VITAMIN B 12 REF. Finalidade prevista

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1 VITAMIN B 12 REF Finalidade prevista Resumo e explicação do teste O teste Access Vitamin B 12 é um imunoensaio quimioluminescente com partículas paramagnéticas para a determinação quantitativa dos níveis de vitamina B 12 no soro e no plasma humanos (heparina) utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. Vitamina B 12 é o nome dado a cada uma das substâncias de um grupo denominado cobalaminas. Estas são compostas de um anel de tetrapirrol que circunda um átomo central de cobalto e diferenciam-se dos grupos laterais fixados no átomo de cobalto. A forma predominante no soro é a metilcobalamina, enquanto a forma celular predominante é a 5'-deoxi-adenosil-cobalamina. 1 Destas substâncias, a cianocobalamina (PM 1355) é a mais estável sendo empregue como composto de referência para a medição das concentrações de cobalamina no soro. As cobalaminas obtêm-se de produtos de origem animal, como carne, ovos, leite e outros lacticínios. Quando ingeridas, as cobalaminas ligam-se por meio de uma proteína, denominada factor intrínseco, presente no suco gástrico do estômago sendo, em seguida, absorvidas no íleo. Para a sua absorção, é necessária a presença do factor intrínseco. Uma vez em circulação, as cobalaminas são absorvidas e armazenadas no fígado, de onde são, então, libertadas no plasma, consoante a necessidade, e transportadas pelas proteínas de ligação da vitamina B 12 (transcobalaminas). 1 A Vitamina B 12 é uma coenzima envolvida em duas funções metabólicas muito importantes e vitais para o normal crescimento celular e para a síntese do ADN: 1) a síntese da metionina, 2) a conversão do metilmalonil-coa em succinil-coa. A carência desta vitamina pode provocar a anemia megaloblástica e também graves problemas neurológicos. 2,3 A anemia megaloblástica é caracterizada pelo aumento e pela redução do número de todas as células do organismo de rápida proliferação, incluindo as células medulares, e é causada principalmente pela menor capacidade de síntese do ADN. Visto que tanto a vitamina B 12 como o ácido fólico são ligados pela via de reacção para a síntese da metionina, uma carência de um dos dois leva à destruição desta via metabólica, provocando iguais sintomas e patologias. Portanto, para uma investigação clínica, geralmente é necessário fazer a dosagem de ambas as vitaminas, dado que o tratamento será diferente dependendo de qual vitamina estiver carente. A carência de vitamina B 12 é causada por uma ou mais razões. 1,2,4 A causa mais frequente é uma alteração na secreção do factor intrínseco, o que provoca uma absorção insuficiente de vitamina B 12 dos alimentos. Esta patologia chama-se anemia perniciosa e é mais comum nas pessoas com mais de 50 anos. 3 Outras causas de carência de vitamina B 12 são: gastrectomia, má absorção devido a cortes cirúrgicos e uma série de processos inflamatórios e infecções bacterianas no intestino delgado. 1 A quantidade de vitamina B 12 absorvida é directamente proporcional ao comprimento de intestino funcional. A carência de vitamina B 12 causada por um insuficiente aporte dietético é rara e ocorre só após anos de não ingestão de produtos de origem animal. Concentrações elevadas de Vitamina B 12 estão associadas à gravidez, ao uso de contraceptivos orais e complexos multivitamínicos e também a patologias mieloproliferativas, tais como a leucemia granulocítica crónica e a leucemia mielomonocítica. Não resulta que concentrações elevadas de Vitamina B 12, por si só, causem problemas de ordem clínica Beckman Coulter, Inc B Access Vitamin B 12 Página 1

