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1 moldbpqbolkb PPRRM Finalidade prevista Resumo e explicação do teste Princípios do teste O teste Access Progesterone é um imunoensaio quimioluminescente com partículas paramagnéticas para a determinação quantitativa dos níveis de progesterona no soro humano utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. Ocorrência fisiológica Tanto os homens como as mulheres produzem níveis baixos de progesterona, uma hormona esteróide do córtex supra-renal. A progesterona é importante, não somente como hormona, mas também como precursor dos estrogénios, dos androgénios e dos esteróides adrenocorticais. 1 Nas mulheres, durante a fase folicular do ciclo menstrual, os níveis séricos permanecem baixos. Após a ovulação, ocorre um aumento significativo nos níveis séricos quando o corpo lúteo inicia a produzir progesterona em quantidades crescentes, causando modificações no útero e preparando-o para a implantação dum óvulo fertilizado. Se ocorrer a implantação, o trofoblasto inicia a segregar hcg (gonadotrofina coriónica humana), que mantém o corpo lúteo e a sua secreção de progesterona. Por volta do fim do terceiro trimestre, a placenta torna-se o principal secretor e os níveis séricos continuam a aumentar. Se não ocorrer a implantação, o corpo lúteo degenera e os níveis de progesterona na circulação diminuem rapidamente, alcançando os níveis da fase folicular cerca de 4 dias antes do período menstrual seguinte. 2 Metabolismo e transporte As sínteses esteróides têm início com as sequências de conversão do acetato em colesterol. A pregnenolona é o precursor imediato e a 17-α hidroxiprogesterona um dos primeiros metabólitos da progesterona. 1,2 O metabólito predominante no fígado é o pregnanodiol, geralmente sob a forma de sulfato hidrossolúvel ou glicuronídeo, que pode ser, em seguida, segregado pelos rins. A progesterona é transportada principalmente através duma ligação com a albumina e, em menor medida, mediante a globulina de ligação dos corticosteróides (CBG) ou a globulina de ligação das hormonas sexuais (SHBG). 3,4 Aplicações clínicas Em geral, o aumento dos níveis de progesterona indica a presença de gravidez, enquanto níveis baixos de progesterona necessitam de ecografia para confirmar uma gravidez. As concentrações séricas mantêm-se relativamente constantes até à 8ª e à 10ª semana de gestação, sendo que valores de progesterona em diminuição neste período podem significar uma gravidez em risco. Após semanas, os níveis aumentam mais rapidamente, mas as determinações da progesterona sérica não são consideradas para o diagnóstico durante uma gestação avançada. 5,6 A ovulação e a presença de um corpo lúteo activo podem ser demonstradas com determinações em série da progesterona sérica. Uma disfunção da fase lútea pode ser diagnosticada após a ovulação quando a luteinização for inadequada e a secreção de progesterona reduzida. 7,8 O teste Access Progesterone é um ensaio imunoenzimático competitivo. Uma amostra é adicionada a um recipiente de reacção contendo anticorpo de coelho antiprogesterona, conjugado progesterona-fosfatase alcalina e partículas paramagnéticas revestidas com anticorpo de cabra de captura anti-coelho. A progesterona contida na amostra compete com o 2005 Beckman Coulter, Inc B Access Progesterone Página 1

2 conjugado progesterona-fosfatase alcalina por sítios de ligação numa quantidade limitada de anticorpo específico anti-progesterona. Os complexos antigénio-anticorpo resultantes ligam-se ao anticorpo de captura na fase sólida. A produção de luz é inversamente proporcional à concentração de progesterona na amostra. A quantidade de analito presente na amostra é determinada a partir duma curva de calibração multiponto armazenada no sistema. Informações sobre o produto Kit de reagentes Access Progesterone Nº Cat : 100 determinações, 2 embalagens, 50 testes/embalagem Fornecido pronto para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Manter refrigerado a 2 10 C por no mínimo duas horas antes de usar no equipamento. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado a 2 10 C. Estável a 2 10 C por 28 dias após utilização inicial. Uma possível degradação pode ser indicada pela ruptura da camada de elastómero da embalagem ou por valores de controlo fora do intervalo de variação. Abrir a embalagem de reagente caso tenha sofrido prejuízos (p.ex. ruptura da camada elastomérica). Todos os anti-soros são policlonais, excepto quando indicado em contrário. R1a: R1b: Conjugado progesterona-fosfatase alcalina (bovina) e partículas paramagnéticas revestidas com IgG de cabra anti-coelho em solução salina tamponada TRIS, com albumina sérica bovina (BSA), < 0,1% de azida sódica e 0,0125% de Cosmocil** CQ. Proteína (cabra, coelho) em tampão acetato com 0,0125% de Cosmocil CQ. R1c: Anti-soro de coelho antiprogesterona em tampão acetato, BSA, < 0,1% de azida sódica e 0,0125% de Cosmocil CQ. Avisos e precauções Colheita e preparação da amostra Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 9 A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. 1. Soro é a amostra aconselhada. Para evitar uma absorção relacionada ao tempo, as amostras não devem ser armazenadas em recipientes de colheita com separadores de gel Seguir as recomendações abaixo para manusear, analisar e armazenar amostras de sangue: 11 Colher todas as amostras de sangue tomando as precauções habituais para a colheita venosa. Deixar as amostras de soro coagularem completamente antes da centrifugação. Manter as provetas sempre fechadas. Dentro de duas horas após a centrifugação, transferir no mínimo 500 µl de amostra isenta de células para uma proveta de armazenamento. Tapar imediatamente a proveta com a rolha, apertando bem. Access Progesterone B 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 2

