LABORATÓRIO ANÁLISE. PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO.

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1 Data Edição Análise Crítica Aprovação / / Data: / / Data: / / ASS.: ASS.: ASS.: NOME: Rozileide Agostinho NOME: Rozileide Agostinho NOME: Marcelo Villar FUNÇÃO/CARGO: Controle de Documentos e Dados FUNÇÃO/CARGO: Gerência da Qualidade FUNÇÃO/CARGO: Conselho Diretor É proibida a reprodução parcial ou total deste documento. Cópias extras, quando necessárias, devem ser solicitadas ao Setor da Qualidade. Código: Revisão: 04 Página 1 de 7

2 1.0 Princípio: O espermograma é um exame que relata os mais diversos estados de fertilidade e infertilidade masculina e controle de vasectomia. São avaliados os casos de infertilidade e fertilidade quando são analisados, os seguintes parâmetros; Estudos físicos do esperma (cor, volume, e viscosidade). Ph Contagem espermatozóides e leucócitos; Motilidade, vitalidade e morfologia dos espermatozoides; 2.0 Aplicação Clínica: A análise do sêmen é indicada em casos de infertilidade conjugal, avaliação e controle do paciente pós-vasectomizado e avaliação de doenças testiculares e penianas sobre a espermatogênese. O sêmen normal é uma mistura de espermatozóides e secreções provenientes dos testículos e epidídimos, os quais são misturados durante a ejaculação com secreções oriundas da próstata, vesículas seminais e glândulas bulbouretrais. A composição final é um líquido viscoso que forma o ejaculado. 3.0 Amostra: 3.1 Preparo do paciente: A amostra deve ser coletada após um período de abstinência sexual de 3 a 5 dias. O paciente deve ser instruído para evitar perda de material, principalmente o 1º jato, que contém a maior concentração de espermatozóides. A amostra deve ser obtida por masturbação e ejaculada dentro de um recipiente de boca larga de vidro ou plástico. Deve-se evitar temperaturas extremas (-20 C ou +40 C ). O frasco contendo a amostra deve ser identificado, contendo o nome do paciente, o período de abstinência sexual, data e hora da coleta. O ideal é coletar o material no laboratório, porém, se isso não for possível, a amostra deve ser enviada ao laboratório dentro de no máximo 20 minutos. 3.2 Coleta de amostra: A amostra deve ser coletada após um período de três a cinco dias de abstinência sexual. A amostra deve ser colhida por masturbação e ejaculação em ambiente estéril. 3.3 Tipos de amostra: Líquido seminal 3.4 Volume mínimo da amostra 0.5 ml de esperma Código: Revisão: 04 Página 2 de 7

3 3.5 Critérios para rejeição da amostra: Quantidade insuficiente de amostra; Alta viscosidade; Tempo decorrido entre a coleta e a chegada ao laboratório (casos onde o material é coletado fora do estabelecimento); Período de abstinência superior a cinco dias (exceto quando há autorização médica) 3.6 Armazenamento e estabilidade da amostra: A amostra deve ser armazenada no recipiente onde foi coletada, à temperatura ambiente, até que a análise seja realizada (A análise deverá ser realizada em até sessenta minutos). 3.7 Cuidados no descarte da amostra: Para manusear e descartar reagentes e material biológico, aplicar as normas estabelecidas de 4.0 Insumos: 4.1 Reagentes: biossegurança, conforme descrito no POA.SGE.001. Descarte de Amostra Biológica e no MAN.002 Manual de Biossegurança. SOLUÇÃO EOSINA AMARELA 3%: A Eosina é aliquotada e colocada em um ependof de 1,5 ml, com o objetivo de facilitar o manuseio e não expor a maior parte do corante ao ambiente, o que pode interferir na sua estabilidade. O frasco recebe etiqueta onde constam as seguintes informações; Solução, concentração, data do preparo, condições de armazenamento, riscos potenciais, precauções de segurança, responsável pelo preparo/aliquotagem, número do lote, e data de validade. A preparação/ aliquotagem é registrada em planilha controle. Solução Nigrosina 8%; Corante de Leishman; O corante é aliquotado e passado para um frasco ambar, com o objetivo de tornar a coloração mais prática e segura. O frasco recebe etiqueta onde constam as seguintes informações; Solução, concentração, data do preparo, condições de armazenamento, riscos potenciais, condições de armazenamento, riscos potenciais, precauções de segurança, responsável pelo preparo/aliquotagem, número do lote, e data de validade. A preparação/ aliquotagem é registrada em planilha controle. precauções de segurança, responsável pelo preparo/aliquotagem, número do lote, e data de validade. A preparação/ aliquotagem é registrada em planilha controle. Código: Revisão: 04 Página 3 de 7

