Caracterização eletroforética do perfil protéico de testículos de suínos Electrophoretic characterization of the protein profile of the boar testis

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1 Caracterização eletroforética do perfil protéico de testículos de suínos Electrophoretic characterization of the protein profile of the boar testis Verónica Hoyos Marulanda 1,2* ; Laura Alejandra Martínez Ocampo 1,2 ; Verónica Gonzalez-Cadavid 1 ; Carlos Eduardo Azevedo Souza 1 ; Jorge André Matias Martins 1 ; Tiago Silva Andrade 1 ; Arlindo A. Moura 1* 1 Departamento de Zootecnia, Universidade Federal do Ceará Brasil 2 Univesidade Nacional da Colômbia, sede Medellín Colômbia * verohm@hotmail.com; arlindo.moura@gmail.com ABSTRACT Proteomic mapping of testicular proteins is an important step towards understanding of the role played by different proteins in the regulation of testicular function. Testes from two adult boars were surgically removed and fragments were taken for the proteomic studies. Tissue fragments were macerated in cold PBS containing 0.1% triton X-100 and 1% PMSF. The tissue homogenate was then centrifuged and the supernatant was mixed with cold acetone for protein precipitation. Proteins were then re-suspended in ultrapure water and protein concentration was determined according to Bradford s method. Testicular proteins (400 µg) were subjected to 2D-SDS PAGE. On average, 327 proteins were detected in the 2D gels. Major proteins of the gel were low molecular weight spots, representing 2.91% (18.2 kda; pi 4.89) and 2.80% (17.1 kda; pi 6.47) of the intensity of all valid spots. Most of the spots had medium to high molecular weight (above 30 kda; n = 253). The ten most abundant spots represented 20% of the total protein intensity in the gels. Among these, only two spots had high molecular weight (84.7 kda; pi 4.16 and 78.9 kda; pi 6.06). The next step will be the identification of these protein spots. Knowledge about their identities is crucial to the comprehension of how testicular proteins evaluating testicular responses to different conditions and bring insights on how these proteins relate to reproductive efficiency in the boar. Key words: Pig, Testis, Proteomics Palavras-chave: Varrões, Testículos, Proteômica INTRODUÇÃO 737

2 O testículo é um órgão chave para a reprodução do macho, com a produção de espermatozóides e andrógenos. Poucos estudos se dedicam à análise proteômica global de tecidos, como por exemplo, os dos testículos. A identificação em grande escala das proteínas proporciona um amplo recurso para conhecer os mecanismos subjacentes à fertilidade masculina. Portanto, o objetivo do presente estudo foi a caracterização proteômica de testículos de varrões criados em região tropical. MATERIAL E MÉTODOS Amostras de testículo foram coletadas de dois cachaços sexualmente maduros, da linhagem Topigs. Os testículos foram removidos cirurgicamente e uma amostra (10 g) imediatamente armazenada em gelo seco. Um fragmento (100 mg) de testículo foi macerado individualmente em uma solução de PBS contendo 0,1% de Triton X-100 e 1% de PMSF, até obter uma amostra homogênea. Em seguida, as amostras foram centrifugadas (5000 x g, 15 min., 4ºC) e o sobrenadante, contendo proteínas testiculares, foi submetido à precipitação com acetona (1:9). As proteínas foram ressuspensas em 200 µl de água ultrapura e a concentração protéica, medida pelo método de Bradford (1976). As amostras foram submetidas à eletroforese bidimensional conforme descrito anteriormente (Souza et al., 2010). Em resumo, 400 µg foram focalizadas em tiras de ph imobilizado de 13cm (ph 4-7L) e separadas por SDS-PAGE (12.5%). Os géis foram corados com Coomassie Blue Coloidal (G250) por 24 horas, digitalizados e analisados com o programa PDQuest. RESULTADOS Em média, foram detectados 327 ± 12,7 spots por gel. Desses, 308 estavam presentes em todos os géis, representando 97,8% da intensidade total dos spots. Os principais spots dos géis eram de baixo peso molecular, e representaram 2,9% (spot 2202; 18,2 kda; pi 4,89) e 2,80% (Spot 8002; 17,1 kda; pi 6,47) das proteínas dos mapas. Os dez spots mais intensos dos géis, combinados, representaram 19,8 ± 0,6% da intensidade total de spots válidos, mas representaram apenas 3% do número total de spots nos géis. Entre eles, apenas dois spots tinham alto peso molecular (84,7 kda; pi 4,16 e 78,9 kda; pi 6,06). CONCLUSÃO 738

3 Os resultados mostram que o testículo suíno caracteriza-se por uma ampla variedade de proteínas, em diversas faixas de alto e baixo peso molecular. Futuros estudos contemplando a identificação dessas proteínas trarão importantes informações sobre os mecanismos associados à espermatogênese, bem como possíveis associações dessas proteínas com parâmetros de eficiência reprodutiva dos animais. AGRADECIMENTOS da pesquisa. À granja Xerez Agropecuária, por permitir a utilização dos animais na realização REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BRADFORD, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry, v. 72, p , SOUZA, C. E. A.; RÊGO, J. P.; NOGUEIRA, F. C.; OLIVEIRA, J. T. A.; DOMONT, G. B.; SANTOS, D. O.; MOURA, A. A. Identification of the major proteins of ram seminal plasma using a proteomic approach. In: ANNUAL MEETING OF THE AMERICAN SOCIETY OF ANDROLOGY, 35,

4 Diluentes e temperaturas alternativas na conservação do sêmen do varrão Extenders and alternative temperatures in boar sperm preservation Lina Raquel Santos Araújo 1* ; Aline Viana Dias 1 ; Tatyane Bandeira Barros 1 ; Daianny Barboza Guimarães 1 ; Ricardo Toniolli 2 1 Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias; 2 Laboratório de Reprodução Suína e Tecnologia de Sêmen, Faculdade de Veterinária, Universidade Estadual do Ceará * linaraq@ibest.com.br ABSTRACT The objective of this study was to evaluate the efficiency of powdered coconut water (PCW) and skimmed milk powder (LPD) as extenders for boar sperm in different storage temperatures. It was used the extenders: Beltsville Thawing Solution (BTS); PCW-103, and LPD subjected to two storage temperatures, 17 and 10 C, in a total of six treatments. The samples were processed for morphology in D0 (day of collection) and D4. Sperm smears were stained and it was considered acrosome morphology and vitality (% live cells). We applied the chi-square test (p<0.05). The rate of vitality and integrity of acrosome was higher for treatments with LPD compared to BTS and PCW- 103 (D0; 10 and 17 C; p<0.001). In D4, the LPD 10 C remained higher, differing only treatment with BTS (p<0.001). The LPD gave greater protection to sperm cell through higher rates of vitality and acrosome integrity at different temperatures. INTRODUÇÃO A longevidade do sêmen do varrão mantém-se satisfatória durante 72 horas à temperatura de 16 C, em diferentes diluentes (Figueirôa et al., 2001), período este insuficiente para o bom aproveitamento do ejaculado de reprodutores. A procura por novos diluentes levou pesquisadores a estudarem a água de coco em pó (ACP-103 ) (Toniolli et al., 2001) e o leite desnatado (LPD) (Toniolli et al., 2010) como alternativas viáveis na substituição dos tradicionais diluentes comerciais existentes no mercado. O objetivo deste experimento foi avaliar a eficiência da ACP-103 e do LPD como diluentes na manutenção do sêmen suíno em diferentes temperaturas de conservação. 740