3 Armazenar as amostras hermeticamente fechadas à temperatura ambiente (a C) durante o máximo de oito horas. Se o ensaio não estiver pronto dentro de oito horas, refrigerar as amostra a 2 8 C. Se o ensaio não estiver pronto dentro de 48 horas, ou no caso de amostras a serem expedidas, congelar a -20 C ou a temperatura mais baixa. As amostras podem ser descongeladas somente uma vez. 3. Seguir as instruções abaixo para preparar as amostras: Certificar-se de que a fibrina e a matéria celular residuais tenham sido removidas antes da análise. Para a centrifugação, seguir as instruções do fabricante das provetas de colheita de sangue. 4. Cada laboratório deve determinar a aceitabilidade das próprias provetas de colheita de sangue e dos produtos de separação do soro. Estes produtos podem variar entre fabricantes diferentes e, às vezes, de um lote para o outro. 5. Evitar a análise de amostras lipémicas. Materiais fornecidos R1 Kits de reagentes Access Progesterone Materiais necessários mas não fornecidos Comentários sobre o procedimento Procedimento Detalhes de calibração 1. Calibradores: Access Progesterone Calibrators Fornecido em zero e aproximadamente 1,0; 4,0; 10,0; 20,0 e 40,0 ng/ml. (3,18; 12,72; 31,80; 63,60 e 127,20 nmol/l) Nº Cat Materiais do Controlo de Qualidade (QC): material de controlo disponível no mercado. 3. Substrato: Access Substrate Nº Cat Tampão de lavagem: Access Wash Buffer Nº Cat (Access, Access 2, SYNCHRON LX i) Nº Cat (UniCel DxI) 1. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para uma descrição específica da instalação, inicialização, princípios de funcionamento, características de desempenho do sistema, instruções de funcionamento, procedimentos de calibração, limitações operacionais e precauções, riscos, manutenção e solução de problemas. 2. Misturar o conteúdo das embalagens novas (vedadas) de reagentes invertendo delicadamente a embalagem várias vezes antes de carregá-la no equipamento. Não inverter embalagens abertas (perfuradas). 3. Usar vinte (20) µl de amostra para cada determinação além dos volumes mortos do recipiente da amostra e do sistema. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para o volume mínimo de amostra necessário. 4. A unidade de medida padrão do sistema para indicar os resultados das amostras é ng/ml. Para mudar essas unidades de medida para o Sistema Internacional de Unidades (unidades do SI), nmol/l, consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda. Para converter as concentrações manualmente para o Sistema Internacional, multiplicar ng/ml pelo factor de multiplicação 3,18. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre a gestão das amostras, a configuração dos testes, a solicitação de testes e a visualização dos resultados dos testes. Para todos os testes, é necessário ter uma curva de calibração activa. Para o ensaio Access Progesterone, a calibração é necessária a cada 28 dias. Consultar os respectivos manuais de 2005 Beckman Coulter, Inc B Access Progesterone Página 3

