Imunologia Aplicada. Sorologia

Transcrição

1 Imunologia Aplicada Sorologia

2 Importância da pesquisa de Anticorpos no diagnóstico individual 1. Elucidar processos patológicos 2. Diferenciar a fase da doença 3. Diagnosticar doença congênita 4. Selecionar doadores de sangue 5. Selecionar doadores e receptores de órgãos 6. Auxiliar no prognóstico da doença 7. Avaliar a eficácia da terapêutica 8. Verificar o agravamento da patologia 9. Avaliar a imunidade específica naturalmente adquirida ou artificialmente induzida

3 Importância da pesquisa de anticorpos em Inquéritos soroepidemiológicos 1. Estabelecer a prevalência da doença 2. Verificar a Incidência da doença 3. Verificar a erradicação da doença 4. Verificar a reintrodução de novos casos em áreas consolidadas

4 Importância dos Testes sorológicos na pesquisa de antígenos 1. Como critério de Cura 2. Na definição da etiologia da doença 3. Na seleção de doadores de sangue 4. Em inquéritos epidemiológicos

5 Parâmetros para a validação de um teste sorológico

6 Testes sorológicos Define a presença ou a ausência da doença no paciente GOLD STANDARD TEST Mais próximo do verdadeiro estado clínico do paciente

7 Parâmetros para a validação de um teste sorológico Validade Intrínseca : desempenho de um teste quando comparado com o teste de referência Sensibilidade Especificidade Eficiência Validade Extrínseca : real situação da população + desempenho do teste Precisão Acurácia ou Exatidão Reprodutibilidade

8 Combinação binária entre resultados prováveis em um determinado teste e o diagnóstico verdadeiro da doença TESTE DOENÇA - Diagnóstico verdadeiro POSITIVO PRESENTE Verdadeiros positivos (VP) AUSENTE Falsos positivos (FP) NEGATIVO Falsos negativos (FN) Verdadeiros negativos (VN) TOTAL VP+FN FP + VN Sensibilidade Especificidade

9 Porcentagem correta de resultados dos testes verdadeiros positivos e negativos Eficiência = VP + VP VP + VN + FP + FN

10 Parâmetros para a validação de um teste sorológico Validade Intrínseca : desempenho de um teste quando comparado com o teste de referência Sensibilidade Especificidade Eficiência Validade Extrínseca : real situação da população + desempenho do teste Precisão Acurácia ou Exatidão Reprodutibilidade

11 Validade Extrínseca Precisão: Concordância dos resultados obtidos quando um mesmo teste é feito várias vezes (Erro acidental) Exatidão ou Acurácia: Capacidade do teste em fornecer resultados muito próximos ao verdadeiro valor do que se esta medindo.

12 Validade Extrínseca EXATO E NÃO PRECISO EXATO E PRECISO NÃO EXATO E NÃO PRECISO PRECISO

13 Validade Extrínseca Precisão: Concordância dos resultados obtidos quando um mesmo teste é feito várias vezes (Erro acidental) Exatidão ou Acurácia: Capacidade do teste em fornecer resultados muito próximos ao verdadeiro valor do que se esta medindo ("Gold Standard"). Reprodutibilidade: Capacidade de se obter resultados iguais em testes realizados com a mesma amostra biológica mas realizadas por pessoas diferentes em locais diferentes Intrateste : replicatas do mesmo material Interteste: Dias diferentes e em laboratórios diferentes

14 Parâmetros para a validação de um teste sorológico Validade Intrínseca : desempenho de um teste quando comparado com o teste de referência Sensibilidade Especificidade Eficiência Validade Extrínseca : real situação da população + desempenho do teste Precisão Acurácia ou Exatidão Reprodutibilidade

15 Aplicação de Testes Diagnósticos Limiar de Reatividade ou cut off - Região de Corte Valor acima do qual os resultados são considerados positivos e indicam os doentes Valor abaixo do qual os resultados são considerados negativos e indicam os não doentes Para cada cut off estabelecido teremos uma sensibilidade e uma especificidade diferentes

16 CURVA DE DISTRIBUIÇÃO DA FREQUÊNCIA DE TÍTULOS NORMALMENTE OBSERVADA NA POPULAÇÃO

17 Banco de sangue teste para detectar... Ponto de máxima sensibilidade (FP)

18 Laboratório de análises:teste para detectar... Doença de alta prevalência Ponto de máxima especificidade (FN)

19 Sensibilidade: verdadeiros positivos". Testes com alta sensibilidade ( 99%) podem, ao se obter resultado negativo, excluir a presença da condição ou doença. Especificidade "verdadeiros negativos". Testes com alta especificidade ( 99%) e que são negativos em indivíduos sadios ou que apresentam sintomas similares mas não apresentam a condição/doença, são muito úteis para confirmar o diagnóstico.

20 Testes Sorológicos

21 Produção de Anticorpos Testes sorológicos

22 Síntese de Anticorpos Policlonais Proteína Imunização Anticorpos Resposta Imune Baço B B B B B B B B

23 Síntese de Anticorpos Monoclonais 1975 Cesar Milstein Nobel Medicina 1984 Georges Khöler

24 Síntese de Anticorpos Monoclonais Fusão B B B B M M M M polietilenoglicol B B B B HAT M H H B H H H H H

25 Policlonal x Monoclonal Policlonal Monoclonal Anticorpos heterogêneos Responde a epítopos diferentes do Ag Diferentes afinidades Podem ser de Classes diferentes Célula B Não Prolifera em Cultura Anticorpos Homogêneos Respondem a um único epítopo do Ag Maior afinidade Pertencem a uma única Classe Hibridoma Prolifera em Cultura

26 MAB Identificação de marcadores fenotípicos Imunodiagnóstico Diagnóstico e terapia de tumores Análise funcional de moléculas de superfície e secretadas