5 MATERIAL E MÉTODOS O sêmen de cinco reprodutores foi coletado durante 12 semanas, por meio da técnica da mão enluvada. A qualidade do ejaculado foi avaliada pela concentração (x10 6 sptz/ml), volume (ml), total de espermatozoides (x10 9 sptz), vigor espermático (0 a 5) e porcentagem de células móveis (0 a 100). Foi separado de cada ejaculado um total de 2,63 x10 9 sptz, repartidos entre seis tratamentos (35 x10 6 sptz/ml). O dia da colheita foi considerado D0 e o sêmen foi conservado até quatro dias após (D4). Utilizaram-se como diluentes: o Beltsville Thawing Solution (BTS - controle); a água de coco em pó (ACP- 103 ) e o leite desnatado (LPD), que foram submetidos a duas temperaturas de conservação, 10 e 17 C. As amostras para morfologia e vitalidade foram processadas no D0 e D4, cinco minutos após a incubação a 39 C. Foram feitos esfregaços de sêmen corados com azul de bromofenol, contando-se 200 células/esfregaço. Os espermatozoides foram classificados em duas categorias: (1) total de acrossoma intacto, e (2) total de vivos. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, aplicando-se o teste qui-quadrado, usando-se o Programa StatView (versão 5.0.1; SAS Institute Inc. 1998) (p<0,05). RESULTADOS E DISCUSSÃO A taxa de vitalidade espermática e integridade de acrossoma no D0 foram significativamente maiores para os tratamentos com LPD em ambas as temperaturas de conservação (10 e 17 C), comparado ao BTS e ACP-103 (p<0,001). Após cinco dias de conservação, no D4, o LPD a 10 C apresentou uma maior taxa de vitalidade e integridade de acrossoma, diferindo apenas do tratamento com BTS (Tabela 1 e 2; p<0,001). Esses melhores resultados encontrados com LPD a 10 C podem ter sido devido à presença das lipoproteínas e lecitinas do leite que, segundo Memon & Ott (1981), promovem a proteção da célula espermática contra o choque térmico, quando adicionado ao sêmen antes da refrigeração. CONCLUSÕES O leite em pó desnatado mostrou ser um bom meio diluente para o sêmen suíno, conferindo uma maior proteção à célula espermática, através de maiores taxas de vitalidade e integridade de acrossoma, em relação aos outros diluentes nas diferentes temperaturas. 741

6 Tabela 1. Total de espermatozoides vivos do sêmen suíno conservado durante cinco dias em diferentes temperaturas (17 e 10 C) nos diluentes BTS, ACP-103 e LPD Temperaturas Diluentes Dias de conservação D0* D4** BTS 61,3 ± 17,9 a 18,1 ± 20,5 a 17 o C ACP ,2 ± 16,6 a 9,6 ± 13,4 bc LPD 81,2 ± 16,0 b 8,6 ± 13,4 c BTS 51,5 ± 17,6 a 19,7 ± 21,9 ad 10 o C ACP ,5 ± 17,0 a 15,6 ± 15,6 ab LPD 80,8 ± 19,6 b 32,9 ± 27,8 d Letras diferentes na mesma coluna (*p<0,001; **p<0,05) Tabela 2. Total de espermatozoides com acrossoma intacto (%) do sêmen suíno conservado durante cinco dias a 17 e 10 C nos diluentes BTS, ACP-103 e LPD Temperaturas Diluentes Dias de conservação D0 D4 BTS 87,2 ± 9,2 a 80,8 ± 9,7 a 17 o C ACP ,6 ± 7,2 a 81,1 ± 12,0 a LPD 96,3 ± 3,6 b 80,8 ± 9,3 a BTS 82,3 ± 10,5 a 74,1 ± 15,4 a 10 o C ACP ,3 ± 8,0 a 80,9 ± 10,7 a LPD 95,7 ± 6,1 b 90,3 ± 10,1 b Letras diferentes na mesma coluna (p<0,001) REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS FIGUEIRÔA, P. T. B.; SALVIANO NETO, P.; OLIVEIRA, R. R. et al. Avaliação da viabilidade do sêmen suíno submetido à refrigeração. Revista Brasileira de Reprodução Animal, v. 25, p , MEMON, M. A.; OTT, R. S. Methods of semen preservation and artificial insemination in sheep and goats. World Review of Animal Production, v. 17, n. 1, TONIOLLI, R.; JATAHY, P. C.; SILVA, M. C.; MOREIRA, F. R. C. Utilização do leite desnatado e do ácido 3-indol acético na conservação do sêmen suínos. Ciência Animal, v. 11, n. 1, p , TONIOLLI, R.; TONIOLLO, G. H.; FRANCESCHINI, P. H.; MORATO, F. M. A. C. Uso do diluente água de coco em pó (ACP-103 ) na conservação prolongada do sêmen do varrão: avaliação in vitro e in vivo. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v. 62, n. 5, p ,

