MICROPROPAGAÇÃO A DESINFECÇÃO DOS EXPLANTES
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- Melissa Palma Brandt
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1 MICRPRPAGAÇÃ A DESINFECÇÃ DS EXPLANTES Cm bservad n Guia 80: Micrprpagaçã n labratóri de ensin, um ds passs mais crítics nas técnicas de cultiv in vitr é a desinfecçã ds explantes, que cmeça cm um bm lavad em água e sabã u detergente. Uma vez explante bem limp prcede-se à desinfecçã cm agentes químics. s mais ecnômics e simples de usar sã álcl 70 0 e hipclrit de sódi, vendid cmercialmente cm água sanitária n Brasil, lavandina na Argentina e água jan n Chile e utrs países latin-americans. Uma imersã de 1 a 2 minuts em álcl 70 0 permite eliminar blhas de ar e disslver a camada epicuticular ds explantes, mas nã garante a esterilizaçã d explante. Essa é a funçã da água sanitária. Em muits países a cncentraçã de matéria ativa (NaCl) da água sanitária é de 5%, e s prtcls crrespndentes recmendam utilizar diluições de 10 a 20% (v/v). N Brasil, nde a legislaçã determina que ter de matéria ativa (NaCl) da água sanitária seja de 1,5 a 2%, a diluiçã equivalente para a desinfecçã d explante está entre 25 e 50% Nós preferims fixar em 50% a cncentraçã da sluçã desinfetante de água sanitária e mdificar temp de imersã em funçã d tip de explante. Cm medida adicinal a sluçã desinfetante é preparada em um frasc estéril. Vale a pena destacar que uma desinfecçã externa bem sucedida nã elimina as cntaminações internas, que pdem aparecer dias mais tarde de semead explante. Uma vez desinfetad explante, retira-se hipclrit em três lavads sucessivs cm água destilada estéril. A duraçã ds lavads é de 1, 3 e 5 minuts, send que n últim lavad explante pde permanecer mais temp. Para lavad existem duas técnicas, send que a esclha depende d tamanh e d númer de explantes a esterilizar. A primeira é retirar material e transferi-l as recipientes cm água destilada estéril, um prcediment prátic se númer de explantes fr pequen (Figura 1). A segunda é abrir ligeiramente frasc para descartar líquid, derramand cnteúd na pia u em um balde de descarte (Figura 2). Antes e depis deste prcediment recmenda-se limpar cuidadsamente a tampa e exterir d frasc cm álcl. Esta última é nssa preferida.
2 MICRPRPAGAÇÃ / A DESINFECÇÃ DS EXPLANTES Se fr necessári crtar material u eliminar as partes queimadas pel hipclrit de sódi, prever a esterilizaçã ds instruments e de uma caixa de Petri cntend uma flha de papel talha, nde será realizada dissecçã. Figura 1: Técnica para desinfetar s explantes. A. Material Pinça Três recipientes u placas de Petri cm água destilada estéril Recipiente cm sluçã desinfetante Explantes B. Prcediment Primeir lavad (1 minut) Segund lavad (3 minuts) Terceir lavad (5 minuts) Explantes limps
3 MICRPRPAGAÇÃ / A DESINFECÇÃ DS EXPLANTES Figura 2: utra técnica para desinfetar s explantes. A - Material Frasc estéril para a sluçã desinfetante 3 frascs cm água destilada estéril Recipiente de descarte Explantes bservaçã: Durante prcediment, limpar cuidadsamente as brdas da tampa e exterir ds frascs cm álcl antes de transferir s líquids. Esta medida reduz ntavelmente númer de cntaminações B Prcediment Esterilizar s explantes na sluçã de água sanitária, descartar líquid e acrescentar água destilada estéril para primeir lavad.
4 MICRPRPAGAÇÃ / A DESINFECÇÃ DS EXPLANTES Primeir lavad (1 minut) acrescentar água destilada estéril para segund lavad Segund lavad (3 minuts) acrescentar água destilada estéril para terceir lavad Terceir lavad (5 minuts) inverter frasc para que s explantes fiquem na tampa s explantes estã prnts para a semeadura
5 MICRPRPAGAÇÃ / A DESINFECÇÃ DS EXPLANTES NSS CMENTÁRI A preparaçã de numerss frascs de água destilada estéril cnsme muit temp, de md que tentams substitui-la ns lavads pr uma sluçã de Clrin 10 (Diclr-S-Triazinetine de Sódi u NaDCC), um prdut vendid n cmerci lcal para desinfetar utensílis e legumes, na cncentraçã e temp indicads pel fabricante. Clr-in pde ser preparad na hra e nã precisa de enxague. mair incnveniente é que material fica um puc grudent, e iss pde dificultar a transferência ds explantes cm a pinça as tubs de ensai. Em funçã de nssa experiência, vale a pena ressaltar que s testes de desinfecçã ds explantes só cm Clr-in 10, sem utilizar água sanitária, só dã resultads aceitáveis quand mei de cultiv nã cntém sacarse. Para diminuir as cntaminações bacterianas e fúngicas, alguns autres recmendam adicinar NaDCC u de Nipagin (metilparaben) n mei de cultiv já esterilizad. Cntud, nã achams infrmações claras sbre as cncentrações utilizadas e preferims testar us desses prduts n lavad ds explantes.
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