Biópsia Renal Microscopia Luz Imunofluorescência Eletrônica

Transcrição

1 Ministério da Educação Universidade Federal do Triângulo Mineiro - UFTM, Uberaba, MG Disciplina de Patologia Geral Biópsia Renal Microscopia Luz Imunofluorescência Eletrônica Marlene Antônia dos Reis mareispatologia@gmail.com

2 Introdução Histórico Hipócrates ( ac.) dor lombar hematúria macroscópica oligoanúria anasarca morte

3 Marcello Malpighi Suspeita que a urina formada no rim Robert Hook microscópio

4 Introdução Histórico Rembrandt Dekkers - demonstrou proteinúria Cotunnius - confirma proteinúria Cruickshank - anasarca - renal - hepática - cardíaca

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8 Origem e tipo de material analisado Citológico sedimento urinário Punção biópsia aspirativa Anatomopatológico Biópsia Necropsia Exames: Macroscópicos Microscópicos

9 Biópsia renal percutânea - Diagnóstico, Prognóstico, acompanhamento - Selecionar o melhor tratamento Indicações - IRA insuficiência renal aguda - Proteinúria - Hematúria - Síndrome nefrítica - Síndrome nefrótica - Doença sistêmica - Transplante renal Contra-indicações - HA grave não controlada - Diátese hemorrágica

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11 Rim Nativo Rim Transplantado

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19 The Renal Biopsy Patrick D. Walker, MD Arch Pathol Lab Med. 2009;133:

20 Arch Pathol Lab Med. 2009;133: Cortex Medulla

21 Svarstad E et al.,nephron 2018;138:13 21

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23 Biópsia Renal 1996 início 2004 ampliação

24 Biópsia Renal Percutânea ME Glutaraldeído / Karnovosky + Vermelho rutênio ML paraformaldeido Formaldeído / Bouin / Metacarn IF A fresco / Meio de transporte

25 Fixadores Rápidos Bouin / Duboscq-Brasil Formaldeído Ác. Acético glacial Ác. Pícrico Álcool Metacarn - Metanol 600ml - Clorofórmio 300ml - Ác. Acético glacial 100ml Paraformaldeído

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27 Imunohistoquímica Biologia Molecular

28 Microscopia de Luz "comum"

29 Bloco congelado Processa inclusão parafina M Luz Artefatos - Evita nova biópsia Fixação: paraformaldeído Inclusão: parafina

30 Microscopia de Luz Comum: 2 µm de espessura

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34 Microscopia de Luz Comum: 2 µm de espessura

35 Compartimentos Vascular Interstitial 2 µm Tubular Glomerular

36 Rim Nativo Compartimentos Vascular Intersticial Tubular Glomerular Rim Transplantado

37 Compartimentos do parênquima renal Tubular degeneração, morte celular (apoptose, necrose), depósitos, cristais, cilindros, tubulite hipotrofia, espessamento da membrana basal Intersticial edema, infiltrado inflamatório, depósitos, fibrose, calcificação Vascular espessamentos: proliferação leiomiofibroblasto, depósitos (hialino, mucóide), fibroelástico, vasculite, necrose, trombo. Glomerular

38 Aguda Inflamação Necrose Interstício Tubular Necrose Vascular Glomerular

39 NTA Tubular

40 Aguda Inflamação Necrose Interstício Tubular Inflamação Necrose Tubulite Vascular Glomerular

41 Intersticial Tubular NTI Tubulite emperipolese

42 Aguda Inflamação Necrose Interstício Tubular Vascular Glomerular Inflamação Necrose Tubulite Vasculite Necrose

43 Vasculopatias Inflamatória - Vasculites

44 Aguda Inflamação Necrose Crônica Interstício Inflamação Tubular Necrose Vascular Tubulite Vasculite Necrose Glomerular Glomerulite esclerose ( matriz) Hipercelaridade Necrose

45 Glomerular Segmental sclerosis Global sclerosis

46 Interstício Aguda Inflamação Inflamação Necrose Crônica Tubular Necrose Tubulite Vascular Vasculite depósito hialino Necrose espes. Intimal Glomerular Glomerulite esclerose ( matriz) Hipercelaridade Necrose