2 Princípios do teste O teste Access Vitamin B 12 é um ensaio imunoenzimático competitivo. Uma amostra é adicionada a um recipiente de reacção juntamente com cianeto de potássio e ditiotreitol em ambiente alcalino. Este tratamento desnatura as proteínas de ligação da vitamina B 12 e converte todas as formas de vitamina B 12 na forma cianocobalamínica. Após a neutralização, o conjugado factor intrínseco-fosfatase alcalina e as partículas paramagnéticas revestidas com IgG de cabra anti-rato - anticorpos monoclonais de rato anti-factor intrínseco são adicionados à amostra. A vitamina B 12 da amostra liga-se ao conjugado factor intrínseco, evitando que o conjugado se ligue aos anticorpos anti-factor intrínseco da fase sólida. Após a incubação num recipiente de reacção, os materiais ligados à fase sólida são retidos num campo magnético enquanto os materiais não ligados são removidos por lavagem. De seguida, o substrato quimioluminescente, Lumi-Phos* 530, é adicionado ao recipiente e a luz gerada pela reacção é medida com um luminómetro. A produção de luz é inversamente proporcional à concentração de vitamina B 12 na amostra. A quantidade de analito presente na amostra é determinada a partir duma curva de calibração multiponto armazenada no sistema. Informações sobre o produto Kit de reagentes Access Vitamin B 12 Nº Cat : 100 determinações, 2 embalagens, 50 testes/embalagem Fornecido pronto para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Manter refrigerado a 2 10 C por no mínimo duas horas antes de usar no equipamento. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado a 2 10 C. Estável a 2 10 C por 14 dias após utilização inicial. Uma possível degradação pode ser indicada pela ruptura da camada de elastómero da embalagem ou por valores de controlo fora do intervalo de variação. Abrir a embalagem de reagente caso tenha sofrido prejuízos (p.ex. ruptura da camada elastomérica). Todos os anti-soros são policlonais, excepto quando indicado em contrário. R1a: R1b: R1c: R1d: R1e: Partículas paramagnéticas revestidas com complexos formados de IgG de cabra anti-rato - anticorpos monoclonais de rato anti-factor intrínseco, solução salina tamponada TRIS, surfactante, albumina sérica bovina (BSA), < 0,1% de azida sódica e 0,1% de ProClin** 300. Tampão borato com surfactante, cobinamido e < 0,1% de azida sódica. Conjugado factor intrínseco porcino - fosfatase alcalina (bovina) em solução salina tamponada TRIS, surfactante, albumina sérica humana (HSA), < 0,1% de azida sódica e 0,25% de ProClin 300. Solução de hidróxido de sódio (NaOH) 0,5N com cianeto de potássio (KCN) a 0,005%, CORROSIVA. Solução de ácido acético a 0,02% com ditiotreitol (DTT). Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. As amostras dos doentes e os produtos hemoderivados podem ser analisados rotineiramente com riscos mínimos utilizando o procedimento descrito. Contudo, deve manusear estes produtos como potencialmente infecciosos de acordo com as precauções gerais e os métodos adequados de laboratórios clínicos, independentemente da origem, tratamento ou certificação anterior. Usar um desinfectante apropriado para a descontaminação. Armazenar e eliminar estes materiais e os respectivos contentores segundo o regulamento e as normas locais. O material de origem humana utilizado na preparação do reagente foi testado e considerado não reactivo ao antigénio de superfície da Hepatite B (HBs Ag), aos anticorpos do vírus da Hepatite C (HCV) e aos anticorpos do vírus da Imunodeficiência humana (HIV-1 e HIV-2). Access Vitamin B B 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 2

3 Dado que nenhum método de ensaio conhecido pode oferecer a segurança completa da ausência de agentes infecciosos, manusear os reagentes e as amostras dos doentes como potencialmente infecciosos. 5 A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 6 Xi. Irritante: NaOH 0,5N. R 36/38: Irritante para os olhos e pele. S 26-37/39: Em caso de contacto com os olhos, lavar imediata e abundantemente com água e consultar um especialista. Usar luvas e equipamento protector para os olhos/face adequados. Xi. Irritante: ProClin 300 0,25%. R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Colheita e preparação da amostra 1. Soro e plasma (heparina) são as amostras aconselhadas. 2. Seguir as recomendações abaixo para manipular, analisar e armazenar amostras de sangue: 7 Colher todas as amostras de sangue tomando as precauções habituais para a colheita venosa. Deixar as amostras de soro coagularem completamente antes da centrifugação. Manter as provetas sempre fechadas. Dentro de duas horas após a centrifugação, transferir no mínimo 500 µl de amostra isenta de células para uma proveta de armazenamento. Tapar imediatamente a proveta com a rolha, apertando bem. Armazenar as amostras hermeticamente fechadas à temperatura ambiente (a C) durante o máximo de oito horas. Se o ensaio não estiver pronto dentro de oito horas, refrigerar as amostra a 2 8 C. Se o ensaio não estiver pronto dentro de 24 horas, ou no caso de amostras a serem expedidas, congelar a -20 C ou a temperatura mais baixa. As amostras podem ser descongeladas somente uma vez. 3. Seguir as instruções abaixo para preparar as amostras: Certificar-se de que a fibrina e a matéria celular residuais tenham sido removidas antes da análise. Para a centrifugação, seguir as instruções do fabricante das provetas de colheita de sangue. 