Controle de oxidação no cultivo in vitro de embriões de estrelícia (Strelitzia reginae ) (1,2)

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1 ARTIGO CIENTÍFICO Controle de oxidção no cultivo in vitro de emriões de estrelíci (Strelitzi regine ) (1,2) PATRÍCIA DUARTE DE OLIVEIRA PAIVA (3), RENATO PAIVA (4), MOACIR PASQUAL (4) RESUMO A propgção de estrelíci (Strelitzi regine Ait.) é comumente relizd prtir d divisão de touceirs ou por sementes. As sementes possuem germinção lent, lém de dormênci. O desenvolvimento dest plnt é lento e, conseqüentemente, produção de novs muds tmém é demord. Em conseqüênci, produção de muds produzids por plnt mtriz é ix, indicndo-se o cultivo in vitro pr reprodução dess espécie com eficiênci. No entnto, durnte o cultivo in vitro de estrelíci tem sido oservd oxidção nos explntes e no meio de cultur, ocsionndo dnos nos mesmos. Ojetivou-se então testr o efeito de ntioxidntes suplementdos o meio de cultur. Utilizrmse crvão tivdo, PVP (Polivinilpirrolidon), cisteín, ácido scórico, ácido cítrico, lém dos solidificntes do meio de cultur: grose, ágr, Phytgel e ind, exclusão dos nutrientes core e ferro do meio de cultur. Melhor controle de oxidção foi oservdo em emriões cultivdos em meios de cultur crescido de 2 g L -1 de crvão tivdo ou solidificdo com phytgel. Plvrs-chve: germinção de emriões, oxidção, Strelitzi, floricultur ABSTRACT Oxidtion control in the in vitro culture of strelitzi (Strelitzi regine ) The propgtion of strelitzi (Strelitzi regine Ait) is otined through sprout division or seeds. The seeds present slow germintion nd dormncy. Since the development of this plnt is slow, its production nd propgtion re lso delyed esides the reduced numer of otined plnts. By using tissue culture techniques it is possile to propgte the species lthough explnt nd culture medium oxidtion hs een oserved. The ojective of this work ws to test chemicl compounds dded to the culture medium to control the oxidtion process. Activted chrcol, PVP (polyvinylpyrrolidone), cysteine, scoric cid, citric cid were dded to the culture medium nd different gelling sustnces such s grose, gr nd Phytgel nd the exclusion of iron nd cupper from the culture medium were tested. Control of oxidtion process ws oserved cultivting emryos in medium contining 2 g L -1 ctivted chrcol or solidified with phytgel. Key words: emryo germintion, oxidtion, Strelitzi, floriculture 1. INTRODUÇÃO A estrelíci (Strelitzi regine Ait.) é um plnt ornmentl de expressivo vlor comercil e su produção despert especil interesse no mercdo externo. A técnic de micropropgção é um importnte lterntiv pr propgção dess espécie, que tem lento desenvolvimento ds plnts oriunds de sementes e pequeno número de muds formds por divisão de touceirs. No seu processo de cultivo in vitro, no entnto, ocorre oxidção dos explntes e do meio de cultur. Em lgums plnts, lierção de exsudtos constitui um dos miores prolems pr o cultivo in vitro (QUERALT et l., 1991). A vrição de intensidde de oxidção, no entnto, pode ser inerente às diferentes espécies ou vrieddes. Em sorgo, por exemplo, diferentes cultivres têm vrições de tolerânci à oxidção e de colorção dos pigmentos lierdos (CAI e BUTLER, 199). Um dos trlhos pioneiros de cultivo de estrelíci in vitro foi o ZIV E HALEV (1983), porém, não há nenhum registro de controle de oxidção. Pr prevenir ocorrênci de oxidção, GEORGE (1996) recomend minimizr os dnos cusdos o explnte por meio d remoção de compostos fenólicos produzidos e de lterções n composição do meio de cultur. A remoção dos compostos pode ser relizd trvés d utilizção de meios líquidos, de diferentes gentes solidificntes, ou de sustâncis de dsorção. (1) Receido pr pulicção em 8/6/6 e ceito em 13/8/7. (2) Projeto finncido pel FAPEMIG. (3) Deprtmento de Agricultur, Universidde Federl de Lvrs (UFLA), Lvrs (MG), 372-, Brsil. pdolivei@ufl.r, olsist CNPq. (4) Deprtmento de Biologi, UFLA, olsist CNPq. Revist Brsileir de Horticultur Ornmentl

