DIAGNÓSTICO IMUNOLÓGICO DAS INFECÇÕES POR DENGUE, CHIKUNGUNYA E ZIKA VÍRUS

Transcrição

1 DIAGNÓSTICO IMUNOLÓGICO DAS INFECÇÕES POR DENGUE, CHIKUNGUNYA E ZIKA VÍRUS Prof. Dra. Edna Maria Vissoci Reiche Imunologia Clínica Diagnóstico Molecular PAC/CCS/UEL

2 Dengue vírus da dengue Flavivírus RNA vírus Grupo dos Arbovírus (Arthopod borne virus) Sorotipos DEN-1,DEN-2, DEN-3 e DEN-4 Geneticamente e antigenicamente diferentes DEN-2: mais imunogênico Diferentes genótipos para cada sorotipo

3 Diferenças clínicas entre sorotipos DEN1 maior taxa de morbidade e menor taxa de mortalidade DEN2 maior variabilidade na patogenicidade alguns genótipos parecem produzir pouca ou nenhuma doença outros genótipos podem apresentar doença grave (FHD) DEN 3 Infecções similares ao DEN1 DEN 4 Infecções similares ao DEN2 DEN 5 não identificado no Brasil (epidemia na Malásia)

4 Organização genômica do vírus da dengue

5 Dengue: Testes Laboratoriais Específicos Diretos: Isolamento viral Detecção do RNA viral : RT-PCR Pesquisa de antígeno NS1 Específicos Indiretos: Pesquisa de anticorpos IgM e/ou IgG IHA Teste de Neutralização ELISA

6

7 Isolamento viral Inoculação em culturas celulares, animais e mosquitos Detecção de antígenos virais (ELISA ou RIE) Detecção do genoma viral (RT-PCR)

8 Isolamento viral Cultura de células Coleta : Até o quinto dia Amostra: Sangue ou outros fluídos orgânicos, fragmento de órgãos e macerado de mosquito Procedimento: frasco estéril sem anticoagulante Método: Cultura celulares em linhagens C6/36 provenientes do mosquito Aedes Tempo: 6 a 10 dias

9 Diagnóstico da dengue

10 Resposta imune na dengue 30 a 60 dias

11 Teste rápido para Dengue (IgG e IgM) Imunocromatografia (para 4 sorotipos); Sensibilidade e especificidade depende do laboratório Sens: 96-99% Esp: 98%

12 Diagnóstico laboratorial específico Sorologia - Pesquisa de IgM Coletar no 7º dia de início da doença, IgM persiste por 1 a 2 meses (s/n repetir entre o 11º e 30º dia do início dos sintomas) > 75% de positividade entre 7 a 10 dias > 99% de 10 a 20 dias IgG + no 9º dia na primo-infecção e no 1º dia na re-infecção

13 Diagnóstico laboratorial específico Detecção do vírus ou antígenos virais: Detecção de antigenemia - NS1 Reação em cadeia de polimerase (RT-PCR) - genoma viral Isolamento viral - define sorotipo Imunohistoquímica - antígenos virais Indicação: casos graves (nos primeiros 3-5 dias de evolução)

14 Teste rápido Ag NS1 - Imunocromatografia Teste positivo T C

15 Kit COMBO AgNS1 + IgM + IgG

16 Dengue: Testes Laboratoriais INESPECÍFICOS Hemograma Hematócrito Plaquetas Albumina Função hepática: AST, ALT Urina I

17 Dengue Grave (Febre hemorrágica do dengue Síndrome de choque) Hematócrito: aumento súbito de 20% do valor habitual do paciente em 24 horas Plaquetas: < /mm 3 Hipoproteinemia Elevação das aminotransferases AST e ALT Elevação de uréia Hiponatremia Redução da fração C3 do complemento

18 Dengue Grave (Febre hemorrágica do dengue Síndrome de choque) CID Redução dos fatores de coagulação V, VII, IX e X Prolongamento do tempo Protrombina Tromboplastina parcial Elevação dos produtos de degradação da fibrina

19 Prova do Laço (PAS +PAD)/2: manguito insuflado Adulto: 5 mim ( 20 petéquias) Criança: 3 min ( 10 petéquias) Presença de petéquias Área de 2,5 x 2,5 cm

20

21

22 Vírus Chikungunya (CHIKV) RNA vírus Família: Togaviridae (mesmo da rubéola) Gênero: Alphavírus Apenas um subtipo causa a doença

