LABORATÓRIO ANÁLISE. PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO. ANALITICO
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- Diogo Santarém Sá
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1 Edição Análise Crítica Aprovação Data / / Data: / / Data: / / ASS.: ASS.: ASS.: NOME: Rozileide Agostinho NOME: Rozileide Agostinho NOME: Marcelo Villar FUNÇÃO/CARGO: Controle de Documentos e Dados FUNÇÃO/CARGO: Gerência da Qualidade FUNÇÃO/CARGO: Diretor Conselho É proibida a reprodução parcial ou total deste documento. Cópias extras, quando necessárias, devem ser solicitadas ao Setor da Qualidade. Código: POP.HEM.001 Revisão: 03 Página 1 de 6
2 1.0 Princípio: Os reticulócitos são quantificados percentualmente após submeter o sangue total a uma coloração supravital pelo azul cresil brilhante. A coloração supravital com azul de cresil brilhante cora os restos de RNA associados aos ribossomos que aparece com filamentos ou ramos azuis, os quais correspondem a eritrócitos que acabaram de perder o núcleo ou mais jovens que cerca de 30% da hemoglobina é sintetizada no eritrócito sem núcleo. 2.0 Aplicação Clínica: Usado para diagnóstico diferencial das anemias. Encontram-se aumentados nas anemias hemolíticas, nas anemias por perda de sangue. Encontram-se diminuídos nas anemias aplasticas, nas anemias ferropriva e megaloblástica antes do tratamento e na uremia. 3.0 Amostra: 3.1 Preparo do paciente: Jejum não obrigatório. Se após almoço, jejum de 4 horas. 3.2 Tipos de amostras: Ideal e outras aceitáveis Sangue total coletado em tubo com EDTA. 3.3 Volume mínimo da amostra 1.0 ml de sangue. 3.4 Quantidade ideal da amostra: 3.0 ml de sangue. 3.5 Armazenamento e estabilidade da amostra: Estável por até 12 horas á temperatura ambiente e até 24 horas refrigerado. 3.6 Critérios para rejeição da amostra: Quantidade insuficiente de amostra; Presença de coagulo; Amostra degenerada; Hemólise intensa. 3.7 Cuidados no descarte da amostra: Código: POP.HEM.001 Revisão: 03 Página 2 de 6
3 Para manusear e descartar reagentes e material biológico, aplicar as normas estabelecidas de biossegurança, conforme descrito no POA.SGE.001. Descarte de Amostra Biológica e no MAN.002 Manual de Biossegurança. 4.0 Insumos: Azul cresil brilhante. 4.1 Tipo, Armazenamento e preparo dos reagentes: Pronto para uso, e deve ser armazenado em temperatura ambiente. Precauções e cuidados especiais descritos na bula. Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na manipulação do reagente, conforme MAN002. Manual de Biossegurança O reagente utilizado em condições técnicas adequadas e armazenado nas condições especificadas é estável até a data de validade expressa na etiqueta. 5.0 Equipamentos: Banho Maria 6.0 Procedimento detalhado: 6.1 Materiais Necessários: Incubador ou banho-maria a 37º C. Pipetas automáticas e ajustável. Cronômetro. Tubos de ensaio. 6.2 Procedimento Manual: Em tubo de ensaio, pipetar 150ml de sangue mais 50ml de corante azul de cresil brilhante; Homogeneizar em Vortex (agitador de tubos) e incubar em banho Maria a 37 C por 15 minutos; Retirar os tubos do banho Maria, homogeneizar e colocar uma gota sobre lâmina e confeccionar uma extensão (preparar esfregaço); Esperar secar; Ler em microscópio óptico com objetiva de imersão usando óleo de cedro ou mineral pingando uma gota em área de concentração média e homogênea. Quantificar números de hemácias por campo, realizar a leitura e contar número de reticulócitos. EX.: ler 5 campos com 200 hemácias cada.totalizando um total de 1000 hemácias. Homogeneizar e preparar os esfregaços; Contar ao microscópio, com a lente de imersão. Código: POP.HEM.001 Revisão: 03 Página 3 de 6