2 18 PATRÍCIA DUARTE DE OLIVEIRA PAIVA, RENATO PAIVA E MOACIR PASQUAL Pr o controle d oxidção, diversos produtos podem ser diciondos o meio de cultur, como cistein, crvão tivdo, polivinilpirrolidon (PVP), ácido scórico, ou ácido cítrico. Muits desss sustâncis gem dsorvendo os exsudtos lierdos pelos explntes, os quis cusm oxidção (JARRET et l., 1985; GEORGE, 1996). Outrs modificções n composição dos meios de cultur tmém podem ser eficientes pr controle d oxidção como vrições n concentrção dos sis do meio MS, exclusão ou diminuição de ferro e core e vrições em tipo e níveis de reguldores de crescimento (JARRET et l., 1985). Ojetivou-se neste trlho vlir o efeito d dição o meio de cultur de sustâncis ntioxidntes e solidificntes pr controlr o processo de oxidção ocorrente no cultivo in vitro de emriões de estrelíci. 2. MATERIAL E MÉTODOS Frutos mduros (ntes d deiscênci) de estrelíci form coletdos de plnts cultivds no Viveiro de Plnts Ornmentis d Universidde Federl de Lvrs, Lvrs (MG). Os frutos form levdos pr o lortório onde form ertos e procedeu-se retird ds sementes. Ests form limps, eliminndo-se o rilo e desinfestds em solução de hipoclorito de sódio (produto comercil) 3% (cloro tivo: 2%) por 15 minutos, sendo posteriormente lvds em águ destild utoclvd. Os emriões form extrídos e inoculdos em meio de cultur meio MS (MURASHIGE e SKOOG, 1962) solidificdo com 7 g L -1 de ágr e crescido de 3 g L -1 de scrose, com ph justdo em 5,8, suplementdo com gentes nti-oxidntes. O mteril foi mntido em sl de crescimento com tempertur de 26+1 o C e fotoperíodo de 16 hors, por 3 dis. Os experimentos com gentes ntioxidntes consistirm de:. Experimento 1: Crvão tivdo ns concentrções (controle);,5; 1; 2; 4; 6; 8 e 1 g L -1. Experimento 2: Ácido cítrico (, 1, 15 e 2 mg L -1 ) e ácido scórico (, 5, 1 e 15 mg L -1 ), em tods s cominções possíveis, perfzendo um ftoril 2x2. c. Experimento 3: Cisteín ns concentrções: (controle), 4, 8, 12, 16, 2 e 24 mg L -1. d. Experimento 4: PVP (polivinilpirrolidon 4) ns concentrções: (controle), 5, 1, 2, 4, 6, 8 e 1 mg L -1. Num quinto experimento testou-se o comportmento dos emriões cultivdos em meio líquido e meios com diferentes solidificntes. No primeiro trtmento, os emriões form colocdos em meio MS líquido utilizndo ponte de Heller pr sustentção dos mesmos. Pr vlição de solidificção dos meios utilizrm-se como trtmentos: 3,5 mg L -1 ou 7, g L -1 (controle) de ágr; 4 g L -1 grose ou 6 g L -1 Phytgel (produto comercil à se de ágr de lgs mrc Sigm). Revist Brsileir de Horticultur Ornmentl Testou-se tmém o efeito d exclusão de ferro e de core do meio de cultur, o que constituiu o experimento 6: o meio ásico utilizdo foi o MS, sendo os trtmentos constituídos de meio MS completo (controle); meio MS sem Fe-EDTA, meio MS sem CuSO 4. 7H 2 O, meio MS sem Fe-EDTA e CuSO 4. 