4 OBS: Armazenar em local fresco. Guardar o recipiente hermeticamente fechado em lugar seco e bem ventilado com temperatura controlada entre +15 C e +25 C 4.2 Tipo, Armazenamento e preparo dos reagentes: Pronto para uso, e deve ser armazenado em temperatura ambiente. Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na manipulação do reagente, conforme MAN.02 Manual de Biossegurança O reagente utilizado em condições técnicas adequadas e armazenado nas condições especificadas è estável até a data de validade expressa no rotulo ou etiqueta. 5.0 Equipamentos: Microscópio, Câmara de Markler, Pipeta automática 10 ul, Tubo cônico com graduação e Pipeta graduada ou proveta. 6.0 Procedimento detalhado: A amostra devidamente colhida e identificada é encaminhada para distribuição para ser bipáda e retirar o mapa de trabalho, sendo encaminhada para, o setor de microbiologia para ser analisada. A analise não pode começar enquanto a liquefação não tiver ocorrido. Deve avaliar se a liquefação foi completa ou incompleta após 60 minutos. Verificar o volume de viscosidade, cor, ph, o odor e coagulação. 6.1 Exames físicos: Volume: Despeja-se a amostra em tubo cônico graduado para medi-lo (VN: 2 à 5 ml) Viscosidade: Pode ser determinada enquanto a amostra está sendo despejada no tubo cônico. Se normal, a amostra gotejará no recipiente e não se mostrará aglutinada ou filamentosa Cor: Varia de branco opaco ou opalescente, amarelado purulento, hemorrágico ou róseo ph: P ph do sêmen é ligeiramente alcalino de 7,3 a 8,3, pode ser medido, com o uso de uma fita medidora de ph. Se a reação entre liquido prostático e o seminal for normalmente elevado, o ph poderá ser mais ácido Odor: O Odor deve ser característico, semelhante ao de água sanitária Coagulação: Deve ser avaliada imediatamente após a coleta. A amostra é ejaculada em forma de coágulo, deve-se observar em quanto tempo esse coagulo é desfeito. Qualquer aparência anormal do liquido como presença de sangue, pigmentação, grande turvação que pode ser devida á presença de leucócitos, também deve ser registrada nesse momento Código: Revisão: 04 Página 4 de 7