47 Vascular hyaline arteriolosclerosis Artery - Fibrous intimal thickening

48 medidas em artérias (2 camadas musculares). Bosmans et al., Compartimento Vascular Áreas: Luz Íntima Média Área intimal Área média Área parede Área total artéria

49 Vasculopatias 1. Inflamatória - Vasculites 2. Não inflamatória Arterioesclerose aterosclerótica Hipertensão arterial Diabete melito Idade

50 lesado pela HAS Causa

51 Órgãos Alvos da Hipertensão Arterial Sistêmica Olho retinopatia hipertensiva encefalopatia hipertensiva cardiopatia hipertensiva nefropatia hipertensiva Doença vascular hipertensiva Aterosclerose; espessamento fibroelástico; arterioloesclerose hialina, hiperplásica e necrose fibrinóide

52 Vascular Arterioloesclerose hialina Microangiopatia trombótica

53 Aguda Inflamação Necrose Interstício Inflamação Fibrose Crônica Tubular Necrose Atrofia Tubulite Vascular Vasculite espes. intimal Necrose Glomerular Glomerulite Hipercelaridade Necrose esclerose ( matriz)

54 Interstitial fibrosis / tubular atrophy HE MT Sirius - red

55 Intersticial Fibrose Luz comum Picro-sírius, 600X Luz polarizada

56 15,81% Picro-sírius, luz polarizada 320X

57 Aguda Inflamação Necrose Interstício Inflamação Fibrose Crônica Tubular Necrose Atrofia Tubulite Vascular Vasculite espes. intimal Necrose Glomerular Glomerulite Hipercelaridade Necrose esclerose ( matriz)

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59 Compartimentos Vascular Intersticial 2 µm Tubular Glomerular

60 Espaço urinário

61 Podócitos Espaço urinário

62 Cel endoteliais Espaço urinário

63 Cel mesangiais Espaço urinário

64 Polo urinário Matriz mesangial Tricrômico Masson

65 Polo urinário Matriz Mesangial PAMS Methenamine Silver

66 Polo urinário Membrana Basal PAMS Methenamine Silver

67 Matriz mesangial tricrômico de Masson MB e Matriz mesangial PAMS prata metenamina

68 Aguda Inflamação Necrose Interstício Inflamação Tubular Necrose Tubulite Vascular Glomerular Vasculite Necrose Glomerulite Hipercelularidade Necrose

69 Normal Células Hipercelularidade

70 Células Hipercelularidade Normal Proliferação endocapilar Infiltração leucocitária

71 Células Hipercelularidade Normal Proliferação endocapilar Infiltração leucocitária Proliferação extra-capilar = crescente

72 Necrose fibrinóide

73 Necrose fibrinóide

74 Membrana Basal ruptura Normal

75 Membrana Basal ruptura Normal duplicação

76 Membrana Basal ruptura Normal duplicação espículas

77 segmentar Matriz mesangial esclerose GESF Diabetes Doença de cadeia leve global

78 Número glomérulos Focal < 50% No glomérulo Segmentar Difuso 50% Global Células Matriz Mesangial Membrana Basal

79 Biópsia Renal ME-2gl Glutaraldeído / Karnovsky + Vermelho rutênio ML-10 gl paraformaldeido Formaldeído / Bouin / Metacarn

80 Mínimo: 2 glomérulos ganha resolução perde em representatividade Microscopia Eletrônica Fixação: glutaraldeído - 2,5% / Karnovosky + vermelho rutênio Pós-fixação: tetróxido de ósmio Inclusão: resina

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84 Corte semi-fino: 0,5 micrômetros coloração: azul de toluidina

85 Corte fino (ultrafino): 60 nanômetros

86 Corte semi-fino 0,5 micrômetros coloração: azul de toluidina Corte ultra-fino 60 nanômetros Mínimo: 2 glomérulos ganha resolução Contrastada: Acetato de uranila Citrato de chumbo