7H 2 O. Os meios desse experimento form solidificdos com 7 g L -1 de ágr e crescidos de 3 g L -1 de scrose, tendo o ph justdo em 5,8. Todos os experimentos form instldos em delinemento inteirmente csulizdo, com 8 repetições, constituíds por um tuo por prcel contendo um emrião. Cd experimento foi nlisdo individulmente. Após 3 dis, efeturm-se s vlições, oservndo-se ocorrênci de oxidção prtir d colorção do meio de cultur e do emrião. Pr vlição d oxidção form triuíds nots em função do grdiente d intensidde de colorção ocorrid no meio de cultur, segundo escl: Ausênci de oxidção no meio de cultur; 1 1/3 do meio de cultur escurecido (com oxidção); 2 2/3 do meio de cultur escurecido e 3 Meio de cultur totlmente escurecido (O escurecimento do meio ocsiondo pelo processo de oxidção já foi registrdo por GEORGE, 1996). Pr nálise esttístic, utilizou-se o método não-prmétrico. Pr os vlores qulittivos relizou-se o teste de Kruskl-Wllis (CAMPOS, 1983). Assim, justrm-se modelos de regressão liner simples, com coeficiente de regressão testdo conforme o teste de Theil. Os desvios de regressão form sumetidos o teste de Kruskl-Wllis (5%), pr testr significânci, firmndo ser o modelo justdo proprido (HOLLANDER e WOLFE, 1973). 3. RESULTADOS E DISCUSSÃO Oservou-se que vrições significtivs no desenvolvimento ds plântuls (tmnho de rotos e de riz) ocorrerm pens em função dos diferentes solidificntes do meio de cultur utilizdos. Diferençs significtivs no controle d oxidção form oservds qundo se utilizou PVP, crvão tivdo, solidificntes diferentes ou pel exclusão de nutrientes mineris do meio de cultur. O uso de cisteín e ácido scórico em cominção com ácido cítrico, ns concentrções testds, não proporcionou efeito sore o controle de oxidção. As concentrções de crvão tivdo testds promoverm vrições significtivs no controle do processo de oxidção, efeito esse já sugerido por GEORGE (1996). Oservou-se um tendênci de diminuição d ocorrênci de oxidção à medid em que form umentds s concentrções de crvão tivdo, prtir de 2, g L -1. O escurecimento ocorreu em mior intensidde em meios com concentrções mis ixs de crvão (,5 1, g L -1 ) ou n usênci dess sustânci. A dição de PVP o meio de cultur, em tods s concentrções testds, não fetou o desenvolvimento dos emriões, principlmente em concentrções mis elevds (superiores 6 mg L -1 ) s quis não cusrm toxidez (nenhum sintom de dno ns

3 CONTROLE DE OXIDAÇÃO NO CULTIVO IN VITRO DE EMBRIÕES DE ESTRELÍCIA (STRELITZIA REGINAE) 19 plnts foi oservdo). Oserv-se n Figur 1 que o PVP não foi eficiente pr o controle d oxidção, pesr de su mior efetividde já comprovd em outrs culturs (FRIDBORG e ERIKSSON, 1965; ANAGNOSTAKIS, 1974; FRIDBORG et l., 1978; TISSERAT, 1979; TAKAYAMA e MISAWA, 198; BON et l., 1988; GUERRA e HANDRO, 1988) e tmém em estrelíci (ZIV e HALEVY, 1983). Foi oservd ind um tendênci de ocorrênci de oxidção em mior intensidde qundo os emriões form cultivdos em concentrções mis elevds de PVP (Figur 1). A utilizção de diferentes solidificntes no meio de cultur teve efeito tnto no desenvolvimento dos explntes qunto no controle de oxidção. Em meio líquido ou solidificdo com 3,5 g L -1 de ágr ou Phytgel, os emriões tiverm menor desenvolvimento d prte ére em relção os outros trtmentos (Figur 2). A utilizção de ágr (7 g L -1 ), grose ou Phytgel promoveu formção de rotos em tmnhos esttisticmente iguis, ms superiores os otidos nos outros trtmentos (Figur 2). No meio solidificdo com grose, os rotos chegrm o tmnho médio de 3,18 cm com mplitude vrindo de 3, 8,5 cm os 3 dis. SZABADOS et l. (1991) tmém oservrm que plnts de mndioc e rroz umentrm significtivmente o crescimento qundo cultivdos em meios solidificdos com grose e gelrite em comprção com o cultivo em meios solidificdos com ágr. O número de