O milho (Zea mays) é um cereal da família Graminaceae originária do continente americano e atualmente cultivada em quase todo o mundo.

Transcrição

1 MICROPROPAGAÇÃO CULTIVO IN VITRO DE EMBRIÕES DE MILHO O milh (Zea mays) é um cereal da família Graminaceae riginária d cntinente american e atualmente cultivada em quase td mund. Cm em tdas as mnctiledôneas ctilédne tem cm funçã a transferência ds nutrientes d endsperma à plântula em desenvlviment. N cultiv in vitr mei nutriente substitui endsperma, já que embriã é retirad junt cm ctilédne (Figura 1). Em Bitecnlgia vegetal, esta mdalidade de cultiv in vitr permite resgatar embriões híbrids, resultantes de cruzaments incmpatíveis. Também se utiliza para quebrar a drmência das sementes, encurtand assim cicl de vida de algumas plantas. Trata-se de um bm mdel para s estuds fisilógics ligads à germinaçã da semente e a desenvlviment das plântulas. Assim cm utrs órgãs das plantas, s embriões pdem ser cultivads em um mei nutriente cntend água, sais minerais, açúcar e ágar.

2 Figura 1: O grã de milh A. Estrutura d grã Pericarp Endsperma Embriã Ctilédne B. Retirada d embriã BIBLIOGRAFIA T. T. FURTADO, FONSECA DA SILVA V.C. e MANN V.S. Cultiv de embriões de milh. Trabalh de finalizaçã d curs médi técnic de Bitecnlgia d Institut de Tecnlgia ORT d Ri de Janeir, MALAJOVICH M.A. e MANN V.S. Micrprpagaçã. Guia 80: Micrprpagaçã n labratóri de ensin; Guia 85: A desinfecçã ds instruments; Guia90: A desinfecçã ds explantes e Guia 96: Os meis de cultiv. Vide: Extraçã e semeadura d embriã de milh. MY AGRICULTURE INFORMATION BANK SHOESTRING BIOTECHNOLOGY. Natinal Assciatin f Bilgy Teachers

3 ATIVIDADE PRÁTICA OBJETIVO Cultivar embriões de milh, in vitr. MATERIAIS 1 pedaç de espiga de milh, tubs de ensai cm mei nutriente* estéril, 1 faca u 1 bisturi, palits estéreis, água sanitária diluída à metade, 3 frascs de água destilada estéril, álcl 96 0, álcl 70 0, bic de Bunsen (pcinal). * O mei nutriente (Murashige&Skg, Taji u Knp) é uma sluçã de sais minerais às quais se adicina sacarse (1 a 5%), ágar (0,7%) e água de cc, cm indicad ns Guias 111: Micrprpagaçã: meis clássics e 112: Micrprpagaçã: meis alternativs. PROCEDIMENTO A limpeza d lugar de trabalh é fundamental, assim cm a higiene das mãs. O lugar de trabalh será desinfetad cm álcl Os participantes lavarã muit bem as mãs e s antebraçs cm água e sabã, antes de passar álcl Cuidad! O álcl é inflamável. Esterilizar material cntaminad antes de descarta-l. 1. Desinfecçã ds explantes Separar cm uma faca s grãs de milh.

4 Desinfetar s grãs cm a sluçã de água sanitária (15 minuts), agitand suavemente. Lavar s grãs três vezes cm água destilada estéril (1, 3 e 5 minuts) 2. Extraçã d embriã Pert d bic de Bunsen acess e cm muit cuidad, pressinar suavemente grã de milh para facilitar a saída d embriã. Clher embriã cm um palit estéril (Participante A). O prcediment pde ser vist n víde Extraçã e semeadura d embriã de milh. 3. Semeadura d embriã Abrir tub de ensai cntend mei de cultiv estéril e flambar a bca d tub (Participante B). Deixar cair embriã dentr d tub (Participante A). Flambar nvamente a bca d tub e fecha-l (Participante B). A seguir, verificar que embriã se encntre em cntat cm mei. Se nã fr assim, agitar suavemente tub de md a acmdar embriã n mei. 4. Incubaçã Na luz, a temperatura ambiente. 5. Estabeleciment da cultura Acmpanhar semanalmente medind a altura (mm) d epicótil.

5 NOSSO COMENTÁRIO Este prtcl está basead n trabalh de cnclusã d Curs Médi Técnic de Bitecnlgia de Tassia Trres Furtad, Vania Carlina Fnseca da Silva e Vítr Sares Mann intitulad Cultiv de embriões de milh, desenvlvid em 2002 n Institut de Tecnlgia ORT d Ri de Janeir. Os autres nã encntraram dificuldades n acmpanhament d cresciment d embriã (Figura 2). Eles trabalharam cm dis meis alternativs, mei básic Taji e mei de cc. Os resultads pdem ser apreciads n gráfic 1, mstrand que s embriões de milh se desenvlveram melhr n mei básic Taji que n mei de cc. O mei Taji parece ter esgtad mais tarde (3 semanas) que mei de cc (2 semanas). Em repetições psterires desta atividade, desinfetams s grãs de milh cm álcl e cm Clr-in 10 sem que fsse bservad um aument significativ das cntaminações. COMO MONTAR UM PROJETO Alterar a cmpsiçã d mei de cultiv Pesquisar cresciment in vitr de embriões de utras mnctiledôneas.

6 Figura 2: Desenvlviment in vitr d embriã de milh. Primeira Flha Cleóptil Raízes adventícias Raiz principal

7 Gráfic 1: Cresciment ds epicótils de plântulas de milh, desenvlvidas a partir de embriões cultivads em dis meis alternativs (T. Trres Furtad, V.C. Fnseca da Silva e V. Sares Mann, Institut de Tecnlgia ORT d Ri de Janeir, 2002)