Engenharia de Proteínas 2017 Ciências Biológicas FCAV/UNESP. Prof. Marcos Túlio Oliveira Depto. Tecnologia

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1 Engenharia de Proteínas 2017 Ciências Biológicas FCAV/UNESP Prof. Marcos Túlio Oliveira Depto. Tecnologia

2 Engenharia de Proteínas 2017 Ciências Biológicas FCAV/UNESP Green Fluorescent Protein (GFP)

3 Engenharia de Proteínas 2017 Ciências Biológicas FCAV/UNESP Green Fluorescent Protein (GFP) S65T aumento de fluorescência e fotoestabilidade F64L melhor atividade a 37 C

4 Engenharia de Proteínas 2017 Ciências Biológicas FCAV/UNESP Green Fluorescent Protein (GFP) S65T aumento de fluorescência e fotoestabilidade F64L melhor atividade a 37 C

5 Engenharia de Proteínas 2017 Ciências Biológicas FCAV/UNESP Green Fluorescent Protein (GFP)

6 Engenharia de Proteínas 2017 Ciências Biológicas FCAV/UNESP GFP BFP (Y66H, Y145F, H148G) CFP (Y66W, Y145A, H148D) YFP (T203Y) RFP, etc.

7 Engenharia de Proteínas 2017 Ciências Biológicas FCAV/UNESP The Big Bang Theory

8 Engenharia de Proteínas 2017 Ciências Biológicas FCAV/UNESP

9 Engenharia de Proteínas 2017 Ciências Biológicas FCAV/UNESP Terskikh et al. Science 2000;290: Laker et al. J. Biol. Chem. 2014;289:

10 Disciplina de Engenharia de Proteínas Curso de Ciências Biológicas 2º Semestre de 2017 Aula 1: Aminoácidos, Peptídeos e Proteínas (Cap. 3-5, Lehninger 4ª Edição) Prof. Marcos Túlio de Oliveira mtoliveira@fcav.unesp.br Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias de Jaboticabal Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho

11 Proteínas Grande variedade: diferentes tipos de poucos aminoácidos a polímeros muito extensos enorme diversidade de funções biológicas a informação genética é expressa na forma de proteína

12 Proteínas

13 Aminoácidos

14 Aminoácidos Classificação baseada no grupo R: Apolares, alifáticos (hidrofóbicos) Aromáticos (hidrofóbicos) Polares, não-carregados Carregados positivamente Carregados negativamente

15 Aminoácidos Apolares, alifáticos (hidrofóbicos)

16 Aminoácidos Aromáticos (hidrofóbicos)

17 Aminoácidos Polares, não carregados

18 Aminoácidos Carregados positivamente Carregados negativamente

19 Aminoácidos Além daqueles 20...

20 Bases ou ácidos? Aminoácidos

21 Aminoácidos Curvas de titulação

22 Aminoácidos Curvas de titulação pk a (pk 1 ou pk 2 ) equilíbrio entre a forma protonada e desprotonada; mede a tendência de um grupo de oferecer um próton quanto mais baixo o pk a, mais facilmente o próton é liberado.

23 Aminoácidos Curvas de titulação

24 Aminoácidos Curvas de titulação pi (ponto isoelétrico) carga elétrica líquida é zero. ph acima do pi carregado negativamente ph abaixo do pi carregado positivamente

25

26 aminoácido + aminoácido + aminoácido = peptídeo (proteína) Peptídeos cadeias de aminoácidos Oligopeptídeos Polipeptídeos Proteínas

27 Peptídeos

28 Peptídeos

29 Proteínas

30 Proteínas

31 Proteínas

32 Proteínas A ligação peptídica é rígida e planar

33 Proteínas A ligação peptídica é rígida e planar

34 Proteínas

35 Proteínas Estrutura secundária: Conformação local de alguma parte do polipeptídeo Padrões de enovelamentos mais regulares do esqueleto polipeptídico α-hélices conformação β dobras β

36 Proteínas Estrutura secundária: α-helices

37 Proteínas Estrutura secundária: folhas β

38 Proteínas Estrutura secundária: dobras β

39 Proteínas Estrutura secundária: resumo

40 Proteínas Estrutura terciária e quaternária

41 Proteínas Fibrosas queratina

42 Proteínas Fibrosas

43 Proteínas Fibrosas Prolina ou Hidroxiprolina G-X-Y colágeno

44 Proteínas Fibrosas colágeno

45 Proteínas Fibrosas escorbuto

46 Proteínas Fibrosas fibroína da seda

47 Proteínas Fibrosas resumo

48 Proteínas Globulares

49 Proteínas Globulares mioglobina

50 Proteínas Globulares protoporfirina + Fe 2+ = heme

51 Proteínas Globulares mioglobina

52 Proteínas Globulares

53 Proteínas Globulares motivos estruturais

54 Proteínas Globulares motivos estruturais

55 Estrutura Quaternária múltiplas subunidades = multímero poucas subunidades = oligômero dímeros, trímeros, tetrâmeros, etc...

56 Estrutura Quaternária simetria rotacional X helicoidal

57 Estrutura Quaternária simetria rotacional

58 Desnaturação Protéica

59 Renaturação Protéica

60 Problemas de Dobramento Prion

61 Interação Proteína-Ligante

62 Interação Proteína-Ligante mioglobina

63 Interação Proteína-Ligante

64 Interação Proteína-Ligante concentração do ligante porcentagem dos sítios de ligação ocupados concentração constante da proteína

65 Interação Proteína-Ligante

66 Interação Proteína-Ligante a mioglobina e o oxigênio

67 Interação Proteína-Ligante a mioglobina e o oxigênio Complete a frase: um K d alto indica

68 Interação Proteína-Ligante

69 Interação Proteína-Ligante

70 Interação Proteína- Ligante

71 Interação Proteína-Ligante hemoglobina (desoxihemoglobina)

72 Interação Proteína-Ligante hemoglobina (desoxihemoglobina)

73 Interação Proteína- Ligante ligação cooperativa

74 Interação Proteína-Ligante ligação cooperativa

75 Interação Proteína-Ligante afinidade dependente de ph

76 Anemia falciforme

77 Disciplina de Engenharia de Proteínas Curso de Ciências Biológicas 2º Semestre de 2017 Próxima aula: Purificação de Proteínas e Cristalografia de Raio-X

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