4 sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Controlo de qualidade Resultados Limitações do procedimento Os materiais de controlo de qualidade simulam as características das amostras dos doentes e são fundamentais para a monitorização do desempenho do sistema de análises imunoquímicas. Dado que as amostras podem ser analisadas a qualquer momento utilizando um formato de acesso aleatório em vez dum formato por lote, é aconselhável utilizar os materiais de controlo de qualidade a cada 24 horas. 12 Utilizar materiais de controlo de qualidade disponíveis no mercado que cubram pelo menos dois níveis de analito. Seguir as instruções do fabricante para a reconstituição e o armazenamento. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores médios e limites aceitáveis para garantir um desempenho adequado dos testes. Os resultados do controlo de qualidade que não estiverem dentro dos limites aceitáveis, podem indicar resultados de testes não válidos. Examinar todos os resultados dos testes obtidos desde o último ponto de teste de controlo de qualidade aceitável para este analito. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para informações sobre como visualizar os resultados do controlo de qualidade. Os resultados dos testes dos doentes são determinados automaticamente pelo software do sistema utilizando um modelo matemático de curva logística de quatro parâmetros ponderada (4PLC). A quantidade de analito na amostra é determinada a partir da produção de luz medida através dos dados de calibração armazenados no sistema. Os resultados dos testes dos doentes podem ser visualizados através do ecrã apropriado. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções completas sobre como visualizar os resultados das amostras. 1. As amostras podem ser medidas com exactidão dentro do intervalo de análise compreendido entre o limite mínimo de detecção e o valor mais alto do calibrador (aproximadamente 0,08 40,0 ng/ml [0,25 127,20 nmol/l]). Se uma amostra contém uma quantidade menor que o limite mínimo de detecção para o ensaio, registar os resultados como menores que aquele valor (por ex., < 0,08 ng/ml [< 0,25 nmol/l]). Se uma amostra contém uma quantidade maior que o valor estabelecido do calibrador mais alto Access Progesterone Calibrator (S5), registar os resultados como maiores que aquele valor (por ex., > 40,0 ng/ml [> 127,20 nmol/l]). Em alternativa, diluir um volume de amostra com dois volumes de calibrador Access Progesterone Calibrator S0 (zero), o qual também pode ser encontrado como Access Progesterone Calibrator S0 Nº Cat Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções sobre a introdução duma diluição de amostra numa solicitação de teste. O sistema mostra os resultados adaptados à diluição. 2. Nos ensaios que utilizam anticorpos, existe a possibilidade de interferência dos anticorpos heterófilos contidos na amostra do doente. Os doentes que estão regularmente em contacto com animais ou que tenham sido submetidos a imunoterapia ou a técnicas de diagnóstico que utilizam imunoglobulinas ou fragmentos de imunoglobulinas podem produzir anticorpos, por ex. HAMA, que interferem com os imunoensaios. Para além disso, outros anticorpos heterófilos, tais como os anticorpos humanos anti-cabra, podem estar presentes nas amostras dos doentes. 13,14 Tais anticorpos interferentes podem produzir resultados errados. Os resultados de doentes suspeitos de ter estes anticorpos devem ser avaliados com cuidado. 3. Os resultados do Access Progesterone devem ser interpretados baseando-se no quadro clínico geral do doente, incluindo: os sintomas, a anamnese clínica, os dados de outros testes e outras informações apropriadas. Access Progesterone B 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 4

5 Valores esperados 1. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios intervalos de referência para garantir uma representação adequada de populações específicas. 2. As concentrações de progesterona foram medidas em amostras de soro humano provenientes de indivíduos adultos dos sexos masculino e feminino aparentemente saudáveis usando o ensaio Access Progesterone. As faixas observadas de concentrações de progesterona são mostradas abaixo para cada população representada: Grupo de referência * Não submetidas à terapêutica hormonal n Média Faixa de variação Homens 50 0,36 0,10-0,84 Mulheres não grávidas Metade da fase folicular 14 0,69 0,31-1,52 Metade da fase lútea 13 11,42 5,16-18,56 Pós-menopausa* 49 0,25 <0,08-0,78 Gravidez primeiro trimestre 34 22,17 4,73-50,74 segundo trimestre 29 29,73 19,41-45,30 3. Interpretaros resultados deste teste juntamente com o quadro clínico do paciente. Características específicas de desempenho Comparação de métodos Uma comparação de 113 valores obtidos com o ensaio Access Progesterone do sistema de imunoensaio Access e com um kit de imunoensaio disponível no mercado forneceu os seguintes dados estatísticos: n Intervalo de observações Intercepção Inclinação Coeficiente de correlação (r) 113 0,39-30,41 0,63 0,824 0,978 Recuperação da diluição (linearidade) Diluições múltiplas de dois amostras contendo vários níveis de progesterona com o calibrador Access Progesterone Calibrator S0 (zero) forneceram os seguintes dados: Amostra 1 Concentração esperada Concentração determinada Recuperação (%) Pura N/A 36,72 N/A 1/2 18,36 18, /3 12,24 11, /4 9,18 9, /8 4,59 5, /16 2,30 2,03 88 Recuperação média em% Beckman Coulter, Inc B Access Progesterone Página 5

