Declaração de Conflitos de Interesse. Nada a declarar.

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Heitor Salvado Desconhecida
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1 Declaração de Conflitos de Interesse Nada a declarar.

2 Infecções Respiratórias Bacterianas Pesquisa de antígenos urinários Caio Mendes Consultor Médico em Microbiologia i Clínica Grupo de Consultoria em Antimicrobianos e Microbiologia Clinica Fleury Medicina e Saúde

3 Qual o motivo para se desenvolver nova metodologia diagnóstica? Pesquisa esqusadea antígenos tge osurinários

4 Pneumonias Bacterianas Diagnóstico Microbiológico Material clínico: escarro, biópsias, lavado broncoalveolar, escovado, sangue, etc. Exame microscópico: Gram, Ziehl e IMFD Cultura: especificar Culturas quantitativas de acordo com material clínico (valorização dos agentes isolados) Sorologia: Chlamydia, Mycoplasma e Legionella Métodos moleculares

5 Problemas para o diagnóstico Coleta adequada do material clínico Uso prévio de antimicrobianos (discutível) Agentes de difícil isolamento ou detecção Sorologia inconclusiva ou tardia Hemoculturas: baixa sensibilidade Métodos moleculares não disponíveis na rotina habitual

6 Fatos concretos Streptococcus pneumoniae é a causa mais comum de PAC. Infecções causadas por Legionella são relativamente comuns em alguns paises. Necessidade de se ter um método rápido e confiável para o diagnóstico de algumas pneumonias. Desenvolvimento de testes para se detectar em material clínico de Desenvolvimento de testes para se detectar em material clínico de fácil obtenção (urina), componentes polissacárides da parede celular destes dois microrganismos.

7 Revisão de Literatura Científica 1. Evaluation of the Binax NOW Streptococcus pneumoniae urinary antigen assay in intensive care patients hospitalized for pneumonia. Sigismondi Lasocki;Agnès Scanvic:Françoise Le Turdu et al. Intensive Care Med (2006) 32: Assessment of a rapid urinary antigen detection by an immunochromatographic test for diagnosis of pneumococcal infection in children. Marie-Laure Charkaluk:Nicolas Kalach:Hector Mvogo et al. Diagnostic Microbiology and Infectious Diseases (2006) 55: Contribution of a pleural antigen assay (Binax NOW) to the diagnosis of pneumococcal pneumonia. José M. Porcel;Agustin Ruiz-González;Miguel Falguera et al. CHEST (2007) 131: Assessment of analysis of urinary pneumococcal antigen by immunochromatography for etiologic diagnosis of community-acquired pneumonia in adults. Maria Luisa Briones;José Blanquer;David Ferrando et al. Clinical and Vaccine Immunology (2006) 13: Evaluation of the SAS Legionella test, a new immunochromatographic assay for the detection of Legionella pneumophila serogroup 1 antigen in urine. B.M.W.Diederen and M.F.Peeters. Clinical Microbiology and Infection (2007) 13:86-88.

8 DADOS MAIS RELEVANTES DA LITERATURA 1. Somente em 30 a 50 % dos pacientes há possibilidade de se coletar amostras clinicas de TRI para exames microbiológicos e grande parte dos pacientes são tratados t empiricamente. i 2. Hemoculturas tem alta especificidade mas baixa taxa de positividade (10 a 40%) % das pneumonias apresentam derrame pleural, embora isolamento por cultura de microrganismos nesse material seja em torno de 50% dos casos. 4. Em média 1/3 dos pacientes com PAC já estão em uso prévio de antimicrobianos antes da coleta de algum exame. 5. Streptococcus pneumoniae é a causa mais comum de PAC. 6. Legionella deve ser considerada em algumas situações.

9 Considerações sobre o teste Teste in vitro (imunocromatográfico) para detecção na urina de antígenos solúveis de Streptococcus pneumoniae. Teste (Binax NOW) detecta o polissacáride C da parede celular de 23 sorotipos de pneumococos. Material clínico: amostra recente de urina ou amostra refrigerada. Teste pode ser usado em liquido pleural e também em líquor. Swab é mergulhado na amostra e colocado em membrana de nitrocelulose que tem a-c de coelho contra S. pneumoniae conjugado com partículas coloidais Leitura após 15 minutos e segunda leitura opcional após 1 hora

10 Procedimentos do teste Urina/LCR + + SWAB (kit) kit Negativo Positivo

11 Aplicação do teste em casos de derrame pleural Contribution of a pleural antigen assay (Binax NOW) to the diagnosis of pneumococcal pneumonia. Ciéi Critérios diagnósticos: i a. Derrame pleural devido a PAC causada por S. pneumoniae: isolamento do microrganismo, sorologia positiva (n=34). b. Derrame pleural devido a PAC não pneumocócica:identificação de algum outro microrganismo (n=89). c. Derrame pleural devido a PAC de origem desconhecida: resultados negativos de todos os demais exames (n=17).