7 Efeito da temperatura sobre a qualidade espermática do ejaculado suíno diluído em ACP-103 adicionado de gema de ovo Effect of temperature in the swine sperm quality diluted in PCW-103 add of egg yolk Tatyane Bandeira Barros*; Daianny Barboza Guimarães; Luciana de Souza Toniolli; Ricardo Toniolli Laboratório de Reprodução Suína e Tecnologia de Sêmen, Faculdade de Veterinária, Universidade Estadual do Ceará *tatybiobandeira@yahoo.com.br ABSTRACT This study aimed to test different concentrations of egg yolk, added to the powdered coconut water extender (PCW-103 ) and analyzed which one has the longest sperm viability at a temperature of 10 C. A total of 36 ejaculates were diluted in PCW-103 supplemented with different concentrations of egg yolk: 0% (control), 1%, 3%, 5%, and 7% and storage at 10 C. Were analyzed the vigor, motility and osmotic resistance. Statistical analysis was performed by Kruska-Wallis test for nonparametric data and Dunns post test and parametric data were used for ANOVA and Tukey post test. Maintenance of a higher vigor was observed as the concentration of egg yolk added to the extender. The motility analysis was similar to those of vigor. The concentrations of 3, 5 and 7% egg yolk added to PCW-103 extender was effective in maintaining sperm viability and may be used for artificial insemination programs. Key words: conservation; egg-yolk; powdered coconut water; sperm; swine Palavras-chave: conservação; gema de ovo; água de coco em pó; sêmen; suíno INTRODUÇÃO Temperaturas abaixo de 15 C são nocivas ao sêmen suíno, em virtude da sua maior sensibilidade a flutuações de temperatura. Entretanto, a refrigeração do sêmen a temperaturas mais baixas pode favorecer a expansão da Inseminação Artificial em suínos pela possibilidade de refrigerar o sêmen em refrigeradores comuns, tornando o seu uso de maior aplicabilidade a partir de uma considerável redução de custos (Corrêa et al., 2001). Assim, esse trabalho teve por objetivo testar diferentes concentrações de gema de ovo, que tem função crioprotetora, adicionada ao diluente água de coco em pó 743

8 (ACP-103 ) e verificar qual delas mantém por mais tempo a viabilidade espermática à temperatura de 10 C. MATERIAL E MÉTODOS Para o experimento foram selecionados animais com idade variando entre 12 e 24 meses, em sistema rotineiro de coleta. O sêmen de 36 ejaculados foi diluído em ACP-103, acrescido de diferentes concentrações de gema de ovo: 0% (controle), 1%, 3%, 5%, e 7%. A conservação ocorreu à temperatura de 10 C, previamente mantida a 17 C por uma hora. Diariamente (D0 dia da coleta, D1, D2, D3, D4 e D5) foram realizadas análises de vigor e motilidade e nos dias D0, D2 e D4 o sêmen foi avaliado quanto a sua resistência osmótica. Para a análise estatística foi realizado o teste de Kruska-Wallis para os dados não paramétricos e pós teste de Dunns e para os dados paramétricos foram aplicados o teste de ANOVA e pós teste de Tukey. RESULTADOS E DISCUSSÃO A fração espermática do sêmen fresco dos 36 ejaculados analisados no experimento apresentou aspecto normal, coloração branco leitosa, volume médio de 249,4 ml e concentração média de 340,4 x10 9 espermatozoides/ml. Tais características estão dentro da normalidade para a espécie suína (Fernandez-Santos et al., 2006). O sêmen fresco apresentou uma motilidade média de 90% ± 6,3 e vigor de 4,0 ± 0,6, com 10% de alterações totais. Uma maior manutenção do vigor foi observada quanto maior a concentração de gema de ovo adicionada ao diluente (Tabela 1). As análises de motilidade foram semelhantes às de vigor (Tabela 2). A adição de gema de ovo ao diluente ACP-103, independente da concentração, não contribuiu para o aumento da porcentagem de células com membrana íntegra, visto que todos os tratamentos apresentaram resultados semelhantes em todos os dias de análise. Este fato pode ter ocorrido em virtude das baixas concentrações de crioprotetor analisadas, visto que Fernandez-Santos et al. (2006), ao testarem as concentrações de 0, 5 e 20% de gema de ovo na sobrevivência de espermatozoides de cervídeos, observaram que a integridade da membrana tendeu a aumentar quando a gema de ovo estava presente no meio. 744

9 CONCLUSÃO As concentrações de 3, 5 e 7% de gema de ovo adicionadas ao diluente ACP- 103 foram eficientes para a manutenção da viabilidade espermática, podendo ser utilizados em programas de inseminação artificial. Tabela 1. Análise do vigor espermático no sêmen suíno conservado a 10 C no diluente ACP- 103 adicionado de diferentes concentrações de gema de ovo Tratamentos Dias de conservação D0 D1 D2 D3 D4 T1 1,0 ± 0,7 a 0,3 ± 0,6 a 0,1 ± 0,2 a 0,0 a 0,0 T2 1,8 ± 0,72 b 1,4 ± 0,86 b 0,8 ± 0,9 b 0,1 ± 0,4 a 0,0 T3 2,4 ± 0,7 c,d 1,7 ± 0,9 b,c 1,3 ± 1,0 b,c 0,4 ± 0,8 a,b 0,0 T4 2,3 ± 1,1 b,c 1,8 ± 1,1 b,c 1,3 ± 1,1 b,c 0,6 ± 0,9 b 0,1 ± 0,4 a T5 2,9 ± 0,8 d 2,2 ± 0,9 c 1,5 ± 1,2 c 0,5 ± 1,0 b 0,1 ± 0,4 a Letras diferentes na mesma coluna (p<0,05) Tabela 2. Análise da porcentagem de espermatozoides móveis no sêmen suíno conservado a 10 C no diluente ACP-103 adicionado de diferentes concentrações de gema de ovo Tratamentos Dias de conservação D0 D1 D2 D3 D4 T1 29 ± 23 a 5 ± 11 a 1 ± 2,6 a 0,0 0,0 T2 59 ± 22 b 35 ± 24 b 13 ± 16 b 2 ± 5,5 a 0,0 T3 74 ± 15 b,c 43 ± 27 b,c 28 ± 26 b 6 ± 12 a 0,0 T4 69 ± 25 b,c 42 ± 27 b,c 25 ± 25 b 8 ± 14 a 1 ± 4 a T5 81 ± 13 c 55 ± 25 c 31 ± 28 b 9 ± 16 a 3 ± 7,5 a Letras diferentes na mesma coluna (p<0,05) REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CORRÊA, M. N.; MEINCKE, W.; LUCIA JR, T.; DESCHAMPS, J. C. Inseminação artificial em suínos. Pelotas, Brasil, 2001, 194p. FERNÁDEZ-SANTOS, M. R.; ESTESO, M. C.; SOLER, A. J.; MONTORO, V.; GARDE, J. J. Effects of egg yolk and cooling rate on the survival of refrigerated of red deer (Cervus elaphus hispanicus) epididymal spermatozoa. Reproduction Domestic Animal, v. 41, p ,