4. Cada laboratório deve determinar a aceitabilidade das próprias provetas de colheita de sangue e dos produtos de separação do soro. Estes produtos podem variar entre fabricantes diferentes e, às vezes, de um lote para o outro. 5. Evitar a análise de amostras hemolisadas. Materiais fornecidos R1 Kits de reagentes Access Vitamin B 12 Materiais necessários mas não fornecidos 1. Calibradores: Access Vitamin B 12 Calibrators Fornecido em zero e aproximadamente 100, 250, 500, 900, e 1500 pg/ml (74, 184, 369, 664, and 1107 pmol/l). Nº Cat Beckman Coulter, Inc B Access Vitamin B 12 Página 3

4 2. Materiais do Controlo de Qualidade (QC): material de controlo disponível no mercado. 3. Substrato: Access Substrate Nº Cat Tampão de lavagem: Access Wash Buffer Nº Cat (Access, Access 2, SYNCHRON LX i) Nº Cat (UniCel DxI) Comentários sobre o procedimento Procedimento Detalhes de calibração Controlo de qualidade Resultados 1. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para uma descrição específica da instalação, inicialização, princípios de funcionamento, características de desempenho do sistema, instruções de funcionamento, procedimentos de calibração, limitações operacionais e precauções, riscos, manutenção e solução de problemas. 2. Misturar o conteúdo das embalagens novas (vedadas) de reagentes invertendo delicadamente a embalagem várias vezes antes de carregá-la no equipamento. Não inverter embalagens abertas (perfuradas). 3. Usar quarenta e cinco (45) µl de amostra para cada determinação além dos volumes mortos do recipiente da amostra e do sistema. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para o volume mínimo de amostra necessário. 4. A unidade de medida padrão do sistema para indicar os resultados das amostras é pg/ml. Para mudar essas unidades de medida para o Sistema Internacional de Unidades (unidades do SI), pmol/l, consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda. Para converter as concentrações manualmente para o Sistema Internacional, multiplicar pg/ml pelo factor de multiplicação 0,7378. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre a gestão das amostras, a configuração dos testes, a solicitação de testes e a visualização dos resultados dos testes. Para todos os testes, é necessário ter uma curva de calibração activa. Para o ensaio Access Vitamin B 12, a calibração é necessária a cada 21 dias. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os materiais de controlo de qualidade simulam as características das amostras dos doentes e são fundamentais para a monitorização do desempenho do sistema de análises imunoquímicas. Dado que as amostras podem ser analisadas a qualquer momento utilizando um formato de acesso aleatório em vez dum formato por lote, é aconselhável utilizar os materiais de controlo de qualidade a cada 24 horas. 8 Utilizar materiais de controlo de qualidade disponíveis no mercado que cubram pelo menos dois níveis de analito. Seguir as instruções do fabricante para a reconstituição e o armazenamento. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios valores médios e limites aceitáveis para garantir um desempenho adequado dos testes. Os resultados do controlo de qualidade que não estiverem dentro dos limites aceitáveis, podem indicar resultados de testes não válidos. Examinar todos os resultados dos testes obtidos desde o último ponto de teste de controlo de qualidade aceitável para este analito. Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para informações sobre como visualizar os resultados do controlo de qualidade. Os resultados dos testes dos doentes são determinados automaticamente pelo software do sistema utilizando um modelo matemático de curva logística de quatro parâmetros ponderada (4PLC). A quantidade de analito na amostra é determinada a partir da produção de luz medida através dos dados de calibração armazenados no sistema. Os resultados dos testes dos doentes podem ser visualizados através do ecrã apropriado. Consultar os respectivos manuais de Access Vitamin B B 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 4