6 Amostra 2 Concentração esperada Concentração determinada Recuperação (%) Pura N/A 32,76 N/A 1/2 16,38 16, /3 10,92 11, /4 8,19 8, /8 4,10 4, /16 2,05 2, Recuperação média em% 104 Imprecisão Um estudo realizado utilizando material de controlo com base em soro humano disponível no mercado incluindo um total de 20 testes, 3 replicados por teste, no decorrer de 10 dias, forneceu os seguintes dados, examinados através da análise de variância (ANOVA) 15,16 : Controlo do soro humano Especificidade analítica/interferências Amostras séricas contendo até a 10 mg/dl (171 µmol/l) de bilirrubina, amostras hemolisadas contendo até a 500 mg/dl (5 g/l) de hemoglobina e amostras lipémicas contendo o equivalente a 450 mg/dl (5,08 nmol/l) de triglicéridos não afectam a concentração de progesterona testada usando uma amostra inicial contendo aproximadamente 7 ng/ml de progesterona. A seguinte tabela descreve a reactividade cruzada do ensaio com substâncias com estrutura semelhante à da progesterona. As substâncias com reactividade cruzada potencial foram adicionadas ao calibrador S0. ND = Não detectável Média geral (n=60) Intra-execução (%CV) Inter-execução (%CV) Imprecisão total (%CV) Nível 1 1,04 7,88 11,13 13,64 Nível 2 7,04 6,28 3,97 7,43 Nível 3 21,75 4,37 3,57 5,64 Substância Analito adicionado Concentração aparente Reatividade cruzada (%) 17-α hidroxiprogesterona 50 0,78 1,55 Pregnenolona 200 0,27 0,14 Sullfato de DHEA 4000 ND ND 5β-pregnano-3α, 20α-diol-3 glicuronídeo 200 ND ND Cortisol 600 0,34 0,06 11-deoxicortisol 100 0,15 0,15 Corticosterona 15 0,23 1,5 Androstenediol 50 ND ND 20-α diidroprogesterona 100 0,1 0,1 17-β estradiol 10 ND ND Estriol 10 ND ND Testosterona 10 ND ND Pregnano 100 ND ND Cortisona 100 < 0,08 < 0,08 Prednisolona 200 0,12 0,06 Medroxiprogesterona 100 ND ND Danazol 100 ND ND Access Progesterone B 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 6

7 Sensibilidade analítica O nível mínimo detectável de progesterona distinguível de zero (calibrador Access Progesterone Calibrator S0) com 95% de confiança é 0,08 ng/ml (0,25 nmol/l). Este valor é determinado através do processamento duma curva de calibração completa de seis pontos, controlos e 10 replicados do calibrador zero em testes múltiplos. O valor de sensibilidade analítica é interpolado a partir da curva no ponto que representa dois desvios padrão do sinal médio medido no calibrador zero Beckman Coulter, Inc B Access Progesterone Página 7

8 . moldbpqbolkb=`^if_o^qlop PPRRR Finalidade prevista Resumo e explicação do produto Rastreabilidade Informações sobre o produto Os calibradores Access Progesterone Calibrators são utilizados para calibrar o ensaio Access Progesterone para a determinação quantitativa dos níveis de progesterona no soro humano utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. A calibração dum ensaio quantitativo é o processo pelo qual as amostras com concentrações conhecidas de analito (por ex., calibradores de ensaio) são testadas como amostras de doentes a fim de medir a sua resposta. A relação matemática entre as respostas medidas e as concentrações conhecidas de analito define a curva de calibração. Esta relação matemática, ou curva de calibração, é utilizada para converter as medições URL (Unidade Relativa de Luz) de amostras de doentes em concentrações quantitativas específicas de analito. A substância a ser medida (analito) nos calibradores Access Progesterone Calibrators tem como referência. O processo de rastreabilidade baseia-se na norma EN ISO Os valores atribuídos foram estabelecidos usando amostras representativas deste lote de calibrador e são específicos para as metodologias de ensaio dos reagentes Access. Os valores atribuídos por outras metodologias podem ser diferentes. Tais diferenças, se presentes, podem ser causadas por desvios sistemáticos entre os métodos. Calibradores Access Progesterone Calibrators Nº Cat : S0, 4,0 ml/recipiente; S1-S5, 2,5 ml/recipiente Fornecidos prontos para utilizar. Conservar a -20 C. Misturar o conteúdo invertendo delicadamente antes da utilização. Evitar a formação de bolhas. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado a -20 C. Depois de descongelados, os calibradores permanecem estáveis por 3 meses a 2-10ºC. Uma possível degradação pode ser indicada por valores de controlo fora do intervalo de variação. Consultar o cartão de calibração ou os rótulos dos recipientes para as concentrações exactas. S0: Soro humano, < 0,1% de azida sódica e 0,025% de Cosmocil** CQ. Contém 0,0 ng/ml (nmol/l) de progesterona. S1, S2,S3, S4, S5: Cartão de calibração: Progesterona (composto químico purificado) em soro humano em níveis de aproximadamente 1,0; 4,0; 10,0; 20,0 e 40,0 ng/ml (3,18; 12,72; 31,80; 63,60 e 127,20 nmol/l), respectivamente, com < 0,1% de azida sódica e 0,025% de Cosmocil CQ. 1 Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. O material de origem humana utilizado na preparação do reagente foi testado e considerado não reactivo ao antigénio de superfície da Hepatite B (HBs Ag), aos anticorpos do vírus da Access Progesterone B 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 8