10 Influência de diferentes diluentes sobre o vigor e motilidade do sêmen suíno conservado Influence on the vigor and motility of boar semen stored using different extender Aline Viana Dias 1 *; Lina Raquel Araújo 1 ; Tatyane Bandeira Barros 1; Thalles Gothardo Pereira Nunes 1 ; Ricardo Toniolli 1 1 FAVET/UECE; * alinedias.vet@hotmail.com ABSTRACT The conservation of the semen in liquid form at 15 ºC is the most widely used. The objective of this study was to evaluate the influence of different extenders on the boar semen quality. Ejaculates of seven animals were used for twelve weeks by gloved hand technique. The semen was evaluated for volume (ml), concentration (x10 6 /ml), total cells (x10 9 sptz), sperm vigour (0 a 5) and mobile cells (%). The ejaculates were incubated at 30 ºC/10 min. diluted in BTS, LPD and ACP. The semen was stored at 17 ºC for 5 days and evaluated for vigour and motility. The results for the conservation within the first 24 hours showed no differences between the ACP and LPD extender. However, in relation to the BTS there was a relatively larger decline of vigour and sperm motility. After 24 h of conservation both the ACP and the extender LPD showed a sharp drop on the vigour and motility of the semen when compared to the BTS. Key words: Extender, conservation, semen, boar. INTRODUÇÃO A conservação do sêmen sob a forma líquida a 15 o C é o método mais largamente utilizado, com um limite de três dias do sêmen conservado em um diluente para a obtenção de resultados viáveis de fertilidade (Paquignon et al., 1982). A melhoria da qualidade dos diluentes e o desenvolvimento de novos meios, tem por finalidade aumentar o tempo de estocagem após coleta do ejaculado e melhorar os resultados de fertilidade, Weitze (1995). O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência de diferentes tipos de diluentes sobre a qualidade do sêmen suíno conservado. 746

11 MATERIAL E MÉTODOS O sêmen de sete reprodutores (ejaculado total) foi coletado uma vez por semana por doze semanas, pela técnica da mão enluvada em recipiente coberto por gaze e protegido em copo térmico. A fração gelatinosa retida pela gaze foi desprezada. A qualidade do ejaculado foi estabelecida através do volume (ml), concentração (x10 6 sptz), nº total de células (x10 9 sptz), vigor espermático (0 a 5) e total de células móveis (%). A diluição do ejaculado foi feita dentro dos primeiros dez minutos após coleta. Três tipos de diluentes foram utilizados, Beltsville Thawing Solution (BTS), Leite em pó desnatado (LPD) e Água de coco em pó (ACP-103 ). Após diluição o sêmen foi conservado a 17 C durante cinco dias nos diferentes diluentes, sendo analisado todos os dias (D0, D1, D2, D3 e D4) após incubação das amostras de todos os tratamentos a 39 ºC/10 min.. Os parâmetros analisados no sêmen diluído e conservado foram o vigor espermático e a porcentagem de células móveis (motilidade). A análise estatística foi realizada pelo teste de Mann-Whitney e Qui-quadrado e nível de significância de 5%. RESULTADOS E DISCUSSÃO Os resultados nas primerias 24 h de conservação do sêmen quanto ao seu vigor e motilidade não apresentaram diferenças entre os diluentes ACP e LPD, porém, em relação ao BTS houve uma queda maior destas características (figuras 1 e 2). Após as 24 h tanto o diluente ACP quanto o LPD apresentaram uma queda acentuada quanto ao vigor e motilidade do sêmen quando comparados com o BTS. Esta queda pode ter sido devido ao acúmulo de substâncias tóxicas aos espermatozoides em virtude de alterações de ph e osmolalidade do meio, já que com o decorrer do tempo, há o consumo do substrato enérgetico e a produção de metabólitos (Fontenele et al., 2002). No presente estudo os diluentes LPD e ACP nas primerias 24 h apresentaram resultados de vigor e motilidade compatíveis com os valores aceitáveis a inseminação artificial (Bortolozzo et al. 2005), diferente do BTS onde foi observado uma redução considerável dessas características. A escolha do diluente deve considerar as condições específicas em que a inseminação artificial ocorre, ou seja, se o sêmen se destina ao uso imediato ou ao armazenamento (Bortolozzo et al., 2005). Neste caso os diluentes LPD e ACP são diluentes alternanativos podendo ser utilisados para uso imediato. 747

12 CONCLUSÃO O LPD e ACP podem ser utilizados como diluentes alternativos para a inseminação artificial durante as primeiras 24 h de conservação, diminuindo assim custos com os diluentes comerciais. Figura 1: Motilidade espermática do sêmen suíno diluído em BTS, ACP e LPD e conservado durante cinco dias a 17 o C. Figura 2: Vigor espermático do sêmen suíno diluído em BTS, ACP e LPD e conservado durante cinco dias a 17 o C. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BORTOLOZZO, F.P.; WENTZ, I.; BENNEMANN, P.E.; BERNARDI, M.L.; WOLLMANN, E.B.; FERREIRA, F.M.; NETO, G.B. Suinocultura em ação: Inseminação artificial na suinocultura tecnificada. Copyright, Porto Alegre, Brasil, 185p, FONTENELE, O.S.; CARDOSO, J.F.S.; CARDOSO, R.C.S.; SILVA, A.R.; UCHOA, D.C.; SILVA, L.D.M. Conservação a 5ºC do sêmen canino diluído em água de coco. IV Simpósio Cearense de Ciência Animal e II Simpósio Nordestino de Buiatria. Fortaleza, Ceará, n.1,

13 PAQUIGNON, M.; BUSSIÈRE, J.; BARITEAU, J.; DACHEUX, J.L.; COUROT, M. Effet du dilueur, du taux de dilution et du plasma séminal sur la fertilité des truies après une longue conservation de la semence. Journées Recherche Porcine en France, v.14, p , WEITZE, K.F. Timing of artificial inseminaiton in breeding herds I. Proceeding of 3th Conference International of Boar Semen Preservation, Mariensee, abstract,