5 sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções completas sobre como visualizar os resultados das amostras. Limitações do procedimento 1. As amostras podem ser medidas com exactidão dentro do intervalo de análise compreendido entre o limite mínimo de detecção e o valor mais alto do calibrador (aproximadamente pg/ml [ pmol/l]). Se uma amostra contém uma quantidade menor que o limite mínimo de detecção para o ensaio, registar os resultados como menores que aquele valor (por ex., < 50 pg/ml [< 37 pmol/l]). Se uma amostra contém uma quantidade maior que o valor estabelecido do calibrador mais alto Access Vitamin B 12 Calibrator (S5), registar os resultados como maiores que aquele valor (por ex., > 1500 pg/ml [> 1107 pmol/l]). Como alternativa, dilua um volume de amostra com 4 volumes do calibrador Access Vitamin B 12 Calibrator S0 (zero), também disponível como calibrador Access Vitamin B 12 Calibrator Nº Cat Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para as instruções sobre a introdução duma diluição de amostra numa solicitação de teste. O sistema mostra os resultados adaptados à diluição. 2. Nos ensaios que utilizam anticorpos, existe a possibilidade de interferência dos anticorpos heterófilos contidos na amostra do doente. Os doentes que estão regularmente em contacto com animais ou que tenham sido submetidos a imunoterapia ou a técnicas de diagnóstico que utilizam imunoglobulinas ou fragmentos de imunoglobulinas podem produzir anticorpos, por ex. HAMA, que interferem com os imunoensaios. Para além disso, outros anticorpos heterófilos, tais como os anticorpos humanos anti-cabra, podem estar presentes nas amostras dos doentes. 9,10 Tais anticorpos interferentes podem produzir resultados errados. Os resultados de doentes suspeitos de ter estes anticorpos devem ser avaliados com cuidado. 3. Os resultados do Access Vitamin B 12 devem ser interpretados baseando-se no quadro clínico geral do doente, incluindo: os sintomas, a anamnese clínica, os dados de outros testes e outras informações apropriadas. 4. Este teste não é validado para a análise das concentrações de Vitamina B 12 em amostras neonatais ou para a síndroma mieloproliferativa. Valores esperados 1. Cada laboratório deve estabelecer os seus próprios intervalos de referência para garantir uma representação adequada de populações específicas. 2. Para determinar os valores esperados foram testados os soros de 106 indivíduos sãos e de 60 doentes diagnosticados com uma carência de vitamina B 12. O diagnóstico da carência de vitamina B 12 baseou-se no volume médio corpuscular, no hematócrito, na presença de células megaloblásticas em aspirados medulares e na dosagem de vitamina B 12 com a técnica RIA. Uma estimativa não paramétrica com nível de confiança de 95% forneceu os seguintes intervalos de variação: Unidades Valores Normais Indeterminados Carência pg/ml pmol/l Para avaliar a existência de uma carência de Vitamina B 12, os resultados de um único teste não são suficientes. Uma avaliação completa deve incluir outros testes funcionais para a carência e os resultados dum exame objectivo. Características específicas de desempenho Comparação de métodos Uma comparação de 161 valores obtidos com o ensaio Access Vitamin B 12 do sistema de imunoensaio Access e com um kit de imunoensaio disponível no mercado forneceu os seguintes dados estatísticos: 2005 Beckman Coulter, Inc B Access Vitamin B 12 Página 5

6 n Intervalo de observações Intercepção Inclinação Coeficiente de correlação (r) ,0 0,95 0,97 Uma comparação entre 46 valores obtidos analisando amostras clínicas de soro e de plasma (heparina) por meio do teste Access Vitamin B 12 forneceu os seguintes dados estatísticos: n Intervalo de observações Intercepção Inclinação Coeficiente de correlação (r) ,37 543,30 46,4 0,86 0,937 Recuperação da diluição (linearidade) A diluição volumétrica de três amostras contendo várias concentrações do calibrador Vitamin B 12 Calibrator S0 forneceu os seguintes dados: Amostra 1 esperada determinada Recuperação (%) Pura N/A 1405 N/A 1/ / / / / Recuperação média em% 109 Amostra 2 esperada determinada Recuperação (%) Pura N/A 1451 N/A 1/ / / / / Recuperação média em% 106 Amostra 3 esperada determinada Recuperação (%) Neat N/A 989 N/A 1/ / / / / Recuperação média em% 108 Access Vitamin B B 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 6