12 Resultados Grupo 1: nos pacientes com derrame pleural devido a pneumonia pneumocócica, o teste foi positivo em 24 (24/34) pacientes: sensibilidade 70,6% Grupo 2: nos pacientes com derrame pleural devido pneumonia de outras etiologias, o teste foi positivo em 6 (6/89) pacientes: especificidade 93,3% Resultados falso-positivos: anaeróbios, Streptococcus viridans e E. faecalis Grupo 3: nos pacientes com derrame pleural devido a pneumonia de origem desconhecida o teste foi positivo em 5 (5/17) pacientes: pode ser interpretado como resultados falso-positivos ou resultados verdadeiros nos quais o agente não foi detectado pelas metodologias habituais. Uso prévio de antimicrobianos não interfere no resultado deste teste.

13 Evaluation of the Binax NOW Streptococcus pneumoniae urinary antigen assay in intensive care patients hospitalized for pneumonia. 140 pacientes avaliados pelo teste, sendo que destes, 32 tinham diagnóstico de pneumonia pneumocócica por outras metodologias. Teste foi positivo em 23 destes pacientes (23/32), ou seja, sensibilidade de 72% Teste foi positivo em 11 pacientes com pneumonia não pneumocócica (11/108), ou seja, especificidade de 90% Valor preditivo positivo 68% Valor preditivo negativo 92%

14 Assessment of analysis of urinary pneumococcal antigen by immunochromatography for etiologic diagnosis of community-acquired pneumonia in adults. 911 pacientes avaliados pelo teste Teste foi positivo nos pacientes com pneumonia pneumocócica (46/57), ou seja, sensibilidade de 81% Teste foi positivo nos pacientes com pneumonia não pneumocócica (39/196), ou seja, especificidade de 80% Teste foi positivo nos pacientes que não apresentavam pneumonia (12/155), ou seja, especificidade de 92%

15 Considerações gerais Teste (Binax NOW) detecta o polissacáride C da parede celular de 23 sorotipos de pneumococo. Resultados falso positivos são encontrados (reação cruzada com outros Streptococcus spp, S. mitis e S. oralis). Não há um teste ouro ( gold standard ) para o diagnóstico de PAC, sendo aceito para diagnóstico o isolamento do agente em cultura de alguns materiais do TRI, em hemocultura ou sorologia. Vantagens: o teste para detecção de antígenos urinários não é um teste invasivo. Teste rápido e de fácil execução. Teste pode ser positivo em pacientes com DPOC que apresentam colonização por S. pneumoniae

16 Continuação O teste negativo não exclui infecção por Streptococcus pneumoniae. É recomendável que sejam realizados conjuntamente outros exames laboratoriais para uma melhor análise dos resultados. Teste contribui de alguma forma para o diagnóstico quando realizado em paralelo com outras metodologias diagnósticas. Vacina pneumocócica pode ocasionar falsos resultados positivos na urina após 48 horas da vacinação. Sensibilidade geral de 70,6 a 81% e especificidade de 80 a 93,3%. 3% Reações cruzadas podem ocorrer em 9% dos casos.

17 Detecção de Legionella spp Pesquisa de antígenos urinários i

18 Considerações Pneumonia por Legionella não representa mais que 1 a 5% dos casos de PAC. L. pneumophila é responsável por mais de 90% destes casos, sendo o sorogrupo 1 o mais freqüente. Critérios habituais para evidência de infecção por Legionella: diagnóstico clínico e radiológico, isolamento em cultura a partir de amostras do TRI, testes moleculares (PCR) positivos, ou sorologia positiva.

19 Teste para detecção de antígenos urinários de Legionella Teste apresenta algumas vantagens sobre a cultura. Método imunoenzimático ou imunocromatográfico de fácil execução. Desenvolvido para detecção de L. pneumophila sorogrupo 1, embora alguns outros sorogrupos e espécies já tenham sido detectados. Resultados falso positivos podem ocorrer: reações cruzadas em pacientes com bacteremia por S. pneumoniae ou por ligações proteicas inespecíficas. Sensibilidade do teste variável, de 56 a 99% Especificidade de 95 a 99% Teste se mantém positivo por várias semanas após a doença.

20 Conclusões finais Uma maior sensibilidade para o diagnóstico de infecções causadas por Legionella pneumophila p e S. pneumoniae, pode ser alcançada utilizando-se a combinação da cultura, sorologia e detecção de antígenos urinários, até que outras tecnologias sejam desenvolvidas e validadas para uso em rotina. Em futuro próximo as técnicas de PCR devem ganhar espaço devido a sua maior sensibilidade e especificidade..

21 Salvador Caio Mendes Salvador Caio Mendes Caio Mendes e.mail: caio.mendes@fleury.com.br Consultor Médico em Microbiologia Clínica Grupo de Consultoria em Antimicrobianos e Microbiologia Clinica Fleury Medicina e Saúde

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