14 Manejo reprodutivo de suínos na cidade de São Luís MA Reproductive swine handling in the city of São Luís MA Sánara Adrielle França Melo 1 *, Ana Caroline de Jesus Lopes Rocha¹; Geysa Lima Conceiçao¹; Denise Melo de Azevedo¹; Bianca Coelho Santos¹ 1 Graduanda em Zootecnia, Universidade Estadual do Maranhão, São Luís MA, Brasil * adrielle_fm@hotmail.com ABSTRACT The swine breeding develops more rapidity each year, getting improvements in the process of production. But, without an adequate handling, the breeding will not have a good reproductive development. This study aimed to know whether or not biotechnology is being used in some swine breeding and how the breeders are giving the reproductive management of herds in the city of São Luís. For this purpose, it was used a questionnaire to those responsible for breeding stock. Based on the information collected it can be inferred that the use of biotechnologies is not well spread, and the natural mating and artificial inseminations are the main forms of reproduction used. Key words: swine; biotechnology; handling. Palavras-chave: suínos; biotecnologia; manejo. INTRODUÇÃO A suinocultura vem a décadas sofrendo várias modificações. De acordo com estudos realizados há mais de vinte anos por Godinho, (1995), as criações de suínos têm vida: nascem com grande euforia, entram ou não em uma fase de estabilidade, muitas têm sucesso e outras perecem; sendo observado que o principal fator disto a falta de manejo adequado dos plantéis, sendo este por falta de orientação seja por descuido dos criadores, é o ponto mais crítico. O processo reprodutivo é uma das principais características de todos os seres vivos, sendo que o sucesso deste processo complexo depende de vários fatores. O manejo reprodutivo envolve uma série de medidas aplicadas na área de reprodução, nutrição, sanidade e ambiente. Algumas biotecnologias vêm sendo bastante empregadas nos mais variados tipos de criações, visando melhoramento genético, aumento de produção, controle de doenças, comércio de embriões, produção de machos ou fêmeas de acordo com os objetivos da produção, além da possibilidade de multiplicação de 750

15 animais geneticamente superiores em larga escala. Este trabalho teve como objetivo conhecer se há ou não biotecnologias sendo empregadas em algumas criações de suínos e como está se dando o manejo reprodutivo de plantéis na cidade de São Luís. MATERIAL E MÉTODOS Fez-se uma breve pesquisa de campo em duas instituições na cidade de São Luís buscando conhecer desde as raças utilizadas até a forma de comercialização, observando um plantel de cerca de (cinco mil) animais e outro de 200 (duzentos) animais. Foi empregado um questionário aos responsáveis por cada plantel, que levantava as principais questões sobre um bom manejo reprodutivo. Com base nessas informações, foi observado, durante 30 dias, se as técnicas de manejo estavam sendo empregadas de forma correta pelas duas instituições, além de verificar se as respostas do questionário condiziam com a realidade. As duas instituições trabalham com diferentes raças e linhagens, sendo que a escolha destes animais é feita ou por via catálogo ou por empresas terceirizadas visando sempre matrizes e reprodutores altamente prolíficos. Observou-se que o que mais essas empresas trabalham e esperam nestes animais é a eficiência reprodutiva que, de acordo com Cavalcante (1984), se inclui, em sentido lato, todas as fazes de reprodução (desde o nascimento do animal até sua eliminação) ou apenas parte delas, dependendo da amplitude que se queira dar ao termo. A orientação de ambas é feita por médico veterinário, contando ainda com o auxilio de técnicos agropecuários. RESULTADOS E DISCUSSÃO Nos dois plantéis observados, verificou-se que há pouco emprego de biotecnologias, porém ambos prezam pela qualidade no produto final. Na indústria visitada observou-se o uso de inseminação artificial (IA) como técnica de reprodução buscando melhorias na produção, sendo que resultados já são notáveis, como o aumento significativo do plantel a cada ano. O outro plantel observado utiliza ainda como principal meio de reprodução a monta natural, não descartando no futuro o uso de biotecnologias para melhores resultados na produção, mesmo para uso interno e não de comercialização. Os dois plantéis vêm sendo trabalhados para melhorar o tamanho médio das leitegadas, pois, estão a baixo da média nacional que é de onze leitões por fêmea. Ao se 751

16 ter uma visão geral de todas as criações de suínos da cidade de São Luís, observa-se como ainda não é difundido o uso de biotécnicas para os criadores, acontecendo isso na maioria das vezes ou por falta de recursos ou de informação. CONCLUSÃO Apesar da diferença do tamanho dos plantéis de suínos das duas instituições, explicado pelo fator de um utilizar seus animais para a indústria e o outro para o consumo interno, poucas diferenças foram observadas em como está se dando o manejo reprodutivo e sobre o emprego de biotécnicas para melhorar a produção, porém o emprego deste último ainda não é bem difundido entre todos, sendo ainda utilizada a monta natural e a IA como principais formas de reprodução destes animais, devido à falta de recursos ou por melhor viabilidade. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CAVALCANTI, S. S. Produção de Suínos. 2 ed. São Paulo: Instituto Campineiro de Ensino Agrícola, p. GODINHO, J. F. Suinocultura: Tecnologia Moderada, Formação e Manejo de Pastagens. 1 ed. São Paulo: Nobel, p. JUNIOR, A. R. O. Manejos de Reprodução em Suínos. Acesso em 20 de Abril de Disponível em: 752

17 Morfologia espermática avaliada em diferentes concentrações de Trolox adicionado ao diluente de sêmen suíno Spermatic morphology assessed in different concentrations of Trolox added to boar semen extender Daianny Barboza Guimarães 1 ; Thalles Gothardo Pereira Nunes 1 ; Luciana de Souza Toniolli 1 ; Tatyane Bandeira Barros 1 ; Ricardo Toniolli 1 1- Universidade Estadual do Ceará - UECE * daiannybg@yahoo.com.br ABSTRACT Deleterious effects of lipid peroxidation on sperm membrane prejudice fertlization. The study aimed to evaluate the effect of different concentrations of trolox on the sperm morphology. Ejaculates from 7 animals were collected once per week for 12 weeks by the gloved hand technique. The fresh semen was evaluated by volume, concentration, total cells, vigour and sperm motility, incubated at 30 C/10 min. and diluted with BTS. The treatments: T1 = BTS; T2 = BTS+T400; T3 = BTS+T500; T4 = BTS+T600. The diluted semen was preserved at 17 C / 5 days and evaluated for morphology in D0 and D4. The different concentrations of antioxidant did not improved the percentage of cells with intact membrane, however with 500 and 600μM/100 ml obtained satisfactory values on D0 and D4, when compared with the values on the control treatment. Keywords: Spermatic morphology; trolox; extender; swine semen INTRODUÇÃO A membrana plasmática do espermatozoide apresenta variações quanto a sua composição de ácidos graxos, proteínas, lipídios e radicais livres. Estes radicais, podem causar injuria oxidativa na membrana, danificando ácidos nucléicos e despolimerizando ácidos hialurônicos (Ochsendorf, 1999). Além disso, alguns estudos evidenciaram o efeito positivo da adição de antioxidantes ao sêmen visando sua preservação (Ball, 2001), mas não há nada que indique uma melhoria morfológica do sêmen suíno. O estudo teve por objetivo avaliar o efeito deste antioxidante em diferentes concentrações sobre a qualidade morfológica espermática. 753