23

24 CHKV Diagnóstico laboratorial: sangue ou soro, LCR Métodos diretos: Isolamento do vírus Detecção do RNA viral: RT-PCR Métodos indiretos: Detecção de anticorpos IgM e/ou IgG: ELISA, IHA Aumento de 4 vezes o título acs entre as amostras nas fases aguda (preferencialmente primeiros oito dias de doença) e convalescente, preferencialmente de 15 a 45 dias após o início dos sintomas, ou dias após a coleta da amostra na fase aguda Teste de neutralização por redução de placas (PRNT)

25

26

27

28

29

30

31

32

33

34

35

36

37 FEBRE CHIKUNGUNYA DIAGNÓSTICO LABORATORIAL ISOLAMENTO DO VÍRUS (C636) RT-PCR (fase aguda da doença até D8) DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO: FASE AGUDA: após D5 FASE CONVALESCENTE: 15 45d ELISA: Anticorpos anti-chikv (após D7) INIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃO (5º - 7º d)

38

39 Teste de Neutralização por Redução de Placas de Lise PRNT Plaque Reduction Neutralization Test Método sorológico de quantificação dos anticorpos neutralizantes. Teste referência (padrão) Avaliação resposta vacinal fornece a melhor correlação para proteção da infecção, Mais sensível do que os testes IH e ELISA.

40

41

42

43 Exames inespecíficos Hemograma Leucopenia Linfocitose Trombocitopenia: rara VHS elevada

44 Diagnóstico diferencial Outras enfermidades a considerar são: malária leptospirose infecções por outros Alphavírus (ex. vírus Mayaro) artrite pós-infecciosa (Chlamydia, Shigella, Neisseria, febre reumática), artrite reumatoide juvenil, mononucleose infecciosa primo-infecção por HIV. Região Amazônica: a malária e febre Mayaro são endêmicas e fazem parte do diagnóstico diferencial obrigatório.

45

46

47 Zika vírus (ZIKV) É um vírus RNA pertencente à família Flaviviridae e causa quadro clínico semelhante à dengue. O Brasil é um dos países com maior diversidade de flavivírus DEN 1-4, vírus da encefalite japonesa vírus da febre amarela vírus da hepatite C

48 Serviços de referência no Paraná para atendimento de casos suspeitos de MICROCEFALIA e/ou outras malformações do SNC Serviços de referência para as respectivas macrorregiões de saúde para o encaminhamento das crianças que ao nascimento apresentarem microcefalia. Macrorregional Norte: Hospital Universitário de Londrina (HU UEL); Macrorregional Noroeste: Hospital Universitário de Maringá (HU UEM); Macrorregional Oeste: Hospital Universitário do Oeste do Paraná (HUOP); Macrorregional Leste: Hospital Infantil Waldemar Monastier; Hospital Infantil Pequeno Príncipe.

49 Esquema proposto para diagnóstico laboratorial do ZIKAV por técnicas de isolamento, RT-PCR e sorologia (IgM/IgG)

50

51

52 Sorologia X PCR Zika Pode ocorrer reação cruzada com outros flavivírus, como o da dengue, febre do Nilo Ocidental e febre amarela

53 DIAGNÓSTICO LABORATORIAL ZIKA DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO ISOLAMENTO VÍRUS (C636) D1 D5 RT PCR TR DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO NOVOS TESTES SOROLÓGICOS somente em laboratórios de referência Reação cruzada: dengue, febre amarela

54 Teste rápido ZIKA- V 15 fevereiro 2016 ANVISA concedeu registro de um teste rápido para detecção do zika vírus. Laboratório canadense Biocan Diagnostics Detecta Anticorpos em até 20 minutos

55 ZIKA-V alterações típicas laboratoriais associadas com a infecção são escassas, leucopenia, trombocitopenia ligeira elevação da LDH sérica, gama-gt ligeira elevação de marcadores de atividade inflamatória proteína C reativa, fibrinogênio e ferritina

56 Como diferenciar DEN, CHKV e ZIKV DEN: PCR para dengue Teste rápido para Dengue Sorologia para Dengue IgG, IgM e antígeno NS1 CHKV PCR qualitativo para Chikungunya Sorologia para Chikungunya ZIKV PCR para Zika vírus Sorologia para Zika Vírus IgG e IgM quantitativos

57

58

59