87 Mesângio Hemacia Endotélio Luz capilar Luz capilar - Diagnósticos: - Alt célula - Memb basal - Matriz mesangial - Depósitos estruturados Podócito Espaço urinário - Entidades sobrepostas - Afastar entidades Endotélio Luz capilar Hemacia

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89 Barreira de Filtração Glomerular Tryggvason et al., 2006

90 Componentes da barreira de filtração glomerular

91 Podocyte capillary Endothelial cell

92 Cápsula de Bowman Luz capilar Espaço urinário Luz capilar Polo urinário Células Matriz Mesangial Membrana Basal

93 Podocyte capillary Podocyte urinary space B memb Endothelial cell capillary

94 Foot process B memb nm

95 Foot process Foot process B memb nm Urinary space 6nm 25-60nm B memb Foot process

96 Foot process Foot process B memb nm Urinary space 6nm 25-60nm B memb Foot process

97 Biópsia Renal ME-2gl Glutaraldeído / Karnovsky + Vermelho rutênio ML-10 gl paraformaldeido Formaldeído / Bouin / Metacarn

98 Biópsia Renal ME-2gl Glutaraldeído / Karnovsky + Vermelho rutênio ML-10 gl paraformaldeido Formaldeído / Bouin / Metacarn IF-10gl IC/compl A fresco / Meio de transporte

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101 Imunofluorescência BR061014

102 Imunofluorescência Direta - IF - IgA - IgG - IgM - Kappa - Lambda - C1q - C3 - Fibrinogen - Controle negativo - HE

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104 Pesquisa de Imunocomplexos Imunofluorescência Direta IF: 10 glom - IgA - IgG - IgM - Kappa - Lambda - Fibrinogênio - C1q - C3 - Controle negativo

105 - IgA - IgG - IgM - Kappa - Lambda - Fibrinogênio - C1q - C3 Normal

106 Biópsia Renal ME-2gl Glutaraldeído / Karnovsky + Vermelho rutênio ML-10 gl paraformaldeido Formaldeído / Bouin / Metacarn IF-10gl IC/compl A fresco / Meio de transporte - IgA - IgG - IgM - Kappa - Lambda - Fibrinogênio - C1q - C3

107 Cápsula de Bowman Luz capilar Espaço urinário Luz capilar Polo urinário Células Matriz Mesangial Membrana Basal

108 Imunocomplexos: - Circulantes - Formação in situ

109 Imunocomplexos: - Circulantes - Formação in situ

110 Mesângio Eixo mesangial Nefropatia IgA Nefrite Lúpica: classes I e II Anel GNMP II

111 Alça Capilar finamente granular pseudo-linear Glomerulopatia Membranosa Nefrite Lúpica: classe V

112 GNDA Alça Capilar granular grosseiro humps

113 Alça Capilar periférico GNMP I

114 Bloco congelado processa M Eletrônica Artefatos - Evita nova biópsia Fixação: glutaraldeído - 2,5% Pós-fixação: tetróxido de ósmio Inclusão: resina

115 M eletrônica X

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117 Biópsia Renal M IF M Elet M Luz DDD

118 linear Alça Capilar GN anti membrana basal glomerular GN crescêntica tipo I

119 Glomerulonefrite crescêntica 50% dos glomérulos Tipo I - ac anti MBG Tipo II depósito imune Tipo III - pauci-imune (imunocomplexo) - necrotizante 90% ANCA circulante (ac anti citoplasma de neutrófilo - mieloperoxidade, MPO e proteinase 3, PR3) vasculite pequenos vasos: - capilares - pulmão e glomérulo 10% - limitado ao rim

120 Número glomérulos Focal < 50% No glomérulo Segmentar Difuso 50% Global Células Matriz Mesangial Membrana Basal

121 Guthrie 1912 Kendall & Hertz 1927 associação de surdez com a nefrite hemorrágica familiar hereditária Homem: mais grave Mulher: menos grave Arthur Cecil Alport ( ) África do Sul Londres - Inglaterra 1972 Spear & Slusser defeito colágeno da membrana basal glomerular