18 MATERIAL E MÉTODOS O sêmen de sete reprodutores foram coletados 1x/semana por doze semanas, pela da técnica da mão enluvada em recipiente coberto por gaze e protegido em copo térmico, aproveitando o ejaculado total. A qualidade do sêmen in natura foi avaliada pelo volume (ml), concentração (x10 6 /ml), total de células (x10 9 sptz), vigor espermático (0 a 5) e células móveis (%). Alíquotas de sêmen in natura foram incubadas a 30 ºC durante 10 min., diluídos em Beltsville Thawing Solution (BTS) e divido entre 4 tratamentos, com adição ou não de Trolox em diferentes concentrações (µm/100ml): T1 = BTS; T2 = BTS+Trolox400; T3 = BTS+Trolox500; T4 = BTS+Trolox600. O sêmen foi conservado a 17 C durante 5 dias. As análises foram realizadas após incubação a 37 ºC/10 min., no dia da coleta (D0) e no último dia de conservação (D4), com análises de morfologia espermática. Os parâmetros analisados foram quanto a sua normalidade ou defeitos na cabeça, peça intermediária, flagelo, presença de gota citoplasmática e presença de teratologias. Foi utilizado o teste do Quiquadrado modificado, com significância de P>0,05. RESULTADOS E DISCUSSÃO As análises morfológicas não revelaram uma ação efetivamente protetora do Trolox no primeiro dia de conservação do sêmen (D0) e embora não tenha apresentado diferenças estatisticamente significativas, apenas T500 apresentou valores médios superiores aos outros tratamentos (figura 1). A manutenção da porcentagem de células normais era esperada, já que diluentes não devem alterar as características particulares de um ejaculado. Resultados semelhantes já foram observados, quando aos diluentes foram adicionados agentes crioprotetores ou conservados em diferentes temperaturas (Barbosa et al., 2007). Quanto aos danos morfológicos, apresentou-se em maior porcentagem a presença de gotas citoplasmáticas, que segundo Scheid (1993) não tem efeito sobre a fertilidade. No quinto dia (figura 2), o tratamento que mostrou um melhor resultado foi o T600, pois proporcionou maiores porcentagens de espermatozoides normais e assim uma possibilidade de manutenção da função membranária, que por sua vez pode ser considerada um indicador da capacidade fecundante da célula (Jeyandran et al., 1984). 754

19 CONCLUSÃO A adição do antioxidante Trolox ao diluente BTS pode ser útil quando se visa a manutenção da porcentagem de células morfologicamente normais por um período maior de conservação do sêmen. Valores Morfológicos (%) Morfologia Espermática Total Coleta do Sêmen (D0) - Diferentes [Trolox] D0 BTS D0 T400 D0 T500 D0 T Normal Cabeça P.Interm. Flagelo GCP GCD Terato FIGURA 1: Valores médios da morfologia dos espermatozoides diluídos em BTS adicionado ou não de Trolox analisados no dia da coleta de sêmen (D0). Diferentes Problemas Valores morfológicos (%) Morfologia Espermática Total Coleta do Sêmen (D4) - Diferentes [Trolox] D4 BTS D4 T400 D4 T500 D4 T Normal Cabeça P.Interm. Flagelo GCP GCD Terato Diferentes Problemas FIGURA 2: Valores médios da morfologia dos espermatozoides diluídos em BTS adicionado ou não de Trolox analisados no dia da coleta de sêmen (D4). REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BALL, A. B.; MEDINA, V.; GRAVANCE, C. G.; BAUMBER, J. Effct of antioxidants on preservation of mottility,viability and acrosomal integrity of equine spermatozoa during storage at 5 ºC. Theriogenology, v.56, p , BARBOSA, C.C.; LOPES-NETO, B.E.; MADEIRA, V.L.H.; LIMA, A.H.R.; UCHOA, D.C.; SILVA, L.D.M. Criopreservação de sêmen canino com diluidor à base de água de coco em pó (ACP-106): Efeito da concentração de gema de ovo. In: Congresso Brasileiro de Reprodução Animal, 2007, Curitiba, PR, Belo Horizonte: CBRA, JEYANDRAN, R. S.; VAN DER VEN, H. H.; PEREZPELAEZ, M. Development of na assay to assess the functional integrity of the humen sperm membrane and its relationship to other semen characteristics. Journal of Reproduction and Fertility, Cambridge, v.70, n.2, p , OCHSENDORF, F.R. Infections in the male genital tract and reative oxygen species. Human Reproduction, v.5, p , SCHEID, I. R. Manual de inseminação artificial de suínos: procedimentos e métodos no laboratório. Concórdia: EMBRAPA-CNPSA, p. 755

20 Motilidade espermática do sêmen suíno em diferentes curvas de refrigeração Swine sperm motility in different cooling curves Eduardo Nunes de Freitas 1* ; Daianny Barboza Guimarães 1, Luciana de Souza Toniolli 1 ; Faviano Ricelli da Costa e Moreira 2 ; Ricardo Toniolli 2 1 Bolsista Iniciação Científica-LRSTS; 2 Laboratório de Reprodução Suína e Tecnologia de Sêmen, Faculdade de Veterinária/Universidade Estadual do Ceará; * eduvetnunes@gmail.com ABSTRACT This study seeks new methods for swine sperm that is stored by cooling. Sperm samples were divided into five different treatments, where they remained in a prior incubation period. The temperature varied at 35 C, 30 C, 25 C, 20 C, and 17 C. All samples were diluted in Beltsville extender (BTS) and kept for eight days, during which analyzes were performed. Were evaluated aspects such as vigor and motility. For statistical analyzes we used STAT VIEW software. It was observed that the incubation period prior was not sufficient to improve the sperm shelf life. Keywords: swine; sperm; cooling; motility; incubation period. Palavras-chave: suíno; sêmen; refrigeração; motilidade; período de incubação. INTRODUÇÃO O sêmen suíno apresenta baixa viabilidade quando armazenado por um período superior a cinco dias (Johnson et al., 2000). Neste sentido, várias são as tentativas de se aumentar este tempo de conservação, entre as quais, pode-se citar: a temperatura de conservação, a taxa de diluição (Perez Marcos et al., 1991) e composição dos diluentes em diferentes curvas de refrigeração (Moreira et al., 2001). Quedas rápidas da temperatura diminuem a qualidade espermática, enquanto o abaixamento lento fornece resistência (Watson & Plummer, 1990). O presente trabalho teve por objetivo desenvolver uma nova tecnologia de conservação por refrigeração para o sêmen suíno. MATERIAL E MÉTODOS Foram utilizados 57 ejaculados provenientes de cinco reprodutores pertencentes ao LRSTS/UECE, coletados pela técnica da mão enluvada, diluídos no Beltsville (BTS) 756

