2. Aplicabilidade: Bioquímicos/biomédicos do setor de Hematologia
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- Nathalia Beretta Avelar
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1 1. Sinonímia: Hemograma 2. Aplicabilidade: Bioquímicos/biomédicos do setor de Hematologia 3. Aplicação clínica Exame laboratorial de rotina para avaliação quantitativa e qualitativa dos elementos figurados do sangue. Sofre alterações significativas tanto nas doenças hematológicas quanto em doenças das mais variadas patogêneses, tendo, por isso, grande valor preditivo e diagnóstico. É composto pelos seguintes parâmetros: Contagem de eritrócitos (RBC), dosagem de hemoglobina (HBG), determinação do hematócrito (HCT), volume corpuscular médio (VCM), hemoglobina corpuscular média (HCM), concentração hemoglobínica corpuscular média (CHCM) e amplitude de distribuição dos eritrócitos (RDW) que compõem o eritrograma; contagem de leucócitos (WBC) e fórmula leucocitária que compõem o leucograma, além da contagem de plaquetas (PLA). 4. Princípio do teste O hemograma é realizado em equipamentos de automação (Sysmex XN 1000) com reavaliação microscópica (Confecção de distensões sanguíneas vide anexo 01). 5. Equipamentos Sysmex XN
2 6. Calibração A calibração do equipamento é realizada sempre que necessário pelos técnicos da Sysmex 7. Amostra Sangue total anticoagulado com EDTA. 8. Reagentes e materiais 8.1 Coloração: Álcool Metílico e Corante Eosina Azul de Metileno segundo Leishmann (vide preparo em anexo 1 e coloração de lâminas em anexo 03) 8.2 Reagentes para automação: Cellpack-DCL Solução de diluição (frasco de 20L) Lysercell WNR e WDF soluções diluentes (frascos de 5L) Fluorocell WNR Corante (frasco de 82mL) Fluorocell WDF- Corante (frasco de 42mL) Sulfolyser-SLS Lise eritrócitos e complexo cromático hemoglobina (frasco de 5L) 8.3 Materiais: Lâminas para microscopia. 9. Procedimento Vide anexos 1, 2 e 3 2
3 10. Controle de qualidade Interno Diariamente é utilizada uma amostra analisada no dia anterior, juntamente com três níveis (baixo, normal e alto) do controle comercial XN-CHECK Externo Mensalmente são analisadas amostras do Programa Nacional de Controle de Qualidade. Estas devem ser reconstituídas conforme orientação da bula que acompanha a amostra. Os resultados são inseridos no site do programa e após a análise da coordenadoria do programa, são liberados através de conceitos (Bom, Aceitável ou Inaceitável). Para os resultados com conceito Inaceitável, os bioquímicos/biomédicos devem realizar uma análise crítica de todas as etapas do processo. 11. Resultados As informações contidas nos laudos de resultado resultam das medidas efetuadas no equipamento com alterações e informações acrescidas após avaliação microscópica da amostra, sendo liberados no sistema após conferência individualizada por profissional de nível superior habilitado Unidades Os resultados são expressos em Unidades Internacionais padronizadas pelo Comitê Internacional de Padronização em Hematologia Cálculos São realizados pelo equipamento 3
4 12. Bibliografia Bain, Barbara J. Células sangüíneas: um guia prático. 2.ed. Porto Alegre: Artes Médicas, 2002 Manual do usuário do equipamento Sysmex XN Anexos Anexo 01 Confecção de distensões sanguíneas Anexo 02 Preparo de Corante Eosina Azul de Metileno Segundo Leishmann Anexo 03 Coloração de lâminas de hematologia. 4
5 Anexo-01 Confecção de distensões sanguíneas Importante na avaliação hematológica, a confiabilidade das informações obtidas com o exame do esfregaço sangüíneo depende principalmente de distensões bem feitas e devidamente coradas. Técnica: 1. Colocar uma gota (2 a 3 mm de diâmetro) de sangue devidamente homogeneizado (com pipeta ou capilar descartável) no final de uma lâmina fosca (identificada com o número e/ou nome da amostra) para microscopia limpa, seca e isenta de pó e gordura e apoiada em uma superfície plana (bancada de trabalho); 2. Com o polegar e o indicador segurar a extremidade da lâmina extensora com ângulo de 30 a 45 graus em frente a gota de sangue na lâmina descrita acima; 3. Puxar a lâmina extensora para trás até entrar em contato com a gota de sangue. Deixar o sangue espalhar-se e completar o ângulo formado entre as duas lâminas; 4. Empurrar a lâmina extensora para frente a uma velocidade moderada e constante, até que a gota de sangue tenha sido espalhada em um filme moderadamente delgado. Observar para que o ângulo entre as lâminas seja mantido igual em todo o processo; 5. Secar a distensão ao ar por agitação ou ao natural; 6. Limpar a lâmina extensora utilizando uma gaze embebida em solução fisiológica. 7. Repetir o processo para todos os hemogramas solicitados. 5
6 Interpretação: A boa distensão deve ter uma porção espessa e uma porção delgada (cauda), com uma área de transição gradual de uma parte à outra. Deve possuir aparência regular, uniforme e ser livre de estrias, ondas ou buracos. As bordas devem ser livres. A espessura da distensão pode ser ajustada alterandose o ângulo da lâmina distensora, a velocidade utilizada no espalhamento da gota de sangue ou o tamanho da gota. Para uma distensão mais espessa: ângulo, velocidade e gota maiores. Para uma distensão mais delgada: ângulo, velocidade e gota menores. Nas distensões de espessura ótima ocorre uma distribuição uniforme e separação das células sanguíneas em direção a cauda. Quanto mais rápido o filme de sangue for secado ao ar, melhor é a distribuição individual das células na lâmina. A secagem lenta resulta em concentração de artefatos. Anexo 02 Preparo de Corante Eosina Azul de Metileno Segundo Leishmann Todos os materiais necessários para confecção do corante são guardados embaixo da pia no setor de hematologia. 1. Pesar 2g de corante (para cada litro de metanol), utilizando a balança localizada no setor de microbiologia; 2. Macerar o corante, em gral de porcelana, com o auxílio de um pistilo; 3. Em um galão branco vazio, específico para produção de corante, verter um pouco de Metanol (mais ou menos um dedo) e reservar o restante; 4. No mesmo galão, verter o pó macerado, com o auxílio de uma espátula de madeira; 6
7 5. Lavar o gral aos poucos com o que sobrou do metanol, vertendo o líquido para o galão; 6. Homogeneizar bem o galão contendo o corante; 7. Com o auxílio de um funil, verter todo o restante do corante para o frasco vazio de Metanol, onde o mesmo ficará armazenado. 8. Identificar com data e nome do responsável pela fabricação. Anexo 03 Coloração de lâminas de hematologia 1. Após a secagem total da lâmina, colocar no suporte de coloração que fica na pia de coloração da hematologia. Cobrir a lâmina com uma camada de corante de Leishmann e deixar agir por 2 minutos; 2. Em seguida, colocar por cima do corante (tentando homogeneizar o melhor possível) água de injeção (que também fica na bancada da pia de coloração) e deixar agir por mais 4 minutos; 3. Passado o tempo, enxaguar com água da torneira, vertendo-a sobre a lâmina; 4. Limpar a parte traseira da lâmina com uma gaze ou compressa úmida e secar a lâmina para a leitura (ao natural ou com secador à pelo menos 10cm de distância). Revisado por Data da revisão Alterações Próxima revisão Dezembro/2017 7
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