122 Microscopia Eletrônica Memb basal

123 Endotélio Memb basal Luz Capilar Memb basal Podócito Espaço urinário Normal Síndrome de Alport Hematúria

124 Colágeno IV Cadeia cromossomo gene 1 13q34 COL4A1 2 13q34 COL4A2 3 2q35 COL4A3 4 2q35 COL4A4 5 Xq22 COL4A5 6 Xq22 COL4A6

125 α5col IV Alport Ausência α5col IV

126 Diabetes Mellitus Hiperglicemia Nefropatia Retinopatia Neuropatia Vaculopatia Vasculares Membrana basal Hialinose arteríola Aterosclerose

127 Podócito Espaço urinário Espaço Podócito urinário Luz capilar Memb basal Memb basal Hemácia Luz capilar MBG = 300 a 400nm normal (mulher-395nm; homem-430nm) Diabetes: 1,5 a 2,5 anos - aumento da espessura - fases iniciais=1200nm. - avançado: 3000 a 4000nm Nefropatia Dibética

128 Sociedade Patologia Renal J Am Soc Nephrol 21: , 2010.

129 Nefropatia Diabética Classe III BR110660_TM, 20x2,0 BR110660_HE, 20x2,0 Sem IC Vermelho congo negativo

130 Sociedade Patologia Renal J Am Soc Nephrol 21: , 2010.

131 Fioretto & Mauer, 2007

132 Diabetes Mellitus capsular drop - fortemente sugestivo de diabetes - hialinose entre MB e epitélio da cápsula de Bowman - prata negativo fibrin cap - entre MBG e endotélio - proteinas e lipideo

133 - Afastar outras entidades IF - Diagnósticos - Doenças sobrepostas - Diagnóstico ND classe I - Diagnósticos ME - Doenças sobrepostas

134 10 µm - Vermelho Congo

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136 Vermelho Congo 1 e 2: mais espessa 7 a 10 µm permanganato de potássio outra não

137 Luz polarizada Luz comum Vermelho congo, 1.800X

138 Vermelho congo, 1.000X Luz comum 1 - Normal 2 - Pré-tratamento permanganato de potássio Luz polarizada

139 Picro Sirius, X20x2,0 PAMS, X20x2,0 HE X20x1,6 T Masson, X20x2,0

140 Vermelho Congo Luz comum Amiloidose Luz Polarizada

141 -fibrilose Amiloidose 8-12nm EM X

142 Amiloidose produção Doenças Inflamatórias (com ou sem infecção) degradação Alt Imune Hereditárias (mutação)

143 Amiloidose Renal Amiloidose sistêmica > 30 Proteínas amiloidogênicas São conhecidas AL light chain Ig AA Serum Protein A Aβ2M β2 microglobulin ALECT2 Chemotactic Factor Leucocyte 2 AFib A alfa-chain fibrinogen ATTR transtiretin AApoAI Apolipoprotein AI AApoAII Apolipoprotein AII ALys lysozyme AGel Gelsolin ACys Cystatin C Picken MM - Arch Pathol Lab Med 134: ; Herrera GA et al., Arch Pathol Lab Med 134: ; Matsumoto S et al. Amyloid. Mar;24(sup1):97-98;2017

144 Pesquisa de Imunocomplexos Imunofluorescência Direta - IgA - IgG - IgM - Kappa - Lambda - Fibrinogênio - C1q - C3

145 BR Glu526Val Mutação um alelo

146 10 µm - Vermelho Congo

147 Luz capilar depósito Memb basal depósito Mesângio Memb basal Memb basal depósito Pedicelo podócito Espaço urinário depósito depósito Luz capilar Sem IC Vermelho congo negativo Glomerulopatia por Fibronectina

148 3.000X X

149 Pesquisa de Imunocomplexos - IC Fluorescência natural Controle negativo

150 Pesquisa de Imunocomplexos - IC Fluorescência natural Controle negativo Lipídeos

151 Sudan

152 Doenças de Depósitos em Lisossomos (deficiência enzimática) - Doença de Gaucher - glicosilceramidase - Doença de Fabry alfa-galactosidase - Doença de Niemann-Pick - esfingomielinase - Doença de Tay-Sachs - hexosaminase A Finn LS. Renal disease caused by inborn errors of metabolism, storage diseases...; Heptinstall s, ; 2014