21 e conservado por oito dias. Foram utilizados cinco tratamentos: T.A: Sêmen diluído a 35 ºC e conservado a 17 ºC (controle); T.B: Sêmen diluído a 35 ºC, em seguida a 30 ºC/4 h e conservado a 17 ºC; T.C: Sêmen diluído a 35 ºC, em seguida a 25 ºC/4 h e conservado a 17 ºC; T.D: Sêmen diluído a 35 ºC, em seguida a 30 ºC/1 h + 25 ºC/4 h e conservado a 17 ºC; T.E: Sêmen diluído a 35 ºC, em seguida a 30 ºC/1 h + 25 ºC/1 h + 20 ºC/4 h e conservado a 17 ºC. De cada ejaculado, foram retirados 4,375 x10 9 sptz, divididos em volumes iguais entre os cinco tratamentos (875 x10 6 sptz/trat.), sendo aliquotado em 10 tubos de ensaio (87,5 x10 6 sptz/tubo) em 2,5 ml de volume (diluente + sêmen) à concentração de 35 x10 6 sptz/ml. As análises foram realizadas no dia da coleta (=D0) e nos oito dias de conservação do sêmen (D0, D1, D2, D3, D4, D5, D6, D7). No D0, as análises foram feitas após 1 h de conservação a 17 ºC. A cada dia de análise foram retirados os tubos equivalentes a cada tratamento e incubados a 39 ºC/10 min., com análises do vigor (0-5) e motilidade espermática (%). A análise estatística foi feita através das médias e desvios-padrões, aos quais foi utilizado o teste de Mann Whitney e o Qui-quadrado (5%) através do programa estatístico STAT VIEW. RESULTADOS E DISCUSSÃO No D0, para a motilidade espermática (Tab.1), todos os tratamentos com incubação foram superiores ao controle (T.A), porém, apenas para o T.E as diferenças foram significativas (p<0,05). Este resultado pode ser explicado pelo rearranjo das membranas espermáticas submetidas à incubação prévia ao período de conservação do sêmen, com uma melhor adaptação espermática ao meio ambiente apesar do abaixamento da temperatura (Buhr, 1990). Já a partir do D1, ocorreu uma inversão nos valores da motilidade de T.E em relação a T.A. O tratamento controle apresentou valor maior para esta característica, mas com diferenças não significativas (p>0,05) o que pode ser explicado pelo maior tempo com metabolismo alto das células incubadas, favorecendo um maior gasto de energia até chegarem à temperatura de conservação. Este tipo de resultado foi também evidenciado por diferentes autores (Zou & Yang, 2000), que demonstraram que em temperaturas mais altas ocorre uma perda significativa da qualidade espermática. O tratamento controle conseguiu conservar uma maior quantidade de energia após D1 até o final da conservação (Zou & Yang, 2000), sendo melhor que o T.E (p<0,05). O efeito benéfico da incubação antes da conservação do sêmen tem sido reportado (Bwanga, 1991), porém, tais efeitos estão ligados à 757

22 qualidade do sêmen descongelado, desta forma, há a necessidade de se precisar melhor esta característica no refrigerado. Com relação ao vigor espermático, os resultados foram semelhantes aos de motilidade, com as mesmas tendências durante o período de incubação (Tab. 2). Tabela 1. Motilidade espermática do sêmen suíno conservado a 17 ºC por oito dias Puro Diluído D0 D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 T.A 94 a 68 a 46 a 57 a 55 a 47 a 40 a 40 a 32 a 28 a T.B 94 a 68 a 50 a 53 a 50 a 42 a 38 a 33 ab 26 a 22 a T.C 94 a 68 a 50 ab 53 a 48 a 42 a 34 a 32 ab 27 a 20 a T.D 94 a 68 a 51 ab 53 a 49 a 42 a 37 a 33 ab 28 a 21 a T.E 94 a 68 a 56 b 54 a 48 a 42 a 36 a 29 b 28 a 20 a Letras diferentes na mesma coluna (p<0,05) Tabela 2.Vigor espermático do sêmen suíno conservado a 17 ºC por oito dias Puro Diluído D0 D1 D2 D3 D4 D5 D6 D7 T.A 4,5 a 3,0 a 2,2 a 2,6 a 2,6 a 2,3 a 1,9 a 1,9 a 1,6 a 1,4 a T.B 4,5 a 3,0 a 2,4 a 2,4 a 2,3 a 2,1 a 1,8 a 1,6 ab 1,3 a 1,2 a T.C 4,5 a 3,0 a 2,3 a 2,5 a 2,4 a 2,1 a 1,7 a 1,6 ab 1,4 a 1,0 a T.D 4,5 a 3,0 a 2,4 a 2,5 a 2,3 a 2,0 a 1,9 a 1,7 ab 1,4 a 1,1 a T.E 4,5 a 3,0 a 2,5 a 2,4 a 2,4 a 2,1 a 1,8 a 1,5 b 1,4 a 1,1 a Letras diferentes na mesma coluna (p<0,05) CONCLUSÕES Os ejaculados submetidos a um período de incubação prévio, não aumentaram o tempo de conservação do sêmen. Trabalhos adicionais são necessários para se confirmar os efeitos benéficos da incubação sobre a qualidade do sêmen refrigerado. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS BUHR, M. M. Preservation of boar sperm alters membrane molecular dynamics. In: INTERNATIONAL CONFERENCE ON BOAR SEMEN PRESERVATION, 2, 1990, Proceedings Beltsville-USA, p BWANGA, C. O. Cryopreservation of boar semen. Acta Veterinaria Scandinavia, v. 32, n. 4, p , JOHNSON, L. A.; WEITZE, K. F.; FISER, P.; MAXWELL, W. M. C. Storage of boar semen. Animal Reproduction Science, v. 62, p , MOREIRA, F. R. C.; TONIOLLI, R.; DUARTE, A. B. G. Tempo de equilíbrio no processamento do sêmen suíno. Revista Brasileira de Reprodução Animal, v. 25, n. 3, p ,

23 PEREZ-MARCOS, C.; SANCHEZ, R.; PALACIO, M.; PURSEL, V. G.; PEREZ- GARCIA, T.; MARTIN-RILLO, S. Effects of dilution on the motility and acrosome morphology of boar spermatozoa stored at 15 ºC. Reproduction in Domestic Animals, v. 26, p , WATSON, P. F.; PLUMMER, J. M. The responses of boar sperm membranes to cold shock and cooling. In: INTERNATIONAL CONFERENCE ON BOAR SEMEN PRESERVATION, 2, 1990, Proceedings Beltsville-USA, p ZOU, C. X.; YANG, Z. M. Evaluation on sperm quality of freshly ejaculated boar semen during in vitro storage under different temperatures. Theriogenology, v. 53, p ,