4 Uma vez quantificados os reticulócitos, divide-se o resultado por 10, pois o resultado é liberado em 100 eritrócitos. Fazer a correção do valor do hematócrito do paciente quando estiver diminuído em relação ao hematócrito. 7.0 Cálculos: X = HT DO PACIENTE HT NORMAL Contar 1000 hemácias, anotando o número de reticulócitos encontrados 8.0 Controle de qualidade: 1 Controle Interno: Controle Comparação entre microscopistas é realizado quando o exame for incluso na rotina do dia. O Controle será realizado no inicio da rotina, com a confecção de lâmina para a leitura, analisada pelos observadores 1 e 2, os resultados encontrados são registrado em planilha controle. Se houver concordância dos resultados entre os microscopistas para elementos que definem o diagnóstico, o resultado é liberado e as seguintes informações anotadas em planilha controle: Os do paciente teste, parâmetros; resultado liberado; responsável pela aprovação; analito; data e setor. Em caso de discordância nos valores encontrados, registram-se então na própria planilha controle ocorrência, possíveis causas, ação tomada e resultado após ação. 8.2 Controle Externo: Trimestralmente é realizado o Controle Comercial, com esse sistema de controle em que o resultado de cada teste do laboratório participante do programa é comparado com a média de consenso do seu grupo. Portanto, consiste na comparação da exatidão dos exames de um laboratório com a de outros participantes. Desta maneira, o Controle Externo da Qualidade visa padronizar os resultados de laboratórios diferentes através da comparação de análises de alíquotas do mesmo material. Por último, é feita uma avaliação dos resultados de cada laboratório e caso tenha inadequação dos analitos avaliados, é realizada uma investigação de inadequação e após detectar o erro realiza-se ação corretiva. Todas essas informações são registradas em planilha controle anexo 11 do POA.DCO.04. Reporte de Resultado - Manual: O percentual de reticulócitos deve ser obtido pela fórmula [(contagem de reticulócitos / contagem de hemácias) x 100]. A contagem das hemácias e a adoção desta fórmula evita a superou subestimação do resultado por conta da variação da quantidade de hemácias por campo. Não é fornecido o hematócrito de cada item e os resultados não devem ser ajustados com base no índice de reticulócitos (IR) ou no índice de produção de reticulócitos (RPI). Critérios Específicos de Avaliação Manual: o resultado do participante é avaliado conforme estatística de grupo, obtida com a normalização dos resultados pela aplicação da raiz quadrada. Código: POP.HEM.001 Revisão: 03 Página 4 de 6
5 Após a realização dos exames, os laudos são impressos e os resultados comparados, caso tenha inadequação dos analitos avaliados, é realizada uma investigação de inadequação e após detectar o erro realiza-se ação corretiva. Todas essas informações são registradas em planilha controle anexo 11 do POA.DCO.04. Resultados: 9.0 Unidade de Medida: % (percentual) 9.1 Valores de Referência: Valores desejáveis ou recomendados: Ambos os sexos: 0,5 a 1,5% 9.2 Valores Críticos: Resultados muito alterados o bioquímico responsável deve entrar em contato com o médico solicitante. 9.3 Exames correlacionados: Hemograma e Eritrograma Desempenho do teste: 10.1 Linearidade e Limite de Detecção: 10.2 Intervalo Reportável: 10.3 Sensibilidade e especificidade: 11.0 Fontes potenciais de variabilidade e interferentes: Amostra hemolisada 12. Referências Bibliográficas: Manual de Hematologia Therezinha Lorenzi Imunologia Básica e Clínica Mark Peakman 13. Natureza das Alterações: NATUREZA DAS ALTERAÇÕES Código: POP.HEM.001 Revisão: 03 Página 5 de 6
6 REVISÃO NATUREZA DAS ALTERAÇÕES 01 Alteração da responsabilidade na aprovação do documento; Adequação ao PALC. 02 Inclusão dos procedimentos detalhados do PCIQ e PAEQ 03 Reavaliação do documento. Código: POP.HEM.001 Revisão: 03 Página 6 de 6
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