153

154 Endotélio lisossomo Endotélio Lisossomo Espaço urinário Hemácia Luz capilar Pedicelo Lisossomo Memb basal Pedicelo Lisossomo Podócito Lisossomo

155 Tto para GESF há 10 anos

156 Tto para GESF há 10 anos biópsia anterior sem ME História familiar: Um irmão IRC recebeu TX mãe e perdeu

157 Mesângio Endotélio Hemácias Deficiência de Lecitina Colesterol Acil Transferase LCAT Halo claro no olho = olho de peixe; esplenectomia, HDL baixo

158 Cover images 2015; 10(9) Deficiência de Lecitina Colesterol Acil Transferase LCAT Halo claro no olho = olho de peixe; esplenomegalia, HDL baixo

159 Von Kossa

160 Doença Renal Crônica Glomerulopatia crônica 90% glomérulos com esclerose global Fibrose intersticial e atrofia tubular

161 Transplante renal ao longo do tempo Transplante Perda Enxerto

162 Rim Nativo Compartimentos Vascular Intersticial Rim Transplantado Tubular Glomerular

163 Rim Nativo Lesões provenientes do doador Rim Transplantado

164 Transplante renal ao longo do tempo Transplante Perda Enxerto Doença /Lesões doador Isquemia NTA

165 Transplante renal ao longo do tempo Perda Enxerto Transplante Rejeição Aguda (celular/humoral) Rejeição subclínica (celular/humoral) Rejeição crônica (celular/humoral) Doença /Lesões doador Isquemia NTA

166 Transplante renal ao longo do tempo Perda Enxerto Transplante Rejeição Aguda (celular/humoral) Rejeição subclínica (celular/humoral) Rejeição crônica (celular/humoral) Doença /Lesões doador Isquemia NTA Nefrotoxicidade

167 Rim Nativo Doença recorrente doença do rim nativo aparece no transplante GESF DDD Rim Transplantado

168 Rim Nativo Doença de novo doença no transplante diferente da doença no rim nativo Rim Transplantado

169 Transplante renal ao longo do tempo Perda Enxerto Transplante Rejeição Aguda (celular/humoral) Rejeição subclínica (celular/humoral) Rejeição crônica (celular/humoral) Doença /Lesões doador Isquemia NTA Nefrotoxicidade Doença recorrente Doença de novo

170 Transplante renal ao longo do tempo Perda Enxerto Transplante Rejeição Aguda (celular/humoral) Rejeição subclínica (celular/humoral) Rejeição crônica (celular/humoral) Doença /Lesões doador Isquemia NTA Doença recorrente Doença de novo Nefrotoxicidade Imunossupressão: Infecções: NTI - Nefrite Polioma vírus Neoplasias: Doença linfoproliferativa Epiteliais

171 Biópsia Renal ME-2gl Glutaraldeído / Karnovsky + Vermelho rutênio ML-10 gl paraformaldeido Formaldeído / Bouin / Metacarn IF-10gl IC/compl A fresco / Meio de transporte - IgA - IgG - IgM - Kappa - Lambda - Fibrinogênio - C1q - C3

172 Biópsia Renal Luz comum Imunofluorescência Monga et al., 1990 Eletrônica

173 Informações Clínicas

174 2

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176 2

177 2

178 marpe.blogspot.com Microscopias Luz, IF, ME

179 9 www2.uftm.edu.br/patge

180 Disciplina de Patologia Geral Universidade Federal Triângulo Mineiro Multidisciplinar/profissional Biólogo Biomédico Bioquímico Farmacêutico Dentista Fisioterapeuta Enfermeiro Médico Nutricionista Veterinário Zootecnista

181 1 Juliana Marlene Lívia Liliane Maria Luiza Crislaine

182 Ministério da Educação Universidade Federal do Triângulo Mineiro - UFTM, Uberaba, MG Disciplina de Patologia Geral Biópsia Renal Microscopia Luz Imunofluorescência Eletrônica Marlene Antônia dos Reis mareispatologia@gmail.com