7 Provas de recuperação A adição de quatro concentrações diferentes de cianocobalamina a duas amostras de doentes com valores baixos de Vitamina B 12 forneceu os seguintes dados: Amostra 1 esperada determinada Recuperação (%) Pura N/A 91 N/A Recuperação média em% 105 Amostra 2 esperada determinada Recuperação (%) Pura N/A 105 N/A Recuperação média em% 98 Imprecisão Um estudo, utilizando materiais de controlo à base de soro humano disponíveis no comércio, incluindo dois replicados de cada amostra por teste, dois ensaios por dia, forneceu os seguintes dados, analisados por meio de análises de variância (ANOVA): 11,12 Amostra n Média geral Intra-execução (%CV) Inter-execução (%CV) ,0 8, ,8 6, ,9 7, ,4 11,4 Especificidade analítica/interferências Amostras contendo até a 10 mg/dl (171 µmol/l) de bilirrubina, 9 g/dl (90 g/l) de proteínas totais e amostras lipémicas contendo o equivalente a 1800 mg/dl (20,32 mmol/l) de triglicéridos não afectam a concentração de vitamina B 12 testada. As amostras de soro às quais foram acrescentadas pg/ml (7378 pmol/l) de cobinamido, análogo da Vitamina B 12, apresentam uma reactividade cruzada < 0,5%. Sensibilidade analítica O nível mínimo detectável de vitamina B 12 distinguível de zero (calibrador Access Vitamin B 12 Calibrator S0) com 95% de confiança é 50 pg/ml (37 pmol/l). Este valor é determinado através do processamento duma curva de calibração completa de seis pontos, controlos e 10 replicados do calibrador zero em testes múltiplos. O valor de sensibilidade analítica é interpolado a partir da curva no ponto que representa dois desvios padrão do sinal médio medido no calibrador zero Beckman Coulter, Inc B Access Vitamin B 12 Página 7

8 . VITAMIN B 12 CALIBRATORS REF Finalidade prevista Os calibradores Access Vitamin B 12 Calibrators são utilizados para calibrar o ensaio Access Vitamin B 12 para a determinação quantitativa dos níveis de vitamina B 12 no soro e no plasma humanos (heparina) utilizando os Sistemas de Imunoensaio Access. Resumo e explicação do produto A calibração dum ensaio quantitativo é o processo pelo qual as amostras com concentrações conhecidas de analito (por ex., calibradores de ensaio) são testadas como amostras de doentes a fim de medir a sua resposta. A relação matemática entre as respostas medidas e as concentrações conhecidas de analito define a curva de calibração. Esta relação matemática, ou curva de calibração, é utilizada para converter as medições URL (Unidade Relativa de Luz) de amostras de doentes em concentrações quantitativas específicas de analito. Rastreabilidade A substância a ser medida (analito) nos calibradores Access Vitamin B12 Calibrators é padronizada de acordo com os calibradores internos do fabricante, preparados com cianocobalamina purificada (vitamina B12) cujo valor é determinado por meio de espectrofotometria. O processo de rastreabilidade baseia-se na norma EN ISO Os valores atribuídos foram estabelecidos usando amostras representativas deste lote de calibrador e são específicos para as metodologias de ensaio dos reagentes Access. Os valores atribuídos por outras metodologias podem ser diferentes. Tais diferenças, se presentes, podem ser causadas por desvios sistemáticos entre os métodos. Informações sobre o produto Calibradores Access Vitamin B 12 Calibrators Nº Cat : S0 S5, 4,0 ml/recipiente Fornecidos prontos para utilizar. Armazenar em posição vertical e refrigerar a 2 10 C. Misturar o conteúdo invertendo delicadamente antes da utilização. Evitar a formação de bolhas. Estável até ao vencimento do prazo de validade marcado no rótulo quando armazenado a 2 10 C. Uma possível degradação pode ser indicada por valores de controlo fora do intervalo de variação. Consultar o cartão de calibração ou os rótulo s dos recipientes para as concentrações exactas. S0: Matriz tamponada com albumina sérica humana (HSA), < 0,1% de azida sódica e 0,25% de ProClin** 300. Contém 0,0 pg/ml (pmol/l) de vitamina B 12. S1, S2,S3, S4, S5: Cartão de calibração: Vitamina B 12 em concentrações aproximativas de 100, 250, 500, 900 e 1500 pg/ml (74, 184, 369, 664 e 1107 pmol/l), respectivamente, em matriz tamponada com HSA, < 0,1% de azida sódica e 0,25% de ProClin Access Vitamin B B 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 8