5 6.2 Exames Microscópicos: motilidade; vitalidade; concentração e morfologia dos espermatozóides Concentração dos espermatozóides: Deve-se colocar 10ul da amostra na câmara de makler e observar ao microscópio com a objetiva de 20x. Contam-se os espermatozóides que estão em uma coluna e multiplica por ou todas as colunas e multiplica por Motilidade: Deve-se realizar contagem diferencial entre espermatozóides rápidos, lentos, não progressivos e imoveis Vitalidade: Deve-se preparar uma lâmina com os corantes eusina e nigrosina, proceder a leitura da mesma em microscópio com aumento de 100x. É realizada uma contagem diferencial entre espermatozóides mortos e vivos : Morfologia: Morfologia convencional: Realiza-se uma contagem diferencial entre espermatozóides normais e anormais segundo critérios da OMS 3ª Ed Morfologia estrita de krunger: Realiza-se uma contagem Diferencial entre espermatozóides normais e anormais ( Defeitos de cabeça, cauda e peça intermediária), segundo critérios de krunger (OMS 4ª Ed). 6.3 Contagem de leucócitos e hemácias: Deve-se colocar 10ul da amostra na câmara de makler e observar ao microscópio com a objetiva de 20x. Contam-se os leucócitos/hemácias que estão em uma coluna e multiplica por ou todas as colunas e multiplica por Exame do Sêmen em paciente vasectomizado: Nas amostras colhidas pós-vasectomia, é importante verificar a presença de espermatozóides. O tempo necessário para a ocorrência da esterilidade completa pode variar de um paciente para outro, por isso não é raro encontrar espermatozóides viáveis em pacientes vasectomizados. Normalmente, as amostras são examinadas em intervalos mensais que começam aos 2 meses após a vasectomia e continuam até que 2 amostras mensais consecutivas dos espermatozóides no sêmen indiquem a eficácia do método (vasectomia). 7.0 Cálculos: N.A Código: Revisão: 04 Página 5 de 7

6 8.0 Controle de Qualidade: 8.1 Controle Interno: Controle Duplo Observador é realizado quando o exame for incluso na rotina do dia. O Controle será realizado no inicio da rotina, com a confecção de lâmina para a leitura, analisada pelos observadores 1 e 2, os resultados encontrados são registrado em planilha controle. Se a concordância dos resultados entre os micoscopistas for de cem por cento para elementos que definem o diagnóstico, o resultado é liberado e as seguintes informações anotadas na planilha controle: Os do paciente teste, parâmetros; resultado liberado; responsável pela aprovação; analito; data e setor. Em caso de discordância nos valores encontrados, registrase então na própria planilha controle ocorrência, possíveis causas, ação tomada e resultado após ação. 8.2 Controle Externo: Trimestralmente é realizado o Controle Comercial, com esse sistema de controle em que o resultado de cada teste do laboratório participante do programa é comparado com a média de consenso do seu grupo. Portanto, consiste na comparação da exatidão dos exames de um laboratório com a de outros participantes. Desta maneira, o Controle Externo da Qualidade visa padronizar os resultados de laboratórios diferentes através da comparação interlaboratorial de análises de alíquotas do mesmo material. Por último, é feita uma avaliação dos resultados de cada laboratório e caso tenha inadequação dos analitos avaliados, é realizada uma investigação de inadequação e após detectar o erro realiza-se ação corretiva. Todas essas informações são registradas em planilha controle anexo 11 do POA.DCO Resultados: 9.1 Unidade de Medida: % percentual 9.2 Valores de Referência: Volume: VR: 2,0 a 5,0 ml ph VR:7,2 a 8,0 Tempo duração da coagulação (37ºC) VR: até 60 minutos. Contagem: VR: superior a 20 milhões % de espermatozóides vivos: VR: acima de 75% Normais: VR: acima de 30% Formas vivas VR: superior a 75% Rápida progressiva RV: superior a 20% 10.0 Desempenho do teste: Código: Revisão: 04 Página 6 de 7

7 N.A 11.0 Fontes potenciais de variabilidade e interferentes: N.A 12.0 Referencia Bibliográficas: OMS. Manual de Laboratório para o Exame do Sêmen Humano e Interação Esperma-Muco Cervical; 3 ed. Santos, PIVA, S. Espermograma, Análise e Técnicas. 6 ed. Santos, São Paulo, STRASINGER, SK. Uroanálise e Fluidos Biológicos. Ed. Panamericana, São Paulo, Natureza das Alterações: NATUREZA DAS ALTERAÇÕES REVISÃO NATUREZA DAS ALTERAÇÕES 01 Adequação ao PALC 02 Inclusão dos procedimentos detalhados do PCIQ e PAEQ 03 Reavaliação do documento. 04 Reavaliação do documento sem alteração. Código: Revisão: 04 Página 7 de 7