9 Hepatite C (HCV) e aos anticorpos do vírus da Imunodeficiência humana (HIV-1 e HIV-2). Dado que nenhum método de ensaio conhecido pode oferecer a segurança completa da ausência de agentes infecciosos, manusear os reagentes e as amostras dos doentes como potencialmente infecciosos. 17 Cada pool de soro/plasma usado na preparação deste produto foi testado e considerado negativo para a presença de fibrinogénio. A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 9 A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Procedimento Detalhes da calibração Limitações do procedimento Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os calibradores Access Progesterone Calibrators são fornecidos em seis níveis zero e aproximadamente 1,0; 4,0; 10,0; 20,0 e 40,0 ng/ml preparados gravimetricamente a partir de progesterona sintética e soro humano. Os dados de calibração do ensaio são válidos por 28 dias. Os calibradores são analisados em duplicado. Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação num reagente, rejeitar o recipiente Beckman Coulter, Inc B Access Progesterone Página 9

10 Referências 1 Meyers FH, Jawetz E, Goldfien A. Review of Medical Pharmacology, 6th Edition 1978; 38: Wintrobe M.M., et al. Principles of Internal Medicine, 7th Edition 1974; 92: Felig P, Baxter JD, Broadus AE, Erohan LA. Endocrinology and Metabolism, 2nd Edition 1986; 4: 516, Westphal U, Stroupe SD, Cheng, SL. Biochemical actions of progesterone and progestins: progesterone binding serum proteins. Annals of the New York Academy of Sciences 1977; 286: Carson SA, Buster JE. Ectopic Pregnancy. New Engl J of Med 1993; Vol 329, no. 16: Frtiz F, Klopper A. Endocrinology of Pregnancy, 2nd Edition 1977; 6: Wilson JD, Foster DW. Textbook of Endocrinology, 8th Edition 1992; 759, Gerhard I, Runnebaum B. Hormone load tests in the first half of pregnancy - a diagnostic and therapeutic apporoach. Biological Research in Pregnancy 1984; Vol 5, No. 4: DHHS (NIOSH) Publication No , August Current Intelligence Bulletin 13 - Explosive Azide Hazard. Available 10 Wild D. The Immunoassay Handbook 1994; Approved Guideline Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens, H18-A National Committee for Clinical Laboratory Standards. 12 Cembrowski GS, Carey RN. Laboratory quality management: QC & QA. ASCP Press, Chicago, IL, Kricka, L. Interferences in immunoassays still a threat. Clin Chem 2000; 46: Bjerner J, et al. Immunometric assay interference: incidence and prevention. Clin Chem 2002; 48: Tentative Guideline User evaluation of precision performance of clinical chemistry devices, EP5-T National Committee for Clinical Laboratory Standards, 4, N8. 16 Krouwer JS, Rabinowitz R. How to improve estimates of imprecision. Clinical Chemistry 1984; 30: HHS Publication, 4th ed., May Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Available Access, SYNCHRON LX, UniCel, DxI e o logotipo Beckman Coulter são marcas registadas da Beckman Coulter, Inc. *Lumi-Phos é uma marca registrada da Lumigen, Inc. **Cosmocil CQ é uma marca registrada ou Avecia Ltd. Fabricado para: Beckman Coulter, Inc N. Harbor Blvd. Fullerton, CA U.S.A. Beckman Coulter Ireland Inc. Mervue Business Park, Mervue, Galway, Ireland Impresso nos Estados Unidos da América Fabricado nos Estados Unidos da América Revisado em Maio 2005 Access Progesterone B 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 10