participa da geração de sinal Sensibilidade analítica = 30 µg / ml TESTE DE ELEVADA ESPECIFICIDADE ANALÍTICA BAIXÍSSIMA OCORRÊNCIA DE RUÍDO TESTE DE EXECUÇÃO SIMPLES BAIXO CUSTO Questions & feedback? me dave@ More PowerPoint resources and downloads available at. 9

10 Fatores que influenciam na velocidade da difusão O tamanho dos poros de gel A temperatura A concentração e pureza do ágar As concentrações das substâncias reagentes e o tamanho e forma molecular dos reagentes. Questions & feedback? me dave@ More PowerPoint resources and downloads available at. 10

11 INTRODUÇÃO Questions & feedback? me More PowerPoint resources and downloads available at. 11

12 Aplicabilidade O teste de imunodifusão em gel de ágar (IDGA) Diagnóstico da Anemia Infecciosa Equina (AIE) - MAPA (Redação dada pelo(a) Portaria) 495/2010/SDA/MAPA. Diagnóstico da Artrite-encefalite dos caprinos Diagnóstico de Brucelose bovina Questions & feedback? me dave@ More PowerPoint resources and downloads available at. 12

13 Aplicabilidade Questions & feedback? me More PowerPoint resources and downloads available at. 13

14 Material 1. Ágar a l% em solução fisiológica 2. Lâmina de microscopia 3. Pipeta graduada de 5ml 4. Micropipetadores 5. Solução do Ag (gama globulina bovina a l mg de proteína por/ml) 6. Soros de camundongos imunizados com gama globulina bovina e diferentes tipos de adjuvante (completo de Freund (ACF) ou incompleto de Freund (AIF) ou sem adjuvante) devendo conter, portanto, Acs anti- gama globulina bovina. 7. Molde perfurador de ágar para IDGA 8. Placas de Petri com algodão umedecido (Câmara úmida) 9. tubos de ensaio e estantes para diluição 10. Pipetas de lml 11. Solução salina Questions & feedback? me dave@ More PowerPoint resources and downloads available at. 14

15 Metodologia 1. Fundir o ágar em banho-maria de água fervente 2. Aplicar com cotonete sobre a lâmina uma camada de ágar e esperar secar 3. Colocar, com a pipeta, 3ml de ágar sobre as lâminas. Esperar esfriar e solidificar. Manter as lâminas em câmara úmida para não dessecar o gel. 4. Com o molde perfurador adequado, fazer os orifícios no gel e, em seguida, retirar os fragmentos de ágar com uma agulha hipodérmica 5. Diluir os soros de cobaio anti- gama globulina bovina a l/2, l/4, l/8, l/l6 e l/32 distribuindo em cada um dos 5 tubos 0,5ml de solução salina e, depois, no lº tubo colocar 0,5ml de soro. Homogeneizar bem e passar 0,5ml para o 2º tubo e assim sucessivamente até o último tubo 6. Aplicar, usando um micropipetador, 10 ul para cada amostra, o Ag gama globulina bovina (lmg/ml), as diluições do soro de camundongo anti-gama globulina bovina e incubar por hs. E depois fazer a leitura das linhas de precipitação (próxima quarta-feira- 21/09/16, no Laboratório de Imunologia). Questions & feedback? me dave@ More PowerPoint resources and downloads available at. 15

16 Metodologia Questions & feedback? me More PowerPoint resources and downloads available at. 16

17 Metodologia Questions & feedback? me More PowerPoint resources and downloads available at. 17

18 Obrigado! REGULAÇÃO DA RESPOSTA IMUNE Questions & feedback? me More PowerPoint resources and downloads available at. 18