9 Avisos e precauções Para utilização em diagnóstico in vitro. O material de origem humana utilizado na preparação do reagente foi testado e considerado não reactivo ao antigénio de superfície da Hepatite B (HBs Ag), aos anticorpos do vírus da Hepatite C (HCV) e aos anticorpos do vírus da Imunodeficiência humana (HIV-1 e HIV-2). Dado que nenhum método de ensaio conhecido pode oferecer a segurança completa da ausência de agentes infecciosos, manusear os reagentes e as amostras dos doentes como potencialmente infecciosos. 5 A azida sódica pode reagir com as canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Portanto, deixar fluir água em abundância nos tubos durante a eliminação de líquidos para prevenir a acumulação de azidas. 6 Xi. Irritante: ProClin 300 0,25%. R 43: Pode causar sensibilização em contacto com a pele. S 28-37: Após contacto com a pele, lavar imediata e abundantemente com água e sabão. Usar luvas adequadas. A Folha dos Dados de Segurança do Material (MSDS) está disponível a pedido. Procedimento Detalhes da calibração Limitações do procedimento Consultar os respectivos manuais de sistema e/ou o sistema de Ajuda para obter informações sobre os métodos de calibração, a configuração de calibradores, a introdução de solicitações de testes dos calibradores e a visualização de dados de calibração. Os calibradores Access Vitamin B 12 Calibrators são fornecidos em seis concentrações zero e aproximadamente 100, 250, 500, 900 e 1500 pg/ml - preparados gravimetricamente a partir de cianocobalamina purificada (vitamina B 12 ) e matriz tamponada. Os dados de calibração do ensaio são válidos por 21 dias. Os calibradores são analisados em duplicado. Se forem notados sinais de contaminação microbiana ou excesso de turvação num reagente, rejeitar o recipiente Beckman Coulter, Inc B Access Vitamin B 12 Página 9

10 Referências 1 Nelson DA and Davey FR. Erythrocytic disorders. In Clinical diagnosis and management by laboratory methods, 1991; Edited by Henry JB, Philadelphia: W.B. Saunders Company. 2 Chanarin I. Megaloblastic anæmia. Cobalamin and folate. J. Clin. Pathol. 1987; 40: Hoffbrand AV. Vitamin B12 and folate metabolism: the megaloblastic anæmias and other nutritional anæmias. In Blood and its disorders, 1982; Edited by Hardistry RM and Weatherall DJ, Philadelphia: Blackwell Scientific Publications. 4 Herbert V. Folic acid and Vitamin B12. In Modern nutrition in health and disease, 1973; Edited by Goodhart RS and Shils ME, Philadelphia: Lea and Febiger. 5 HHS Publication, 4th ed., May Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Available 6 DHHS (NIOSH) Publication No , August Current Intelligence Bulletin 13 - Explosive Azide Hazard. Available 7 Approved Guideline Procedures for the handling and processing of blood specimens, H18-A National Committee for Clinical Laboratory Standards. 8 Cembrowski GS, Carey RN. Laboratory quality management: QC & QA. ASCP Press, Chicago, IL, Kricka, L. Interferences in immunoassays still a threat. Clin Chem 2000; 46: Bjerner J, et al. Immunometric assay interference: incidence and prevention. Clin Chem 2002; 48: Tentative Guideline User evaluation of precision performance of clinical chemistry devices, EP5-T National Committee for Clinical Laboratory Standards, 4: No Krouwer JS, Rabinowitz R. How to improve estimates of imprecision. Clinical Chemistry, 1984; 30: Access, SYNCHRON LX, UniCel, DxI e o logotipo Beckman Coulter são marcas registadas da Beckman Coulter, Inc. *Lumi-Phos é uma marca registrada da Lumigen, Inc. **ProClin é uma marca registrada da Companhia Rohm e Haas ou de suas subsidiárias e filiais. Fabricado por: Beckman Coulter, Inc N. Harbor Blvd. Fullerton, CA U.S.A. Beckman Coulter Ireland Inc. Mervue Business Park, Mervue, Galway, Ireland Impresso nos Estados Unidos da América Fabricado nos Estados Unidos da América Revisado em Julho 2005 Access Vitamin B B 2005 Beckman Coulter, Inc. Página 10