Ms. Romeu Moreira dos Santos
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- Camila Porto Caetano
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1 Ms. Romeu Moreira dos Santos IMUNOVIR
2 INTRODUÇÃO A imunocromatografia é uma técnica que começou a ser desenvolvida nos anos 60, sendo primeiro criada para o estudo das proteínas séricas Atualmente é umas das técnicas imunológicas mais utilizadas para diagnóstico e triagem terapêutica rápida. Imuno-diagnóstico para várias doenças: - dengue, malária etc. (humano) - cinomose, parvovirose, coronavirose, FIV, FELV, erliquiose, babesiose etc. More PowerPoint resources and downloads available at. 2
3 INTRODUÇÃO Características: Qualitativos; Teste de triagem; Rápido; Econômico; Fácil interpretação; Leitura é feita a olho nu; Apresenta sensibilidade e especificidade similares ao ELISA. More PowerPoint resources and downloads available at. 3
4 INTRODUÇÃO O sistema é realizado em uma matriz constituída de membrana de nitrocelulose ou de náilon coberta por acetato transparente para facilitar a visualização do teste. O antígeno ou o anticorpo é fixado na membrana na forma de linhas ou pontos e o restante da membrana é bloqueado com proteína inerte como nos testes imunoenzimáticos (ELISA). TESTES SOROLÓGICOS PRIMÁRIOS More PowerPoint resources and downloads available at. 4
5 Imunocromatografia Detecção ANTÍGENO Para detectar antígeno, emprega-se um anticorpo de captura, ligado à matriz e um anticorpo marcado com partículas coloridas que é específico para o antígeno pesquisado; Detecção ANTICORPO Para detectar anticorpo, utiliza-se um antígeno específico ligado à matriz e um anticorpo antiimunoglobulina marcado com partículas coloridas; More PowerPoint resources and downloads available at. 5
6 Imunocromatografia More PowerPoint resources and downloads available at. 6
7 Imunocromatografia More PowerPoint resources and downloads available at. 7
8 Imunocromatografia Interpretação POSITIVO: Duas linhas são visíveis, sendo uma linha na região controle (C) e outra na região teste (T). A intensidade de cor da linha teste (T) poderá variar de acordo com a concentração do analito (Ag / Ac) presente na amostra. Todavia, qualquer intensidade de cor na linha teste indica resultado positivo. NEGATIVO: Apenas uma linha é visível na região controle (C), não sendo observada linha na região teste. INVÁLIDO: Não é evidenciada a linha controle (C). As razões mais comuns de falha são o volume insuficiente de amostra ou falha no procedimento técnico. Neste caso, reler a técnica e repetir o teste com uma nova tira. More PowerPoint resources and downloads available at. 8
9 Imunocromatografia More PowerPoint resources and downloads available at. 9
10 Imunocromatografia More PowerPoint resources and downloads available at. 10
11 Imunocromatografia FIV e FeLV Vírus da Imunodeficiência Felina (FIV) e Vírus da Leucemia Felina (FELV) More PowerPoint resources and downloads available at. 11
12 Imunocromatografia More PowerPoint resources and downloads available at. 12
13 Dot blotting Também conhecido com: - Dot-Elisa - Immuno-dot... Assim como Towbin e Gordon (1984) Termo dot blotting. Dot - ponto, mancha pequena Blotting - borrando, escurecendo Ponto ou mancha escurecida More PowerPoint resources and downloads available at. 13
14 Dot blotting Princípio Imobilização do antígeno e apresenta-lo ao anticorpo primário e secundário. Uma vez que exista vínculo a reação é visualizada por alteração de cor Sensibilidade Habilidade de identificar um animal infectado Especificidade Habilidade para designar seguramente os animais não infectados More PowerPoint resources and downloads available at. 14
15 Dot blotting O teste pode ser usado como método: - Quantitativo Quando se deseja verificar a concentração do antígeno - Qualitativo Separando amostras em positivas ou negativas (PINHEIRO, 2001) A facilidade e a simplicidade de utilização da técnica a torna uma excelente ferramenta de diagnóstico. More PowerPoint resources and downloads available at. 15
16 Dot blotting Cortar Membrana de Nitrocelulose Suporte More PowerPoint resources and downloads available at. 16
17 Dot blotting Sensibilização da membrana com o antígeno More PowerPoint resources and downloads available at. 17
18 Dot blotting Bloqueio proteínas estranhas Agitação constante á 4 C. More PowerPoint resources and downloads available at. 18
19 Dot blotting Amostra teste (soro) More PowerPoint resources and downloads available at. 19
20 Dot blotting More PowerPoint resources and downloads available at. 20
21 Dot blotting More PowerPoint resources and downloads available at. 21
22 Dot blotting More PowerPoint resources and downloads available at. 22
23 Imunocromatografia aula prática CDV cinomose Detecção de Ag do vírus da cinomose; Amostra: mucosa nasal, conjuntiva, saliva, urina, soro e plasma; Kit: diluente, swab esterilizado, conta-gotas (pipeta) e dispositivo teste; Materiais necessários não fornecidos: solução salina e cronômetro. More PowerPoint resources and downloads available at. 23
24 Imunocromatografia aula prática CDV cinomose Soro ou plasma: 1 a 2 gotas no diluente More PowerPoint resources and downloads available at. 24
25 Imunocromatografia aula prática CDV cinomose Soro ou plasma: 1 a 2 gotas no diluente More PowerPoint resources and downloads available at. 25
26 Imunocromatografia aula prática CDV cinomose More PowerPoint resources and downloads available at. 26
27 Imunocromatografia aula prática CDV cinomose More PowerPoint resources and downloads available at. 27
28 Imunocromatografia aula prática CDV cinomose More PowerPoint resources and downloads available at. 28
29 Imunocromatografia aula prática Reação cruzada: More PowerPoint resources and downloads available at. 29
30 Imunocromatografia aula prática Detecção de Gonadotrofina Coriônica Humana (GCH) Pode ser detectado no soro partir do 7º dia de gestação; Duplica a concentração a cada 2 dias. Qualquer urina do dia; Princípios: - Conjugado: Ac anti-gch + partículas coradas - Anticorpo de captura More PowerPoint resources and downloads available at. 30
31 Imunocromatografia aula prática 1 gota de urina More PowerPoint resources and downloads available at. 31
32 Obrigado! REGULAÇÃO DA RESPOSTA IMUNE More PowerPoint resources and downloads available at. 32
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