rízes formds no meio líquido foi menor do que nos emriões cultivdos em meios sólidos. Porém, rízes de mior comprimento (mior que 1,5 cm) form otids em emriões cultivdos nos meios solidificdos com ágr em relção os meios de grose ou Phytgel (Figur 3). O uso de meio líquido fetou tnto o desenvolvimento de prte áre qunto de rízes, sendo esses formdos em menor tmnho (1,7 e,8 cm, respectivmente). O uso de grose proporcionou formção de rotos com mior tmnho (3,1 cm) e rízes com tmnho (1,1 cm) reduzido em comprção àquels formds em meios com ágr. A oxidção foi significtivmente reduzid no meio solidificdo com grose e não ocorreu em meio solidificdo com Phytgel (Figur 4), possivelmente devido o fto destes serem produtos mis puros em relção o ágr, não presentndo elementos químicos que fvorecem oxidção conforme já sugerido por FINCH et l. (1992). Oxidção em mior intensidde (cim de,8 segundo escl de vlição utilizd) foi oservd em meios líquidos e nos solidificdos com ágr. Tmém se oservou que utilizção de meios líquidos ou semi-sólidos (3,5 g L -1 de ágr) não foi stisftóri pr o desenvolvimento dos emriões. Em meio líquido, prte ére, possivelmente devido à posição de fixção do emrião, tendeu desenvolver-se internmente à ponte de Heller, produzindo lgums plântuls deformds. Além disso, esse meio, ssim como o meio semi-sólido não foi eficiente pr o controle ou redução do processo de oxidção como er esperdo, pois, conforme GEORGE (1996), os meios líquidos, por permitirem mior difusão dos exsudtos, são fvoráveis pr reduzir os efeitos prejudiciis d oxidção, pois evitm que s sustâncis lierds permneçm junto o explnte, cusndo toxicidez. A ocorrênci de oxidção foi iniid nos meios cujos solidificntes utilizdos form o Phytgel e grose. Estes gentes, conforme GEORGE (1996), possuem mior purez, não ocorrendo em sus constituições outros elementos químicos ou compostos fenólicos n su composição como é o cso do ágr (DEBERGH, 1983). Oservou-se que o desenvolvimento d prte ére de explntes de estrelíci cultivdos em meio solidificdo com Phytgel, foi ligeirmente inferior o dos explntes solidificdos em meios com grose ou com 7 g L -1 de ágr. As plnts, no entnto, depois de trnsferids pr meio solidificdo com Phytgel não oxidrm, demonstrndo eficiênci desse produto pr controle d oxidção. A exclusão do nutriente core do meio de cultur promoveu vrições no controle do processo oxidtivo. Meios sem esse elemento, conforme se visuliz n Figur 5, tiverm oxidção em vlores significtivmente inferiores em relção os outros meios testdos. A exclusão de ferro, mesmo ssocido à exclusão de core, não provocou lterção no processo e os resultdos comprrm-se à testemunh - meio MS contendo mos os nutrientes. A exclusão desses nutrientes não lterou o desenvolvimento dos explntes. 4. CONCLUSÕES Ns condições em que os trlhos form relizdos conclui-se que: - Pr controle d oxidção no cultivo in vitro de estrelíci, mior eficiênci é oservd com dição de 2 g L -1 crvão tivdo ou com o uso de Phytgel pr solidificção do meio de cultur. - O uso de grose, pesr de não controlr oxidção, reduz su ocorrênci. - A utilizção dos produtos PVP, cisteín, ácido cítrico, ácido scórico, não é eficiente pr controlr oxidção em cultivo in vitro de emriões de estrelíci. - A exclusão de core do meio de cultur proporcionou redução no processo de oxidção e não fetou o desenvolvimento dos explntes. REFERÊNCIAS ANAGNOSTAKIS, S.L. Hploid plnts from nthers of tocco - Enhncement with chrcol. Plnt, Berlin, v.115, p , BON, M.C.; GENDRAUD, M.; FRANCLET, A. Roles of phenolic compounds on micropropgtion of juvenile nd nture clones of Sequoidendron gignteum: influence of ctivted chrcol. Scienti Horticulture, Amsterdm v.34, n.3-4, p , CAI, T.; BUTLER, L. Plnt regenertion form emryogenic cllus initited from immture inflorescences of severl Revist Brsileir de Horticultur Ornmentl