24 Uso do leite desnatado adicionado de Trolox em diferentes temperaturas de conservação, como diluente do sêmen do varrão Use of skimmed milk added Trolox at different storage temperatures, such as boar semen extender Lourdes Amélia de Oliveira Martins¹; Eduardo Nunes de Freitas¹; Daianny Barboza Guimarães¹; Renata Vieira do Nascimento¹*; Toniolli, R. 1 1 Universidade Estadual do Ceará * renatavieiraa@hotmail.com ABSTRACT This study aimed to test the addition of antioxidants to the extender for boar semen. We tested two extenders (BTS and LPD), added at 1000 M Trolox and two temperatures (12 and 17 o C). The addition of Trolox did not affect the results regardless of the extender. A sharp decrease in LPD after 24 to 17 C, may have been due to bacterial growth during storage, impairing sperm motility. In conclusion, the LPD was indicated for use up to three days of conservation and the BTS for a longer period. Key-words: Conservation, milk powder, trolox, swine semen. Palavras-chave: conservação, leite em pó, trolox, sêmen suíno. INTRODUÇÃO A inseminação artificial (IA) suína em moldes comerciais chegou ao Brasil em 1975 (Scheid, 1992). A utilização de diluentes adequados é um dos pontos importantes para o sucesso de um programa de IA (Correa et al., 2001). O uso do leite desnatado para o processamento seminal é indicado, porém com cuidados higiênicos, pois é um bom meio de cultura. A adição de antioxidantes ao diluente de sêmen, pode ajudar a proteger o espermatozoide contra o dano induzido pelos radicais livres (Silva et al., 2009). MATERIAL E MÉTODOS Utilizou-se sete reprodutores em sistema rotineiro de coleta provenientes da Granja Regina (Maranguape, Ceará) e do Laboratório de Reprodução Suína e Tecnologia do Sêmen da FAVET/UECE. O sêmen foi avaliado quanto a concentração, volume e total de espermatozoides. Foi realizado também o exame do vigor espermático (0 a 5) e do 760

25 total de espermatozoides móveis (0 à 100%). Os diluentes testados foram: a) Beltsville Thawing Solution (BTS - 17 o C); b) Leite em pó desnatado (LPD 12 o C); c) Leite em pó desnatado (LPD2-17 o C); d) Leite em pó desnatado + Trolox 1000 M (L o C). O LPD era preparado da seguinte forma: 1 L de diluente = 100 g de leite, 1,94 g de glicose e 3,36 g de pencivet, tendo cada amostra duplicada para ser conservada em duas temperaturas diferentes: LPD = 12 o C e LPD2 = 17 o C. Diariamente (D0, D1, D2, D3, e D4) foram realizadas análises de vigor e motilidade. A morfologia e vitalidade foram feitas em D0 e D4. Usou-se os testes de Mann Whitney e o Qui-quadrado corrigido para a comparação entre grupos. A análise das diferenças entre médias foram realizadas através de uma variância multifatorial usando General Linear Models do programa Statistical Analysis System. RESULTADOS E DISCUSSÃO Para as características vigor e motilidade espermática, os resultados entre os diferentes diluentes testados apresentaram-se de maneira semelhante. O BTS começou com valores mais baixos e manteve-se uniforme durante todo período de conservação. Na temperatura mais alta (17 o C), o LPD apresentou quedas significativas após 24h de conservação, não sendo indicado para conservação do sêmen em períodos maiores. A adição do trolox não proporcionou nenhuma melhoria para estas características durante a conservação. Considerando-se as características vigor e motilidade, os diluentes BTS, a 17 o C, e o LPD a 12 o C, mostraram-se como as melhores opções para a diluição e conservação do sêmen do varrão. Apenas no último dia de conservação os resultados no BTS foram superiores aos encontrados no LPD (1,4 e 28,8% contra 0,6 e 17%, respectivamente). Os piores resultados encontrados com o LPD a 17 o C, podem ser explicados pelo fato dele ser também um excelente meio de cultura, que em temperaturas mais altas permitiu um maior desenvolvimento bacteriano no meio de conservação, desta forma prejudicando a motilidade espermática. Comparando-se os resultados encontrados com outros estudos percebeu-se algumas divergências, como a ineficiência do LPD a 17 ºC e da adição de trolox. A primeira contradição foi vista por autores (Nascimento et al., 1999) que concluíram que o sêmen suíno preservado em diluente de mínima contaminação contendo leite preservou melhor a morfologia e motilidade espermática aos 16 C do que a 5 C (3). No sêmen equino, a adição de 761

26 120µM/mL de trolox ao diluente após a descongelação preservou a motilidade a 37 ºC por 120 minutos (Silva et al., 2009) LPD LPD2 T1000 BTS Vigor Espermático (0 a 5) D0 D1 D2 D3 D4 Dias de Conservação Gráfico 1: Vigor espermático do sêmen suíno conservado em diferentes temperaturas no diluente LPD adicionado de Trolox a 1000 µm. 100 Células Móveis (%) LPD LPD2 T1000 BTS D0 D1 D2 D3 D4 Dias de Conservação Gráfico 2: Porcentagem de espermatozóides móveis do sêmen suíno conservado em diferentes temperaturas no diluente LPD adicionado de Trolox a 1000 µm. CONCLUSÃO O diluente indicado para uso em programas de IA em suínos por até três dias de conservação é o LPD e para um período mais longo o ideal foi o BTS. Os demais diluentes também permitem a utilização do sêmen diluído, mas apenas para diluição e utilização imediata, sem conservação do sêmen. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS CORREA, M.N.; MEINCKE, W.; LUCIA Jr., T.; DESCHAMPS, J.C. Inseminação artificial em suínos. Copyright. Pelotas, Brasil, 2001, 194p. SILVA, K.M.G.; MORAES, T.A.P.; SILVA, E.C.B.; GAMBOA, S.C.; GUERRA, M.M.P. Efeito da adição de trolox e pentoxifilina na motilidade, integridade do 762

27 acrossoma e do DNA de espermatozóides equinos após descongelação. Arquivos Brasileiros de Medicina Veterinária e Zootecnia. v.61, n.1, p , NASCIMENTO, E.F.; NASCIMENTO, J.K.; SILVA FILHO, J.M. Efeito do diluente mínima contaminação sobre a fertilidade do sêmen suíno resfriado a 16 e 5 C e armazenado por 24 horas. Revista Brasileira de Reprodução Animal, Belo Horizonte, v.23, n.3, p. 285, SCHEID, I.R. Commercial swine artificial insemination in Brazil: Development and current use. Reproduction in Domestic Animals, v.26., p ,