4 11 PATRÍCIA DUARTE DE OLIVEIRA PAIVA, RENATO PAIVA E MOACIR PASQUAL high-tnnin sorghums. Plnt Cell nd Orgn Culture, Dordrecht, v.2. p CAMPOS, H.de Esttístic experimentl não-prmétric, 4. ed. Pircic: ESALQ-USP, p. DEBERGH, P.C. Effects of gr rnd nd concentrtion on the tissue culture medium. Physiologi Plntrum, Copenhgen, v.59, p , FINCH, R.P.; BASET, A.; SLAMET, I.H.; COCKING, E.G. In vitro shoot culture of wild Oryz nd othergrss species. Plnt Cell, Tissue nd Orgn Culture, Dordrecht, v.3, p.31-39, FRIDBORG, G.e ERIKSSOM. T. Effects of ctivted chrcol on growth nd morphogenesis in cell cultures. Physiologi Plntrum, Copenhgen, v.34, p.36-38, FRIDBORG, G.; PEDERSON, M.; LANDSTROM, L.E.; ERIKSSOM. T. The effect of ctivted chrcol on tissue cultures: dsorption of metolites, inhiition of morphogenesis. Physiologi Plntrum, Copenhgen, v.43, p.14-16, GEORGE, E.F. Plnt propgtion y tissue culture, prt 1 The Technology, 2 nd. ed. Edington: Exegetics Limited, 1996, 1574 p. GEORGE, E.F. Plnt propgtion y tissue culture, prt 2 - In Prctice, 2 nd. ed. Edington: Exegetics Limited, 1996, 1361p. GUERRA, M.P.; HANDRO, W. Somtic emryogenesis nd plnt regenertion in emryo cultures of Euterpe edulis Mrt (Plme). Plnt Cell Reports, Bltimore, v.7, p , HOLLANDER, M.e WOLFE, D.A. Nonprmetric sttisticl methods. New York: John Wiley e Sons, p. JARRET, R.L.; RODRIGUEZ, W.; FRENANDEZ, R. Evlution, tissue culture propgtion nd dissemintion of S nd Pelipit plntins in Cost Ric. Scienti Horticulture, Amsterdm, v.25, p , MURASHIGE, T.; SKOOG,F. A revised medium for rpid growth nd iossys with tocco tissue cultures. Physiologi Plntrum, Copenhgen, v.15, p , QUERALT, M.C.; BERUTO, M.; VANDERSCHAEGHE, A.; DEBERGH, P.C. Ornmentls. In: DEBERGH, P.C.; ZIMMERMAN, R.H., (Eds.) Micropropgtion Technology nd Appliction. Dordrecht, Kluwer: Acdemic Pulishers, p SZABADOS, L.; NÚÑUZ, V.M.; TELLO, L.M.; MAFLA, G.; ROA, J.; ROCA, W.M. Agentes geltinizdores em el cultivo de tejidos. In: ROCA, W.H.; MROGINSKI, L.A., (Eds.) Cultivo de tejidos em l gricultur Fundmentos y plicciones. Cli: CIAT, 1991.p TAKAYAMA, S. e MISAWA, M. Differentition in Lilium ul scles in vitro. Effects of ctivted chrcol, physiologicl ge of uls nd sucrose concentrtion on differentition nd scle lef formtion in vitro. Physiologi Plntrum, Copenhgen, n.48, p , 198. TISSERAT, B. Propgtion of dte plm (Phoenix dctylifer L.) in vitro. Journl of Experimentl Botny, Lncster, v.3, n.19, p , ZIV, M.; HALEVY, A.H. Control of oxidtive rowning nd in vitro propgtion of Strelitzi regine. HortScience, Alexndri, v.18, n.4, p , Y =,8861 +,667x 1,5 Oxidção 1, Figur 1. Efeito de PVP e ocorrênci de oxidção no cultivo in vitro de emriões de estrelíci. (Critério de nots pr ocorrênci de oxidção: Ausênci de oxidção no meio de cultur; 1 1/3 do meio de cultur escurecido; 2 2/3 do meio de cultur escurecido e 3 Meio de cultur totlmente escurecido). Figure 1. Effect of PVP nd occurrence of oxidtion on the in vitro culture of strelitzi emryos (Grdes criteri for the occurrence of oxidtion: culture medium with sence of oxidtion; 1 culture medium with 1/3 drkness; 2 - culture medium with 2/3 Ágr 7, Ágr 3,5 Líquido Agrose Phytgel drkness nd 3 - culture medium totlly drk). Revist Brsileir de Horticultur Ornmentl

5 CONTROLE DE OXIDAÇÃO NO CULTIVO IN VITRO DE EMBRIÕES DE ESTRELÍCIA (STRELITZIA REGINAE) 111 Altur médi de rotos (cm) 3,5 3 2,5 2 1,5 1,5 Ágr 7, Ágr 3,5 Líquido Agrose Phytgel Tipos de solidificnte Figur 2. Altur (cm) médi de rotos formdos em emriões de estrelíci cultivdos em meios de cultur solidificdos com ágr, grose, phytgel, ou em meio líquido, pós 3 dis de cultivo. Médis seguids de mesm letr não diferem entre si pelo teste de Kruskl-Wllis (o nível de 5%). Figure 2. Averge height (cm) of shoots formed in strelitzi emryos cultivted in culture medium solidified with gr, grose, phytgel or cultivted in liquid medium during 3 dys of culture. Mens followed y the sme letter showed no differences using the Kruskl-Wllis test (t 5% level). Altur médi de rízes (cm) 3,5 3 2,5 2 1,5 1,5 Ágr 7, Ágr 3,5 Líquido Agrose Phytgel Tipos de solidificnte Figur 3. Comprimento médio (cm) ds rízes formds em emriões de estrelíci cultivdos em meios de cultur com ágr, grose, phytgel, ou em meio líquido, pós 3 dis de cultivo. Médis seguids de mesm letr não diferem entre si pelo teste de Kruskl- Wllis o nível de 5%. Figure 3. Averge length (cm) of roots formed in strelitzi emryos cultivted in culture medium solidified with gr, grose, phytgel or cultivted in liquid medium during 3 dys of culture. Mens followed y the sme letter showed no differences using the Kruskl-Wllis test (t 5% level). c Oxidção 1,6 1,4 1,2 1,,8,6,4,2 c Ágr 7, Ágr 3,5 Líquido Agrose Phytgel Tipos de solidificnte Figur 4. Oxidção ocorrid em meios de cultur solidificdos com ágr, grose, phytgel, ou em meio líquido, pós 3 dis, em cultivo de emriões de estrelíci. Médis seguids de mesm letr não diferem entre si pelo teste de Kruskl-Wllis o nível de 5%. (Critério de nots pr ocorrênci de oxidção: Ausênci de oxidção no meio de cultur; 1 1/3 do meio de cultur; 2 2/3 do meio de cultur e 3 Meio de cultur totlmente escurecido). Figure 4. Oxidtion in culture medium solidified with gr, grose, phytgel or in liquid medium, fter 3 dys, of strelitzi emryo culture. Mens followed y the sme letter showed no differences using the Kruskl-Wllis test t 5% level. (Grdes criteri for the occurrence of oxidtion: culture medium with sence of oxidtion; 1 culture medium with 1/3 drkness; 2 - culture medium with 2/3 drkness nd 3 - culture medium totlly drk). Revist Brsileir de Horticultur Ornmentl

6 112 PATRÍCIA DUARTE DE OLIVEIRA PAIVA, RENATO PAIVA E MOACIR PASQUAL Oxidção 1,4 1,2 1,,8,6,4,2 MS MS-Cu MS-Fe MS-(Cu e Fe) Tipos de solidificnte Figur 5. Efeito d exclusão dos nutrientes ferro (Fe) e core (Cu) do meio de cultur MS sore o controle de oxidção em cultivo in vitro de emriões de estrelíci, pós 3 dis. Médis seguids de mesm letr não diferem entre si pelo teste de Kruskl-Wllis o nível de 5%.(Critério de nots pr ocorrênci de oxidção: Ausênci de oxidção no meio de cultur; 1 1/3 do meio de cultur escurecido; 2 2/3 do meio de cultur escurecido e 3 Meio de cultur totlmente escurecido). Figure 5. Effect of the exclusion of iron (Fe) nd cupper (Cu) nutrients from the MS culture medium on the control of oxidtion fter 3 dys of in vitro culture of strelitzi emryos. Mens followed y the sme letter showed no differences using the Kruskl-Wllis test t 5% level. (Grdes criteri for the occurrence of oxidtion: culture medium with sence of oxidtion; 1 culture medium with 1/3 drkness; 2 - culture medium with 2/3 drkness nd 3 - culture medium totlly drk) Revist Brsileir de Horticultur Ornmentl